促酰化蛋白诱导的前脂肪细胞分化过程中转录因子表达的时序性研究

目的：观察促酰化蛋白（ASP）诱导3T3-L1前脂肪细胞的分化过程，转录因子PPARγ、C/EBPδ、C/EBPα mRNA表达的强度及时序性。 方法： 以3T3-L1前脂肪细胞为实验对象，用ASP代替经典激素鸡尾酒诱导刺激中的胰岛素，即促酰化蛋白、1-甲基-3-异丁基黄嘌呤和地塞米松（ASP+IBMX+DEX）诱导3T3-L1前脂肪细胞分化，分别在诱导分化1 d、2 d、4 d、6 d、8 d收获细胞，采用RT-PCR法检测ASP诱导3T3-L1前脂肪细胞分化过程中转录因子PPARγ、C/EBPδ、C/EBPα mRNA表达的情况。 结果： PPARγ mRNA在诱导分化1 d时有低水平表达，在诱导分化过程中表达逐步升高，在终末分化阶段仍保持高水平表达。C/EBPδ mRNA在诱导分化1 d时有中等水平表达，在诱导分化2 d时表达水平最高，诱导分化4 d时表达明显减少，在诱导分化6 d和8 d，检测不到C/EBPδ mRNA的表达。C/EBPα mRNA在诱导分化1 d仅有低水平表达，在诱导分化过程中表达逐步升高，在终末分化阶段仍保持高水平表达。IBMX+DEX诱导前脂肪细胞分化过程中，PPARγ、C/EBPδ和C/EBPα mRNA分化早期也有一定升高，但明显低于ASP诱导的转录因子的表达。 结论： ASP对转录因子C/EBPδ、C/EBPα和PPARγ表达的时序性影响，可能是ASP诱导前脂肪细胞分化的重要分子机制之一。     

人脐带间充质干细胞向成骨细胞及脂肪细胞分化过程中nm23-H1基因的表达****

背景：nm23-h1基因已被证实与多种细胞的增殖、分化、转移密切相关。 目的：观察人脐带间充质干细胞在体外向成脂及成骨方向诱导分化的过程中nm23-H1基因的表达变化。 方法：采用组织块贴壁法从脐带中分离培养人间充质干细胞,流式细胞术鉴定其表型,之后分别加入成脂肪诱导剂和成骨诱导剂进行体外诱导分化。对照组采用不含诱导因子的培养液进行培养。 结果与结论：在成脂诱导过程的第4天,nm23-H1 mRNA的表达上调,至第7天达到最高(P < 0.01),其后开始逐渐恢复,直至第14天与对照组相比无显著差异(P > 0.05)。而在成骨诱导过程中,nm23-H1 mRNA则一直为低表达状态(P < 0.01),直至第28天恢复为对照组水平(P > 0.05)。结果显示nm23-H1基因表达在成脂分化前期发生上调,而在成骨分化过程中一直下调。     

脂肪细胞与肿瘤转移的关系研究进展

肥胖是威胁人们健康的主要慢性疾病之一,主要由脂肪组织扩增引起。在人体,脂肪组织是一个动态的内分泌器 官,负责能量稳态。过度肥胖通常会导致代谢紊乱、类固醇激素分泌改变、慢性亚临床炎症以及增加多种肿瘤的发病风险。肿 瘤细胞与脂肪细胞的微环境之间存在密切关系,一方面,脂肪细胞来源的细胞因子,如趋化因子配体 2、白介素⁃6、肿瘤坏死因 子 α、瘦素和脂联素等,可通过激活不同的信号通路促进肿瘤的侵袭转移能力;脂肪细胞来源的游离脂肪酸及脂滴可通过 FABP4、CD36等转运蛋白转移到肿瘤细胞中,提高肿瘤β氧化速率,产生大量能量,促进肿瘤细胞分裂增殖;另一方面,脂肪细 胞可使Treg细胞、CD8+ 细胞毒性T细胞、巨噬细胞发生代谢重编程,促进Treg细胞及M2型巨噬细胞增殖,抑制CD8+ 细胞毒性T 细胞杀肿瘤活性,从而导致肿瘤免疫逃逸;使中性粒细胞重编程,破坏血管内皮细胞的黏附,导致血管壁渗透性增加,有利于肿 瘤细胞穿过血管壁,转移到远处。本文主要探究脂肪细胞与肿瘤转移的关系,旨在为肿瘤治疗提供新的靶点。     

人骨髓基质干细胞体外诱导和鉴定

目的建立人自体骨髓基质干细胞(human menchymal stem cells,hMSCs)体外分离、鉴定体系,建立经诱导表达成骨、软骨、脂肪细胞表型的体外培养体系,探讨作为骨组织工程种子细胞的可能性,为组织工程技术应用打下基础。方法抽取患者骨髓5ml,以密度梯度法分离hMSCs,使用流式细胞仪鉴定细胞表型;应用免疫组化和分子生物学技术,对hMSCs进行成骨、软骨、脂肪细胞的诱导培养和表型鉴定。结果第2代hMSCs阳性细胞表达率CD105(78±6)%,CD166(43±7)%,CD29(69±12)%;hMSCs成骨诱导培养第3代平均扩增(163.4±13.4)倍,形成钙结节,骨细胞转录因子、骨钙素、骨桥蛋白和I型胶原免疫荧光阳性,RT-PCR证实有I型胶原、骨钙素、骨桥蛋白和骨结合素mRNA表达,对照组阴性;成软骨细胞诱导培养后II型胶原、SOX9(SRY-type HMGbox9,是在哺乳动物性别决定和软骨生成中起着关键调控作用的一个基因)。免疫荧光阳性,RT-PCR证实II型胶原、软骨聚集蛋白聚糖mRNA表达,对照组阴性;成脂肪细胞诱导培养后,油红-O染色阳性,RT-PCR证实PPAR2 mRNA...     

小鼠脐带间充质干细胞的体外诱导分化

目的分离扩增小鼠脐带间充质干细胞（mouse umbilical cord mesenchymal stem cells,mUCMSCs）探讨其是否可诱导成软骨、脂肪和成骨细胞。方法 通过贴壁培养法将mUCMSCs体外分离、扩增、纯化,倒置显微镜下观察细胞的形态特征,运用流式细胞仪检测分析细胞的抗原标志表达进行鉴定。运用诱导培养液对分离的mUCMSCs分别定向诱导培养为软骨、脂肪和成骨细胞。结果 运用组织贴块培养法可从新鲜脐带中分离到贴壁生长的成纤维样细胞,这些细胞高表达CD29、CD90和CD105,低表达CD34。成软骨诱导后阿新兰染色呈蓝色;成脂诱导后油红O染色,出现红色脂滴;茜红素染色成骨诱导的mUCMSC,可见红色结节。结论 贴壁培养法分离培养所获得的mUCMSCs在体外可诱导分化为软骨、脂肪和成骨细胞。     

Apelin-13对高尿酸诱导的脂肪细胞氧化应激的作用

目的:探讨apelin-13对高尿酸诱导的3T3-L1脂肪细胞氧化应激的作用及其机制。方法:3T3-L1脂肪细胞予以10 mg/dL尿酸刺激,部分细胞予以1μmol/L apelin-13预处理,以100μmol/L H₂O₂刺激的细胞为阳性对照。48 h后,流式细胞术检测活性氧族(ROS)含量,生化试剂盒检测细胞及培养液上清抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)]和促氧化酶NADPH氧化酶(NOX)的活性以及丙二醛(MDA)含量,real-time PCR法检测细胞局部肾素-血管紧张素系统(RAS)各组份血管紧张素原(AGT)、血管紧张素转化酶I(ACE1)、血管紧张素II 1型受体(AT1R)和AT2R及血管紧张素II 1型受体相关蛋(APJ)的mRNA表达水平,ELISA法检测细胞及培养液中血管紧张素II(AngⅡ)浓度。结果:10 mg/dL的尿酸明显降低3T3-L1脂肪细胞SOD、GSH-Px和CAT的活性,升高NOX的活性,增加MDA的含量,细胞内ROS的含量相应升高;apel...     

丹参酮ⅡA在3T3-L1脂肪细胞中促进脂联素的组装(英文)

目的:研究丹参酮IIA对3T3-L1脂肪细胞中脂联素表达和蛋白多聚化的作用。方法:用油红染色鉴定3T3-L1脂肪细胞的分化状态。用Real-time PCR检测基因的mRNA表达水平。用2%15%梯度SDS-PAGE及Western blot检测脂联素三种聚体。用siRNA技术进行基因沉默。结果:本研究发现传统中药丹参中的萘醌二萜类成分丹参酮IIA在脂肪细胞中激活AMPK通路,同时抑制脂肪细胞分化,降低脂联素的表达。而在前体脂肪细胞分化过程或成熟脂肪细胞中加入丹参酮IIA进行处理,均明显促进脂联素的多聚化,增加高聚体的浓度。抑制AMPK通路能够解除丹参酮IIA对脂联素的作用。结论:丹参酮IIA通过激活AMPK在3T3-L1脂肪细胞中促进脂联素的组装。     

不同来源人脂肪细胞脂联素分泌比较及干预研究

目的分析不同部位(腹部皮下、内脏网膜)人脂肪细胞脂联素分泌有无差异及游离脂肪酸(FFAs)、罗格列酮(RSG)干预后的改变。方法取6例外科手术女性患者的网膜及皮下脂肪组织,胶原酶消化分离纯化成熟脂肪细胞。观察两部位来源细胞在基础状态下不同时点(4、6、12、24h)脂联素分泌浓度的差异及加入FFAs(PA0.5mmol/L+OA1.0mmol/L)、FFAs+RSG(PA0.5mmol/L+OA1.0mmol/L+RSG10μmol/L)培养24h后脂联素浓度差异。结果整体上,网膜脂肪细胞基础脂联素分泌较皮下高,平均高5%,但差异无统计学意义。以基础脂联素分泌作对照,培养24h后,在网膜脂肪细胞,FFAs抑制脂联素分泌,脂联素浓度降至对照组66%,加入RSG联合培养后,逆转至对照组97%(P<0.05);而在皮下脂肪细胞,FFAs对脂联素分泌无抑制作用,RSG亦无促进脂联素分泌。结论人网膜脂肪细胞与皮下脂肪细胞在基础状态下脂联素分泌无差别,但在FFAs和(或)RSG介导的脂联素分泌中存在异质性。     

脂肪颗粒移植修复腔隙性软组织缺损的疗效观察

目的观察自体脂肪颗粒移植修复肢体腔隙性软组织缺损的临床效果。 方法2017年9月至2019年6月，选择武汉大学中南医院创伤与显微骨科收治的14例腔隙性软组织缺损病例，缺损面积：1.5 cm×2.0 cm ～ 4.0 cm×6.0 cm，缺损深度：3.0～7.0 cm。彻底清创后制备自体脂肪颗粒，采用Coleman法制备脂肪颗粒，将脂肪颗粒注射到缺损周围软组织内并填充于腔隙内，表面覆盖凡士林纱布，每周打开凡士林纱布观察组织缺损部位变化，连续随访了解创面修复情况至创面愈合。 结果所有患者均获得12周随访，组织缺损部位在治疗后2周观察到大量肉芽组织生长，缺损面积缩小约(47.5±5.5)%。12例在治疗后皮肤软组织缺损面积缩小直接愈合，平均愈合时间(24.2±4.5) d；1例皮肤软组缺损伴骨质缺损在治疗后1周，部分移植脂肪坏死，行局部皮瓣移植术后愈合；1例术后5 d感染脂肪液化坏死，实施清创术控制感染后换药愈合。 结论脂肪颗粒移植对肢体腔隙性软组织具有修复作用，能够促进肉芽组织生长，加速软组织缺损重建。