Effect of dehydroepiandrosterone on insulin sensitivity in Otsuka Long-Evans Tokushima-fatty rats

In order to clarify the effect of dehydroepiandrosterone (DHEA) on improvement of insulin resistance, we examined the effects of overexpression of wild-type protein kinase C-ζ (wt-PKCζ)/3-phosphoinositide-dependent protein kinase-1 (wt-PDK1) and kinase-inactive PKCζ/PDK1 (ΔPKCζ/ΔPDK1) on DHEA-induced [³H]2-deoxyglucose (DOG) uptake using the electroporation method in rat adipocytes. Overexpression of wt-PKCζ and wt-PDK1 significantly increased in DHEA-induced [³H]2-DOG uptake. Wortmannin completely suppressed DHEA-induced [³H]2-DOG uptake in wt-PKCζ- and wt-PDK1-transfected adipocytes. Overexpression of neither ΔPKCζ nor ΔPDK1 increased DHEA-induced [³H]2-DOG uptake. Otsuka Long-Evans fatty rats (OLETF), animal models of type 2 diabetes, and Long-Evans Tokushima rats (LETO) as control, were treated with 0.4% DHEA for 2 weeks. Insulin-induced [³H]2-DOG uptakes, activations of PI 3-kinase and PKCζ of adipocytes were significantly increased in DHEA-treated OLETF rats. Moreover, plasma glucose levels in OLETF rats after treatment with DHEA for 2 weeks were significantly lower than treatment without DHEA, but not in LETO rats. These results indicate that DHEA treatment may improve glucose tolerance through a PI 3-kinase-PKCζ pathway and downregulates adiposity in OLETF rats.     

脂肪分泌物对脂肪间充质干细胞的诱导研究

目的研究脂肪分泌物对脂肪间充质干细胞(ADSCs)的诱导作用,探讨脂肪再生机制。方法利用组织块贴壁法和细胞流式技术分离、鉴定ADSCs,收集含有脂肪分泌物的培养基(CM)作为条件培养基并用来诱导ADSCs(CM诱导组),化学培养基诱导组作为阳性对照组,用普通培养基组作为空白对照组,通过细胞形态学观察脂滴的形成和Real-time PCR技术在基因水平上对其可靠性进行体外验证。用可溶性明胶海绵作为ADSCs的支架来研究脂肪分泌物在体内对ADSCs的诱导作用,并作HE切片观察。结果流式细胞术证实所培养的细胞为ADSCs。在体外实验中,CM诱导4d时,CM诱导组中的ADSCs胞浆内出现了明显的脂滴,Real-time PCR显示,与空白对照组比较,相关的成脂基因mRNA表达量也明显增加(P<0.05);体内实验HE染色结果可以观察到CM诱导组中有明显的血管化生成。结论脂肪组织分泌物中可能含有能诱导ADSCs分化形成成熟脂肪细胞以及血管化的目标因子。     

人内脏与皮下脂肪细胞蛋白表达谱的差异分析

目的比较人内脏与皮下脂肪细胞蛋白表达的差异。方法采用双向凝胶电泳及质谱技术筛选差异蛋白。结果两组蛋白点的匹配率为r=0·71。灰度值有显著性差异的有82个点(P<0·05)。选择差异相差5倍以上的10个点用于质谱分析,确认了6个差异表达的蛋白质,分别与胰岛素信号转导、细胞分化及脂代谢关系密切。结论差异蛋白可能在腹型肥胖相关疾病中发挥一定作用,为进一步明确内脏脂肪的危害性提供了研究思路。     

Insulin receptors in adipocytes of non-diabetic and diabetic subjects. Preliminary report

Summary We have measured insulin binding to human adipocytes isolated from subcutaneous adipose tissue removed during surgery in normal and insulin-independent diabetics. Collagenase digestion,¹²⁵I-monoiodoinsulin and Scatchard’s plot were employed to analyze the results. Different kinetic patterns emerged together with differences in the dissociation constant and receptor numbers: in normal subjects K₁ was 4 × 10⁻⁹ moles/l and K₂ 0.5 × 10⁻⁸ moles/l, and in diabetic subjects K₁ was 2.24 × 10⁻⁹ moles/l and K₂ 0.52 × 10⁻⁸ moles/l; the two classes of receptors were 100,000 and 300,000 per cell in normals and 50,000 and 180,000 in diabetics. It was clear that even slight diabetes leads to receptor deficiency in adipocytes, though it could not be determined whether this a primary, perhaps genetic, defect or secondary to antibody damage, as suggested by some workers. Feed-back between circulating insulin and specific receptor availability in cells is another possibility.     

犬骨髓间叶干细胞的分离培养和生物学特性

目的 建立犬骨髓间叶干细胞的体外分离、培养、扩增与鉴定方法，了解其生物学特性，为心肌梗死、心力衰竭及缓慢性心律失常的干细胞移植提供细胞材料。方法 抽取犬骨髓液10ml，以DMEM1：1稀释，用1.063g／ml percoll密度分离液，以600g离心力、30min分离骨髓单个核细胞；以LG-DMEM及10% FBS添加100U／ml青霉素，100μg／ml链霉素，25μg／ml两性霉素B培养骨髓干细胞；利用细胞贴壁筛选法分离、培养、扩增骨髓间叶干细胞；应用干细胞表面标志蛋白检测，诱导剂诱导分化间叶组织细胞等方法进行犬骨髓间叶干细胞的鉴定。结果 分离出的犬骨髓单个核细胞约占细胞总数的10^-4～10^-6，在LG-DMEM与选择性血清培养基上生长良好。犬骨髓间叶干细胞孵育24h即可见细胞贴壁生长，贴壁细胞约占接种单个核细胞总数的10^-6。犬骨髓间叶干细胞增殖分裂迅速，38～48h内增殖多个细胞，约72h即可增殖形成大的细胞克隆，7～1Od即可布满瓶底。细胞融合时类似成纤维细胞，呈纺锤状，细胞小而密集，螺旋梳状排列。连续培育10代以上，未见细胞形态、增殖特性发生改变。未见骨髓间叶干细胞自发分化其它类型细胞，仍维持原代培养细胞的增殖特性。犬骨髓间叶干细胞的表面标志SH2阳性，CD45则阴性。在化学诱导液的作用下，犬骨髓间叶干细胞能定向分化为心肌细胞、脂肪细胞、成骨细胞等多种间叶组织类型细胞。结论 密度梯度分离法与贴壁筛选法能较好地进行犬骨髓间叶干细胞的体外分离、培养与扩增，犬骨髓间叶干细胞具备易于分离培养，巨大增殖潜力，独特细胞表型，多系分组能力等细胞生物学特性。为心肌梗死、心力衰竭与心律失常的细胞移植修复治疗提供了理想细胞材料。     

性激素对3T3-L1脂肪细胞Visfatin表达的影响

目的 观察雌二醇、睾酮和孕酮对3T3-L1脂肪细胞Visfatin mRNA和蛋白表达的影响.方法 10-8mol/L～ 10-6 mol/L 雌二醇、睾酮或孕酮作用于3T3-L1成熟脂肪细胞和前脂肪细胞,孵育过夜后收集细胞,分别采用RT-PCR和Westem blot检测Visfatin mRNA和蛋白的表达情况.结果 在3T3-L1成熟脂肪细胞,与对照组相比,雌二醇和睾酮分别使Visfatin mRNA表达增加24％(1.74±0.31比1.40 ±0.18,P＜0.05)和28％(1.65±0.90比1.29±0.69,P＜0.05);而孕酮不影响成熟脂肪细胞Visfatin mRNA表达.雌二醇轻度增加成熟脂肪细胞Visfatin蛋白表达,但无统计学差异;10-6 mol/L睾酮使成熟脂肪细胞Visfatin蛋白表达增加134％(0.61±0.40比0.26±0.05,P＜0.05).与雌二醇和睾酮不同,孕酮使成熟脂肪细胞Visfatin蛋白表达下调32％(0.19±0.02比0.28±0.02,P＜0.05).在前脂肪细胞,与对照组相比,10-7 mol/L和10-6mol/L雌二醇使Visfatin mRNA表达增加70％(1.04±0.38比0.61±0.16,P＜0.01)和123％(1.36±0.41比0.61±0.16,P＜0.01);睾酮使Visfatin mRNA表达增加76％(1.02±0.24比0.58±0.36,P＜0.05);孕酮使前脂肪细胞Visfatin mRNA表达增加2.6倍(1.53±1.01比0.42 ±0.14,P＜0.05).结论 性激素通过促进或抑制脂肪细胞Visfatin基因或蛋白的表达,参与调节上述激素引起的脂肪细胞胰岛素抵抗的病理生理过程.     

骨髓脂肪细胞的生物学特性及其与疾病的关系

骨髓脂肪组织(MAT)是骨髓腔内的重要组成部分,与骨髓外脂肪组织不完全相同.目前对MAT功能的认识,已不再局限于单纯的被动填充骨髓腔的作用.骨髓脂肪细胞(BMA)来源于骨髓间充质干细胞(MSC),可分泌瘦素、脂联素等多种脂肪因子,从而参与调节骨髓微环境,并对成骨细胞形成及骨髓造血等生理过程产生影响.BMA还与部分骨代谢性疾病、血液系统疾病及肿瘤等的多种病理过程相关.笔者拟就BMA的生物学特性及其与上述疾病的关系进行综述如下,旨在为临床更全面地认识BMA提供依据,并为上述疾病治疗寻找潜在的治疗靶点.     

促甲状腺激素与肥胖

肥胖患者常出现甲状腺功能异常,这种异常在体重减轻后有所恢复,而甲状腺功能的异常又可引起脂肪堆积或体重增加.研究发现,人类脂肪细胞表达功能性的促甲状腺激素受体（TSHR）,促甲状腺激素（TSH）可能作用于表达TSHR的脂肪细胞,调节脂肪细胞的生长、增殖、分化及脂肪因子的分泌.目前,TSH与体重指数、腰臀比、腰围等的关系尚存争议,但较多研究肯定了TSH与大部分肥胖相关参数存在正相关.     

脂肪样星形细胞瘤简

目的探讨脂肪样星形细胞瘤的临床病理学特征、免疫表型、诊断与鉴别诊断、治疗及预后。方法与结果男性患者,48岁。临床表现为左手无名指及小指麻木、活动不利。MRI显示右顶叶占位性病变,伴囊性变,实性区域明显强化。立体定向下行右顶叶肿瘤全切除术。光学显微镜观察肿瘤呈低级别星形细胞瘤形态,散在一些胞质丰富、核仁明显的神经元样细胞;以脂肪空泡形成为特征,形似成熟的脂肪细胞,呈灶状相互融合,似微囊性变。肿瘤细胞表达胶质纤维酸性蛋白、S-100蛋白、WT-1蛋白和少突胶质细胞转录因子2,以及神经元标志物突触素、微管相关蛋白．2、神经微丝蛋白、神经元特异性烯醇化酶和CD34,不表达异柠檬酸脱氢酶1,P53蛋白呈弱阳性（5％）,Ki-67抗原标记指数约为1％。术后随访20个月,肿瘤无复发。结论脂肪样星形细胞瘤为临床少见肿瘤,组织病理学呈低级别星形细胞瘤形态,伴显著脂肪样细胞分化,亦可伴神经元样分化。明确诊断需结合病理学形态及免疫表型,同时应注意与其他伴脂肪样细胞分化或黄色瘤样变的神经上皮组织肿瘤相鉴别。