基于M基因构建的麻疹病毒实时荧光PCR检测技术

目的:建立麻疹病毒的实时荧光PCR检测方法并应用于临床标本的检测。方法:根据四十年来在我国流行的麻疹病毒M基因序列,设计用于病毒实时荧光PCR检测的引物和探针,建立麻疹病毒实时荧光PCR检测方法。用此法对40例麻疹的病人标本进行检测,并与血清学检测结果比较。结果:通过40例病人标本中实时荧光PCR检测,39份阳性,1份阴性,阳性率97.5%,高于血清学检测(阳性率77.5%)。结论:该方法方便快捷、特异性强、敏感性高,可用于麻疹病毒的快速诊断和分子流行病学调查。     

麻疹病毒血凝素基因在大肠杆菌中的原核表达

目的构建麻疹病毒(measles virus)血凝素蛋白(H蛋白)基因的重组质粒,使其在大肠杆菌中大量表达H蛋白,为制备重组蛋白用于免疫检测奠定基础。方法提取麻疹病毒Leningrad-4株总RNA,RT-PCR法扩增其血凝素基因。克隆入pGEM-Teasy载体,双向测序,测序正确后将Ha基因用BamHⅠ和HindⅢ双酶切后亚克隆至pET28a(+)载体,转化BL21(DE3)。培养后用IPTG诱导表达。SDS-PAGE分离大肠杆菌蛋白,分析H基因表达情况。HisLink树脂纯化目的蛋白用于建立酶联免疫吸附反应,进行血清抗体水平检测。结果扩增了麻疹血凝素基因,与麻疹Leningrad-4株血凝素基因同源性达99.8%,构建了重组血凝素基因的原核表达质粒并进行了诱导表达和SDS-PAGE凝胶电泳,在66 kD处有表达的重组血凝素蛋白条带。结论成功构建了麻疹血凝素基因的表达载体并在大肠杆菌中进行了诱导表达,建立了利用重组血凝素蛋白检测IgG的ELISA方法。     

143例麻疹的护理

麻疹（measles，rubeola）是麻疹病毒引起的急性呼吸道传染病，发病季节以冬春季为多，但全年均可有病例发生。临床症状有发热、咳嗽、流涕、眼结膜充血、口腔黏膜有科普利克斑（Koplik’s spots）及皮肤出现斑丘疹为其特征。我科自2006年1～6月共收治麻疹患者143例，现总结出主要的护理措施如下。     

2016年睢宁县健康人群麻疹风疹和腮腺炎抗体阳性率的监测分析

目的 了解睢宁县健康人群麻疹、风疹和腮腺炎抗体阳性率,评价预防接种效果。方法 采取分层随机抽样法抽取320名健康人群作为监测对象,分为8月龄～、5岁～、15岁～和25～40岁组4个年龄组。结果 共检测314名健康人群血清标本,麻疹抗体阳性率为89.81%,风疹抗体阳性率为68.79%,腮腺炎抗体阳性率为82.17%;各年龄组间麻疹抗体阳性率的差异无统计学意义(χ2=4.406,P＞0.05),风疹抗体阳性率和腮腺炎抗体阳性率的差异有统计学意义(χ2分别=12.252、15.649,P＜0.05);不同性别和不同地区间监测对象麻疹抗体阳性率、风疹抗体阳性率和腮腺炎抗体阳性率的差异均无统计学意义(χ2分别=2.00、0.162、0.706,P＞0.05)。结论 睢宁县8月龄以上健康人群的麻疹、风疹和腮腺炎抗体阳性率较低,计划免疫接种情况存在不足,应加强相关疫苗的常规接种和强化免疫。     

山西省首起境外输入性D8基因型麻疹病毒疫情调查

目的 调查山西省首起境外输入性D8基因型麻疹病毒疫情暴发的原因,评价防控措施效果.方法 对病例进行个案调查,采用酶联免疫吸附试验(EL1SA)对血清学样本进行麻疹IgM抗体检测.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对咽拭子样本进行核酸检测.采用Vero/slam细胞培养麻疹核酸阳性咽拭子样本,分离出麻疹病毒后进行...     

四川省2003～2005年麻疹野病毒分离株基因特征分析

目的了解四川省2003~2005年流行的麻疹野病毒分离株基因特征,为控制、消除麻疹提供科学依据。方法用B95a、Vero/Slam细胞从疑似麻疹爆发和散发患者的标本中分离麻疹病毒,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从分离到的22株麻疹病毒中扩增出核蛋白(nucleoprotein,N)基因羧基末端676个核苷酸片段,再对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析,并以C末端456个核苷酸片段构建基因亲缘性关系树,进行核苷酸、氨基酸同源性分析。结果四川省2003~2005年从6个市(自治州,下同)分离的22株麻疹野病毒全部为H1基因型,除2株为H1b基因亚型外,其余均为H1a基因亚型。22株麻疹野病毒的核苷酸同源性为96.2%~100.0%,氨基酸同源性为95.3%~100.0%。四川省11株麻疹病毒代表株与中国S191疫苗株的核苷酸同源性为90.0%~92.5%,氨基酸同源性为86.7%~91.6%。结论四川省2003~2005年流行的麻疹野病毒以H1a为绝对优势基因亚型,H1b为弱势基因亚型,未发现H1c基因亚型。其中以H1a基因亚型为主的病毒株引起的多个传播链造成四川省各市的麻疹流行。     

麻疹病毒的纯化及其在麻疹IgG EIA诊断试剂中的应用

目的：摸索纯化麻疹病毒的方法，并以其为包被抗原，制备麻疹IgG酶联免疫（EIA）诊断试剂。方法：将L4株麻疹病毒液先后用超滤、PEG沉淀的方法进行浓缩，再分别用连续和不连续蔗糖密度梯度超速离心法进行纯化，比较不同方法纯化后的效果，最终建立制备高纯度麻疹病毒包被抗原的方法，并在此基础上制备麻疹IgG酶联免疫（EIA）诊断试剂。结果：用超滤、PEG沉淀及连续蔗糖密度梯度超速离心纯化后的麻疹病毒的比活性为775．76HAU／mg，SDS—PAGE及Western-blot证明纯化产物的纯度符合要求，电镜结果显示纯化物中含大量麻疹病毒。以该纯化抗原制备的EIA检测试剂与血凝抑制实验（HI）相比，该试剂的灵敏度为99．46％，特异度为81．82％，一致性为97．58％。与SIGMA麻疹IgGEIA诊断试剂盒的一致率为95．12％。结论：采用超滤、PEG沉淀及连续蔗糖密度梯度超速离心的方法可制备满足麻疹IgGEIA诊断试剂要求的包被抗原。     

吉林省2001～2008年麻疹病毒血凝素蛋白基因特征和氨基酸变异分析

目的研究吉林省2001～2008年麻疹病毒代表株的血凝素蛋白基因（Hemagglutinin,HA）特征和氨基酸变异。方法从吉林省2001～2008年流行的麻疹野病毒中选取5株代表株,提取核糖核酸,用逆转录-聚合酶链反应扩增HA基因片段,对扩增产物进行核苷酸序列分析,并与基因库中的中国麻疹疫苗病毒株沪191以及所有23种麻疹野病毒基因型代表株的H基因序列,进行基因亲缘关系、同源性、氨基酸变异以及糖基化位点变异比较。结果吉林省5株麻疹病毒分离株均属于H1基因型H1a基因亚型,5株病毒H基因之间有6～17个核苷酸差异（0.3%～0.9%）,3～9个氨基酸差异（0.5%～1.5%）。与中国现行疫苗病毒株沪191H基因相比,有89～95个核苷酸差异（4.8%～5.1%）,25～30个氨基酸差异（4.1%～4.8%）。与H1a基因亚型代表株China93-4H基因相比,有9～17个核苷酸差异（0.5%～0.9%）,3～7个氨基酸差异（0.5%～1.2%）。吉林省5株麻疹病毒分离株的H蛋白均保留了4个糖基化位点,第5个糖基化位点在氨基酸第240位由丝氨酸突变成天冬酰胺,导致一个潜在糖基化位点NLS238～240的缺失。结论吉林省2001～2008年流行的5株麻疹病毒,均丢失了一个可能影响抗原性的糖基化位点。5株麻疹病毒的核苷酸、氨基酸差异均不大,但无论与H1a基因亚型代表株China93-4相比,还是与疫苗株S191相比,核苷酸和氨基酸的同源性均呈逐年递减趋势,吉林省麻疹野病毒H基因的变异仍在逐年增加、逐年积累。     

麻疹病人不同标本的麻疹病毒分离结果

收集麻疹病人急性期的尿液和咽拭子标本,比较这两种临床标本在B95a细胞中麻疹病毒分离的阳性率,为今后分离病毒所用标本的收集提供指导,为我国麻疹病毒流行毒株基因型的鉴定提供更多的分离株.采用的方法是以B95a细胞分离麻疹病毒,对标本的运送、储存条件及处理方法进行标准化.结果显示尿标本麻疹病毒分离率为41.17%,比咽拭子高3.5倍.初步提示,为分离麻疹病毒,最好在出疹1～3d采集标本,而且以采集尿标本为好.     

河北省D8基因型麻疹病毒输入性疫情监测及基因型特征分析

目的:分析河北省D8基因型麻疹病毒输入性疫情流行及基因型特征。方法:对麻疹监测病例的流行特征进行分析,对采集的急性期咽拭子标本进行荧光定量RT-PCR鉴定、病毒分离培养及核苷酸序列测定和分析。结果:监测到输入性D8基因型麻疹病例36例,主要集中在邯郸市的8个县（区）,其中成安县确诊病例数最多,占报告病例数的58.33%...