老年晚发哮喘缓解期患者气道反应性和诱导痰炎性标志物的测定

目的检测缓解期老年晚发哮喘(LOA)患者气道反应性和诱导痰嗜酸细胞、嗜酸细胞阳离子蛋白(ECP)和白介素-5(IL-5)水平,探讨其临床意义。方法选择58例缓解期 LOA 患者,测定其气道反应性,并分别采用瑞氏染色、荧光免疫法和酶联免疫吸附试验检测诱导痰中嗜酸细胞数量、ECP 和 IL-5水平;选择25例急性发作期 LOA 患者和15例健康老年人作为对照。结果 58例缓解期 LOA 患者中,49例(84.5%)支气管激发试验阳性,9例(15.5%)阴性。缓解期 LOA 组诱导痰中嗜酸细胞数量[(9.3±3.1)%]、ECP[(144.2±68.1)μg/L]和 IL-5水平[(20.3±6.3)μg/L]显著低于急性发作期 LOA 组[(21.1±9.8)%、(399.3±172.5)μg/L 和(50.6±10.7)μg/L,P<0.01],但显著高于健康老年组[(1.3±0.7)%、(48.7±21.9)μg/L 和(10.3±3.2)μg/L,P<0.01]。气道反应性增高组患者诱导痰中嗜酸细胞数量[(12.7±3.6)%]、ECP[(171.3±69.8)μg/L]和 IL-5水平[(23.6±8.5)μg/L]显著高于气道反应性正常组[(3.1±1.3)%、(52.7±21.1)μg/L 和(13.7±4.1)μg/L,P<0.01]。结论缓解期 LOA 患者多数存在气道高反应性且气道炎症持续存在,测定患者气道反应性和诱导痰中炎性标志物有助于指导缓解期治疗。     

支气管哮喘患者血清IL-10、IL-5和ECP的变化及其意义

目的 通过对支气管哮喘患者和正常对照组的血清IL-10, IL-5和 ECP水平的测定以及相互关系的研究,探讨它们在支气管发病中的作用.方法 应用Pharmacia UniCAP系统和ELISA方法分别测定支气管哮喘患者和正常对照组的血清E CP和IL-10、IL-5水平.结果 正常对照组和发作期的支气管哮喘患者的 ECP水平分别为(3.97±2.13) μg/L和(21.76±12.08) μg/L.正常对照组,支气管哮喘ECP 升高组和支气管哮喘ECP正常组的血清IL-5水平分别为(10.90±4.41) pg/mL,(20.62± 15.7 4) pg/mL和(9.24±7.16) pg/mL.正常对照组和支气管哮喘ECP升高组之间IL-5水平有显著差异(P＜0.01),正常对照组和支气管哮喘ECP正常组之间IL-5水平无差异(P＞0.05) ,支气管哮喘ECP正常组和ECP升高组之间IL-5水平有显著差异(P＜0.01),ECP与IL-5 明显相关 ,两者之间的相关系数r=0.465(P＜0.01).正常对照组,支气管哮喘ECP升高组和支气管哮喘ECP正常组的血清IL-10水平分别为(38.28±15.17) pg/mL,(22.76±15.25) pg/mL 和(42.32±14.61) pg/mL,支气管哮喘ECP正常组和ECP升高组之间IL-10水平有显著差异( P＜0. 01).结论 支气管哮喘的发生与嗜酸粒细胞有密切的关系,ECP和IL-5可反映嗜酸粒细胞的活化程度,在支气管哮喘发作时嗜酸粒细胞处于激活状态,易于释放蛋白颗粒;IL-5对嗜酸粒细胞有调控作用.支气管哮喘组的血清IL-10水平较正常对照组低,提示支气管哮喘患者IL-10分泌减少,不能有效抑制炎症或促炎症细胞因子的合成及释放,亦即不能有效抑制炎症反应,可能是导致或加重气道炎症的原因之一.     

哮喘患者血清ECP与相关细胞因子浓度变化的临床意义

目的了解嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)及有关细胞因子在哮喘患者发作期和缓解期的浓度变化,以探讨其与哮喘发病的作用。方法观察哮喘发作期患者55名,缓解期患者70名,测定血清中ECP,白细胞介素4(IL-4)和肿瘤坏死因子α(TNFα)浓度,并与40名健康者比较。结果哮喘发作期和缓解期患者血清中3项指标均明显升高,而缓解期患者的ECP浓度与健康组无明显差异,其它2项仍升高。结论哮喘患者的发病与ECP,IL-4,TNFα有明显相关,ECP可作为急性发作、疗效判定及预后指标,而IL-4和TNFα可能与复发有关。     

Characteristics of the Nonselective Cation Current （NSCCs） in Rabbit Left Ventricular Epicardial, Midmyocardial and Endocardial Myocytes

Objectives Recent studies have described regional differences in the electrophysiology and pharmacology of ventricular myocardium in canine, feline, rat, guinea pig, and human hearts. This has been shown to be due to a smaller IKs and a lager sodium-calcium exchange current (INa-Ca) and late INa in M region (deep subepicardial to midmyocardial). Studies from our laboratory have found a new repolarization current-nonselective cation current (NSCCs) existing in rabbit right ventricular myocytes. Methods We examined the characteristics of NSCCs in epicardial, M region, and endocardial cells isolated from the rabbit left ventricle with standard microelectrode and whole-cell patch-clamp techniques. The permeability to Na , K , Li , Cs but not to Cl- indicating that it was a nonselective cation current. Gd3 (0.1 mmol/l) and La3 (0.1 mmol/l) can block the current markedly. Results Further characterization of NSCCs was significantly smaller in M cells than in epicardial and endocardial cells. NSCCs current density was significantly smaller in M cells than in epicardial and endocardial cells. With repolarization to -80 mV, INs current density was (-0.44±0.05) PA/PF in endocardial cells, (-0.12±0.05) PA/PF in M cells and (-0.28±0.07) PA/PF in epicardial cells; and with repolarization to 30 mV, INs current density was (1.09±0.29) PA/PF in endocardial cells, (0.38±0.09) PA/PF in M cells and (0.91±0.32) PA/PF in epicardial cells. Conclusions Transmural dispersion of repolarization was due to the heterogeneity of NSCCs in rabbit left ventricle epicardial, endocardial myocytes and M cells. These findings may advance our understanding of the ionic basis for our understanding of factors contributing to the development of cardiac arrhythmias.     

非病毒载体聚乙烯亚胺转基因因素的优化

聚乙烯亚胺属于阳离子多聚物,可浓缩DNA作为转基因非病毒载体。但其转染影响变量较多,如果不能充分控制将不能得到重复的、良好的结果。这里测定了聚乙烯亚胺转基因效率的影响因素,为合成更复杂的人工转基因载体创造条件。我们通过聚乙烯亚胺转染编码β-半乳糖苷酶的pSVβ质粒到CO S-7和N IH 3T 3细胞中,测定质粒因素、血清、细胞密度、操作方式以及转染复合物的保存因素对聚乙烯亚胺转基因效率的影响。结果表明:质粒中生物活性抑制剂明显降低转染效率,通过截流分子量3000或10000的超滤可以除去生活性抑制剂;断裂的质粒降低转染效率;培养液中的血清、白蛋白降低转染效率;细胞密度影响转染效率;PE I/DNA复合物与细胞作用8h后吸去,转染效果最优。冻存显著降低PE I/DNA转染复合物转染效率。聚乙烯亚胺可以作为合成新型非病毒载体的骨架,但必须控制有关因素才能发挥最佳的和可重复性的转染结果。     

转化生长因子-β/Smad信号对人横纹肌肉瘤细胞RD生长和凋亡的调控

目的研究TGF-β／Smad信号对人胚胎性横纹肌肉瘤细胞系RD生长和凋亡的调控作用。方法采用小分子RNA干扰(RNAi)技术,以阳离子脂质体为载体,将生物合成的发夹状短链RNA(shRNA)转染RD细胞,封闭Smad4的表达以阻碍内源性TGF-β／Smad信号的转导;采用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检验shRNA干扰Smad4表达的效果;采用免疫荧光化学,通过激光共聚焦显微镜检测Smad4封闭前后RD细胞中Smad2／3表达位置的变化;应用四甲基偶氮唑盐(MTY)和。H-thymidine摄入实验检测阻碍内源性TGF-β／Smad信号转导和以外源性TGF-β1刺激这2种条件下RD细胞的生长状况;采用流式细胞术和荧光化学染色检测上述2种条件下RD细胞的凋亡情况。结果RNAi技术可有效封闭RD细胞中Smad4 mRNA和蛋白的表达;Smad4的封闭导致Smad2／3由胞质入核明显减少;内源性TGF-β／Smad信号转导受阻不但抑制RD细胞生长,并且诱导凋亡;外源性、较高浓度的TGF-β1可抑制RD细胞生长,但不诱导凋亡。结论TGF-β／Smad信号在一定的浓度范围内精细调控RD细胞的生长和凋亡。     

嗜酸性粒细胞阳离子蛋白测定的影响因素探讨

目的探讨温度、抗凝剂(EDTA-K2)对血嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)水平的影响。方法采用固相双位点酶放大化学发光法,分别对22例健康体检者在两种不同温度(25℃和37℃)的血清标本,以及在相同温度(37℃)下,加抗凝剂和不加抗凝剂的血标本进行ECP水平测定。结果25℃组和37℃组血清ECP水平分别为8.92±6.45μg/L(x±s)和19.87±12.16μg/L(x±s),两组有显著性差异(P<0.01);37℃温度下加抗凝剂和不加抗凝剂血标本的ECP水平分别为5.26±2.60μg/L(x±s)和19.87±12.16μg/L(x±s),两组也有显著性差异(P<0.001)。结论温度和抗凝剂(EDTA-K2)对血标本的ECP水平测定有不同程度的影响。     

TRPV1激活对内毒素血症小鼠肺组织炎症损伤的影响及机制

目的：探讨用辣椒素（CAP）激活瞬时受体电位阳离子通道V亚族成员1(TRPV1)对内毒素血症所致肺损伤在炎症反应产生的影响及相关机制。方法：SPF级ICR小鼠108只随机分为6组：正常对照组、CAP对照组、抗辣椒碱（CAPZ）对照组、内毒素血症组、CAP干预组和CAPZ干预组。脂多糖（LPS）经腹腔注射,CAP及CAPZ均在LPS注射前30min经皮下注射。分别在LPS注射后3h、8h和16h取肺组织,ELISA法检测肺组织TNF-α、IL-6、IL-10、P物质（SP）和降血钙素基因相关肽（CGRP）,Westernblotting法检测肺组织Toll样受体4（TLR4）和核内NF-κB的表达水平,光镜下观察肺组织病理学改变。结果：内毒素血症组小鼠3h、8h和16h肺组织TNF-α、IL-6和IL-10水平较正常对照组均显著升高（P0.05）,而CAP干预组核内NF-κB表达显著降低（P<0.05）,CAPZ干预组核内NF-κB表达显著升高（P<0.05）。光镜下,CAP对照组和CAPZ对照组较正常对照组病理学变化不明显,内毒素血症组肺组织在8h和16h损害明显,CAP干预组较内毒素血症组损害减轻,CAPZ干预组较内毒素血症组肺组织损害加重。结论：TRPV1激活后能显著降低内毒素血症小鼠肺组织TNF-α、IL-6和核内NF-κB水平,升高IL-10水平,提高肺组织SP和CGRP表达,减轻肺组织炎症损伤程度,但不改变肺组织TLR4水平。     

阳离子交换色谱柱上聚合血红蛋白研究

采用柱上聚合的方法制备血红蛋白溶液，解决传统血红蛋白聚合过程中由于戊二醛的活性过高导致平均分子量大、产物分子量分布宽的问题。该方法利用阳离子交换剂对修饰度（聚合度）小的血红蛋白吸附能力大的原理，使其在柱上富积，同时加入戊二醛进行聚合反应。结果表明该方法能比较有效地缩小聚合血红蛋白的分子量分布。     

人增生性瘢痕成纤维细胞最佳转染条件:α_1(I)型前胶原基因反义寡核苷酸转染的实验

目的:选择α1(I)型前胶原基因反义寡核苷酸转染人增生性瘢痕成纤维细胞的最佳条件。方法:实验于2003-10/2004-06在中山大学附属第一医院外科实验室进行。以阳离子脂质体Oligofectamine转染体外培养的第2～6代人增生性瘢痕成纤维细胞,应用荧光显微镜记录荧光素在细胞内的空间分布,用流式细胞术作荧光细胞计数和观察细胞凋亡,通过不同细胞接种数量、反义寡核苷酸浓度和脂质体量转染条件的比较,逐步获得各转染过程中的最佳条件。结果:①在6孔板上转染反义寡核苷酸,所用各转染条件未引起细胞凋亡。②其最佳转染条件为:接种细胞数量32.25×104/皿,反义核酸浓度150nmol/L,脂质体量3μL/孔;转染后细胞浆和细胞核内均有荧光素聚集。结论:获得α1(I)型前胶原基因反义寡核苷酸转染的人增生性瘢痕成纤维细胞的最佳转染条件,可为下一步试验提供基础。