酵母双杂合系统AD端阴离子交换蛋白C-末端表达质粒的构建

利用PCR方法，从阴离子交换蛋白1（AE1）全长cDNA中扩增出约350bp c末端cDNA片段，测序后将其克隆至pGADT7载体上，用醋酸锂法构建好的pADT7-AE1-c末端转染酵母菌HA109，观察其在选择性培养基上的表达情况。结果表明，获得了530bp AE1c－末端cDNA,pGADT7-AE1-c末端对酵母无毒性，不能激活检测基因，可作为酵母双杂合系统中的靶基因。     

氯霉素乙酰转移酶检测(CAT assay)

本文介绍一种快速方便的外源基因在哺乳动物细胞中瞬间表达检测系统,即氯霉索乙酰转移酶检测系统。该项检测技术不仅对基因的调控顺序(Cis-acting elements)如启动子、增强子等检测提供了有效的工具,而且为真核基因在哺乳动物细胞表达体系中,质粒的构建及筛选提供了行之有效的手段。并介绍了该技术的全过程及其操作要点。     

乙肝基因疫苗系列质粒的构建及其在真核细胞中的表达

目的 构建一系列乙肝病毒表面抗原大、中、小蛋白的真核细胞表达质粒,并研究其在真核细胞中的表达情况。方法 采用常规PCR法扩增S、前S2－S、前S1－前S2－S片断,利用重叠PCR法扩增出前S1－S片断后,分别插入Rc/CMV及pSG5UTPL/Flag载体质粒中,并在其ATG起始密码前加入KOZAK序列后转染SP2／0细胞,Western-Blot杂交检测所表达蛋白,并用核酸自动分析仪分析所插入片断的核酸序列。结果 插入片断的核苷酸序列与相应的大、中、小蛋白和前S1－S蛋白的编码基因一致,Western-Blot杂交检测出了相应的目的蛋白。结论 获得了8个能高效表达乙肝病毒表面抗原大、中、小蛋白和前S1－S蛋白的真核细胞表达质粒。     

从分子水平研究小儿细菌感染

小儿细菌感染很常见，但从分子水平研究小儿细菌感染的报告尚少，现将我们在这方面所做的工作报道如下。（一）质粒分析质粒（ｐｌａｓｍｉｄ）是染色体外的基因，与细菌致病性、耐药性等密切相关；耐药（Ｒ）质粒常含有多种耐药基因，它不但传给后代还可转移至无此质粒的...     

HPV_(16)E7-HSP_(70)融合表达质粒的构建及鉴定

采用分子克隆技术 ,首先将 HSP70 基因片段克隆到真核表达载体 pc DNA3 .1ˉ上 ,获得 pc DNA-HSP重组质粒 ,然后采用 PCR扩增技术 ,定点突变编码 HPV1 6 E7蛋白 C末端锌指结构的基因序列 ,将该突变的 E7基因插入 pc DNA-HSP重组质粒 ,通过粘端连接的方式构建 pcd-HPV1 6 E7-HSP70 融合表达质粒 ,最后通过限制性内切酶酶切、PCR和 DNA测序等技术鉴定。结果显示 ,重组融合表达质粒经酶切、PCR和 DNA测序证明其突变位点、碱基及阅读框架均准确无误。     

连续消毒中大肠杆菌O157:H7对碘伏抵抗力的变化及其与质粒pO157关系的研究

[目的]研究分析在连续消毒中大肠杆菌O157：H7对碘伏抵抗力变化及其与质粒pO157关系。[方法]用碘伏连续消毒6株大肠杆菌O157：H7 10代，对比消毒前后试验菌对该消毒剂的抵抗力、质粒图谱以及质粒酶切图谱，用SDS-高温法消除原始菌与连续消毒后试验菌的质粒。[结果]连续消毒10代后，试验菌对碘伏的抵抗力增加；试验菌的质粒图谱以及质粒pO157的Cal Ⅰ酶切图谱均无明显变化；消除原始菌的小质粒后，细菌对消毒剂的抵抗力不变，消除原始菌的大质粒和连续消毒后试验菌的质粒后，试验菌对碘伏的抵抗力增加。[结论]结果提示，连续消毒会使试验菌对碘伏的抵抗力增加，抵抗力增加的原因可能与质粒pO157无直接关系。     

以减毒沙门菌将重组细胞因子导向免疫系统的新免疫疗法

作者用减毒沙门菌作为编码白细胞介素4(IL-4)和IL-18的原核表达质粒传递系统，并评估其在不同实验模型中调节免疫应答的能力。