缺氧时肺动脉平滑肌细胞血红素氧合酶/一氧化碳系统的变化及其对Ⅰ型胶原的影响

目的 :研究缺氧时大鼠肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)诱导型血红素氧合酶 (HO 1 ) /一氧化碳 (CO)系统的变化及其对胶原合成的影响 ,探讨血红素氧合酶 /一氧化碳 (HO/CO)系统对缺氧性肺血管重建中胶原代谢的作用及其机制。方法 :原代培养的大鼠PASMC ,用分光光度计检测PASMC培养液中CO相对含量的变化 ,Westernblot检测PASMCHO 1和转化生长因子 β3 (TGF β3 )表达的变化 ,用免疫细胞化学法分别观察PASMCHO 1、TGF β3 、Ⅰ型胶原蛋白表达的变化 ,原位杂交法检测Ⅰ型前胶原mRNA表达的变化。结果 :缺氧 2 4h诱导PASMC表达TGF β3 、Ⅰ型胶原蛋白和mRNA ,与对照组比较缺氧使HO 1蛋白表达增加 6 7.4 5 % (P <0 .0 1 )、CO含量增加35 .4 1 % (P <0 .0 5 )。ZnPP(HO 1抑制剂 )使缺氧 2 4h大鼠PASMC的CO含量降低 7.88% (P <0 .0 1 )、HO 1蛋白表达减少 2 3.9% (P <0 .0 5 )、TGF β3 蛋白表达增高 393% (P <0 .0 1 )、Ⅰ型胶原蛋白和mRNA表达均增加。Hemin(HO 1诱导剂 )使缺氧 2 4h大鼠PASMC的CO含量增加 8.83% (P <0 .0 1 )、HO 1表达增高 1 0 5 % (P <0 .0 5 )、TGF β3 蛋白表达降低 6 8.1 2 % (P <0 .0 1 ) ,Ⅰ型胶原蛋白和mRNA表达均减少。结论 :缺氧刺激下大鼠PASMCHO/CO系统上调 ,内源性CO能够抑制Ⅰ型胶原     

HO-1激动剂Copp对放射所致内皮细胞凋亡的抑制作用

目的 探讨血红素加氧酶1(HO-1)在放射所致内皮细胞凋亡中的作用.方法 预先通过HO-1激动剂Copp和(或)HO-1抑制剂Znpp分别处理人血管内皮细胞EA.hy926.然后,预处理后的部分细胞接受8 Gy的照射.分别通过Western blotting和流式细胞仪检测EA.hy926细胞HO-1蛋白、细胞色素C的表达以及EA.by926细胞的凋亡率.结果 PBS+R组EA.hy926细胞经8 Gy照射后低表达HO-1蛋白;而细胞先经Copp和(或)Znpp处理后,再行8 Gy照射,其HO-1蛋白的表达则显著增高(P＜0.01).与Znpp+R组相比,Copp+R组的增高较为明显(P＜0.01);另外,Copp+R组HO-1蛋白的表达低于Copp+Znpp+R组(P＜0.01).进一步通过流式检测各组细胞凋亡的情况显示,与其他各组相比,Copp+R组细胞的凋亡率最低(P＜0.01),这与相应各组细胞细胞色素C的表达水平结果一致.结论 诱导并激活HO-1能够减少放射所致的内皮细胞凋亡.     

丹参酮ⅡA对压力超负荷诱导大鼠心肌血红素加氧酶-1表达的影响

目的:观察丹参酮ⅡA对压力超负荷大鼠心室重构时血红素加氧酶-1(Hemeoxygenase-1,HO-1)蛋白及mRNA基因表达的影响。方法:40只SD大鼠随机编号,抽取8只为假手术组,其余32只大鼠采用腹主动脉缩窄术制备压力超负荷模型。术后存活22只大鼠再随机分成3组,分别为模型组(n=7)、丹参酮ⅡA组(n=7)及丹参酮ⅡA+HO-1抑制剂锌原卟啉组(n=8),术后4周开始给药,给药4周后检测心室质量指数(heart weight index,HWI)、左心室质量指数(left ventricular weight index,LVWI)、心肌组织病理学(HE染色)以及心肌组织的HO-1蛋白和mRNA基因表达水平。结果:1与假手术组比较,模型组大鼠HWI和LVWI明显升高(P0.01);与模型组比较,丹参酮ⅡA组和丹参酮ⅡA+锌原卟啉组的HWI和LVWI均有不同程度的下降,而丹参酮ⅡA组改善更为显著(P0.01)。2HE染色结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠心肌纤维化程度加重;与模型组相比,丹参酮ⅡA组和丹参酮ⅡA+锌原卟啉组组心肌组织形态学均有不同程度的改善,丹参酮ⅡA组改善更为明显。3丹参酮ⅡA组大鼠的HO-1蛋白和mRNA基因表达水平均明显高于其他3组,且差异有统计学意义(均P0.01)。结论:丹参酮ⅡA能减轻心肌纤维化,抑制心室重构进程,此作用可能与丹参酮ⅡA诱导HO-1表达上调有关。     

白细胞介素-10对蛛网膜下腔出血所致脑血管痉挛的治疗作用及机制

目的 观察白细胞介素(IL)-10在蛛网膜下腔出血(SAH)后的脑血管痉挛(CVS)中的治疗作用及其作用机制.方法 日本大耳白兔(30只)随机分为假手术组(A)、SAH组(B)、SAH+IL-10组(C)、SAH+锌原卟啉(ZnPP)+ IL-10组(D)、SAH+ ZnPP组(E),经枕大池2次注血法建立兔SAH后CVS动物模型,术后C、D、E组分别经腹腔注射给予IL-10、ZnPP,术后第5天采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6的水平,取基底动脉血管检测血管直径并检测血红素氧合酶-1(HO-1)的表达.结果 SAH后血管痉挛模型造模成功,SAH各组基底动脉直径比A组明显缩小(P＜0.05),TNF-α与IL-6含量升高(P＜0.05),其中基底动脉直径在C、D组[(733.94±17.28)、(646.11±9.79)μm]较B、E组[(595.64±10.15)、(532.81±17.09) μm]增加,TNF-α和IL-6含量在C组[(26.27±1.64)、(58.15±1.38) ng/L]、D组[(43.45±1.77)、(77.17±1.09) ng/L]较B组[(53.56±1.27)、(115.93±1.47) ng/L]、E组[(60.56±1.79)、(136.45±1.73) ng/L]降低;A组脑基底动脉未检测到HO-1蛋白,C组HO-1含量(0.446±0.019)较B、D、E(0.314±0.014、0.251±0.018、0.160±0.011)组含量增加.结论 IL-10能够缓解SAH后所致CVS,可能是经HO-1蛋白发挥其治疗作用.     

血红素加氧酶-1诱导性高表达保护异种移植胰岛功能的研究

目的 探讨通过钴原卟啉(cobalt protoporphyrin,CoPP)诱导供体胰岛血红素氧化酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)高表达对异种胰岛移植物的保护作用.方法 采用大鼠对小鼠胰岛移植模型,分为对照组、体内诱导组、体外诱导组、体内阻断组及体外阻断组5组,改良Gotoh法提取胰岛,移植于糖尿病模型小鼠的肾包膜下.比较各组受体移植后血糖维持正常时间,糖刺激试验检测胰岛功能,PCR和ELISA法分别检测移植物内和血清IL-10、TNF-α、IL-1β及INF-γ及其mRNA表达.分别以PCR和Western印迹法检测胰岛组织内HO-1mRNA及蛋白表达.病理学检查移植物淋巴细胞浸润情况.结果 对照组小鼠血糖维持正常时间为(9.33±1.37)d,与体内诱导组的(16.33±1.51)d及体外诱导组的(14.33±1.51)d相比差异有统计学意义(P<0.05),体内诱导组优于体外诱导组(P<0.05).受体阻断的两组血糖控制时间则与对照组相近,分别为:体内阻断组(9.67±1.03)d,体外阻断组(9.17±1.47)d.体内、外诱导组及对照组胰岛于低糖刺激下胰岛素分泌量差异无统计学意义(P>0.05),而高糖刺激下,体内诱导、体外诱导及对照组分别为:(187.68±19.93)、(137.22±11.73)及(91.25±12.64)μIU·ml~(-1)·10islets~(-1)·45 min~(-1),差异有统计学意义(P<0.05).移植后,接受经诱导处理的胰岛的两组小鼠血清IL-10含量[体内诱导(72.97±9.74)pg/ml、体外诱导(70.84±3.56)pg/ml]明显高于未处理组[(30.57±3.93)pg/ml]及阻断两组[体内阻断:(39.78±3.00)pg/ml、体外阻断:(35.42±4.30)pg/ml].两诱导组胰岛移植物的IL-10 mRNA表达强于对照及阻断两组.IFN-γ、TNF-α及IL-1β在各组间差异无统计学意义.体内、体外诱导两组HO-1mRNA、蛋白表达高于对照组,其中体内诱导组HO-1mRNA高于体外组,但两组HO-1蛋白表达相当.体内、外阻断组HO-1mRNA、蛋白表达与对照组相当.病理学检查示两诱导组移植物内淋巴细胞浸润少于对照及阻断两组. 结论 CoPP体内、外诱导He-1高表达可促进胰岛功能,延长移植物生存时间,体内诱导对异种移植胰岛保护效应强于体外诱导.     

血红素加氧酶-1的表达对氟尿嘧啶诱导食管癌细胞凋亡的影响

目的 本研究探讨血红素加氧酶-1与氟尿嘧啶诱导食管癌细胞凋亡的关系。 方法 培养ECa109食管鳞癌细胞,实验组分别加入正常培养基,含20μmol/L、80μmol/L锌原卟啉(ZnppIX)的培养基培养12h,后更换为含100μg/ml 5-FU组培养;对照组予正常培养基培养;共培养96h后检测各组细胞凋亡情况。 结果 在凋亡早期细胞中(Annexin V⁺/PI^-),20μmol/L ZnppIX组(25.63%±6.52%)及80μmol/L ZnppIX(22.48%±5.59%)组显著高于5-FU组(12.89%±4.42%,P均<0.05)。在中晚期凋亡细胞(Annexin V⁺/PI⁺)中,20μmol/L ZnppIX组(25.17%±5.53%)显著低于5-FU组(39.89%±6.66%)及80μmol/L ZnppIX组(41.95%±2.92%,P均<0.01)。80μmol/L ZnppIX组caspase-3的活化率显著高于正常细胞(P<0.05)。 结论 ZnppIX抑制HO-1表达后,可以显著增加5-FU诱导的Eca109食管癌细胞凋亡率,caspase-3参与了其诱导细胞凋亡的过程。     

复发性鼻息肉组织中Toll样受体2、血红素加氧酶-1的表达

目的研究复发性鼻息肉组织中Toll样受体2(TLR-2)、血红素加氧酶-1(HO-1)的表达,分析其在复发性鼻息肉发病中的作用。方法选择拟行鼻息肉切除的复发性鼻息肉患者(复发组)与初发性鼻息肉患者(初发组)各60例,手术取得鼻息肉标本采用免疫蛋白印迹技术检测TLR-2、HO-1的表达。结果复发组鼻息肉组织中TLR-2、HO-1表达量高于初发组(P<0.01);Pearson相关分析显示TLR-2、HO-1表达量间具有正相关性(P<0.05)。结论复发性鼻息肉组织中TLR-2、HO-1表达高于初发性鼻息肉,TLR-2、HO-1的表达量间具有正相关性,提示TLR-2、HO-1可能在鼻息肉的复发中发挥重要作用。     

一氧化碳体系与肺动脉高压

一氧化碳 (ＣＯ)与一氧化氮 (ＮＯ)结构类似 ,因可与体内血红蛋白或某些酶类的含铁血红素基团结合引起机体中毒 ,一直被视为有毒气体。随着ＮＯ第二信使作用的揭示 ,ＣＯ的第二信使作用也逐渐被发现。大量研究证实ＣＯ和ＮＯ都是重要细胞间信使 ,参与体内许多病理生理过程。肺动脉高压(ＰＨＡ)是肺心病发病机制中的关键环节 ,缺氧是引起ＰＨＡ的最常见病因之一 ,而缺氧性ＰＨＡ的形成机制至今尚未完全明了。随着对ＣＯ的深入研究 ,发现ＮＯ并非唯一的内皮源性舒张因子 ,ＣＯ同样有舒血管效应。缺氧情况下ＣＯ的合成、释放及其在缺氧性ＰＨＡ…     

AAV介导 HO-1基因转染对视网膜色素变性大鼠视网膜的保护作用

目的:探讨腺相关病毒(AAV)载体介导血红素加氧酶1( HO-1)基因过表达对视网膜色素变性(RP)模型大鼠的保护作用。 方法:选取健康雄性SD大鼠80只,体质量200～250 g,采用完全随机分组设计,将大鼠分为空白对照组、RP模型组、AAV-GFP组和AAV-HO-1-GFP组,每组20只。R...     

血红素加氧酶-1在肿瘤新生血管化中的作用

研究证明血红素加氧酶-1(HO-1)与一些促新生血管因子如血管内皮生长因子(VEGF)、基质细胞衍生因子-1等相互作用,促进肿瘤的新生血管化.另外,也有研究者认为血红素加氧酶-1可以通过抑制核因子-кB(NF-кB)转录来抑制肿瘤新生血管化过程.HO-1可能参与了肿瘤新生血管形成的病理生理过程,可能成为肿瘤治疗新的作用靶点.