胃泌素对胃癌细胞SGC7901 Reg Ⅰ基因转录因子的效应

目的 探讨胃泌素对胃癌细胞SGC7901 Reg Ⅰ(Reg Ⅰ)基因转录因子的效应.方法 应用巢式PCR技术从胃癌细胞SGC7901基因组DNA扩增Reg Ⅰ基因启动子1414bp片段,将该片段插入pMD19-T载体,序列分析鉴定.应用随机引物法以地高辛分别标记1414bp及其HindⅢ酶切800bp和614bp片段,经灵敏度检测后,作为探针.应用Genomatix MatInspector在线分析软件分析Reg Ⅰ基因启动子1414bp片段的转录因子结合位点.分别以10-7 mol/L和10-8mol/L胃泌素G-17处理胃癌细胞SGC7901 48h,提取核蛋白.应用DNA-蛋白质印迹法(Southern blotting),分别以地高辛标记的1414bp、800bp和614bp片段为探针检测胃泌素对胃癌细胞SGC7901 Reg Ⅰ基因转录因子的效应.结果 1414bp探针可检测到20条蛋白主带.胃泌素孵育后,带型没有变化,但是一些条带的灰度值改变,带9、12、13、14、15和16的灰度值明显降低(P＜0.05);不同浓度胃泌素处理组之间上述6个条带的灰度值差异不明显(P＞0.05).614bp探针可检测到灰度值变化的6条主带中的带9、12和13,胃泌素处理后,此3条主带的灰度值明显降低(P＜0.05).800bp探针可检测到灰度值变化的6条主带中的带9、12和14,胃泌素处理后,仅带14的灰度值明显降低(P＜0.05).614bp和800bp探针均未检出带15和带16.结论 胃癌细胞SGC7901Reg Ⅰ基因表达由多个转录因子协同调控.降低几个转录因子的结合活性可能是胃泌素上调胃癌细胞SGC7901Reg Ⅰ基因表达的途径之一.     

帕金森病相关血清蛋白质标志物的筛选及鉴定

 目的：探讨并初步鉴定帕金森病患者血清中相关蛋白质作为特异标志物的可能性。方法：应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)结合纳米磁珠技术检测44例帕金森病和60例健康对照的血清标本,应用生物信息学方法筛选差异蛋白峰,经高效液相色谱（HPLC）分离出差异蛋白,酶解后进行液质联用串联质谱（LC-MS/MS）分析,利用Xcalibur的程序组件BioWorks 3.2完成蛋白质序列数据库鉴定分析。结果：经SELDI-TOF-MS结合纳米磁珠技术筛选出质荷比m/z位于8 937的蛋白质在帕金森病中高表达(帕金森病组表达强度为27.47±16.58,正常组表达强度为5.01±3.47),有显著差异(P<0.01);6 636和8 697的蛋白质在帕金森病中低表达(帕金森病组表达强度为5.43±2.66和20.22±9.57,正常组表达强度为18.85±7.56和51.13±26.22), 有显著差异(P<0.01)。联合上述3种潜在蛋白质标志物,可区分帕金森病组和对照组,其中帕金森病患者检出率为90.0%(27/30),健康者检出率为92.5%（37/40）。对m/z为6 636、8 697和8 937的标志物进行鉴定,结果分别为载脂蛋白C-I、载脂蛋白 C-III 和补体成分3a。结论：鉴定出的载脂蛋白 C-I、载脂蛋白C-III和补体成分3a在帕金森病的诊断中具有一定价值,值得进一步研究和探讨。     

b型流感嗜血杆菌D蛋白原核可溶性表达研究

目的 通过原核表达系统可溶性表达重组D蛋白,为多糖结合疫苗的制备提供蛋白载体.方法 将Hib CMCC株基因组DNA中去除信号肽的hpd基因片段插入pET43.1a表达质粒,转化入感受态大肠埃希菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白,经过硫酸铵沉淀和DEAE阴离子交换柱层析纯化后,用Western Blot的方法鉴定其免疫反应原性.结果 表达的重组蛋白以可溶性形式存在,表达量约占菌株总蛋白的44％,经过初步纯化后的重组蛋白可以和Hib抗血清发生特异性反应.结论 成功构建了D蛋白重组表达质粒,并在原核细胞中以可溶性形式表达出具有良好免疫反应原性的D蛋白.     

发热伴血小板减少综合征病毒在巨噬细胞中的亚细胞定位

目的 发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)是新发传染病发热伴血小板减少综合征的致病病原,为布尼亚病毒科白蛉病毒属一种新型病毒.通过研究发热伴血小板减少综合征病毒在巨噬细胞中的亚细胞定位,了解SFTSV在细胞内的复制组装机制.方法 应用两种人源巨噬细胞系THP-1细胞和U937细胞,通过免疫荧光共聚焦方法分析SFTSV感染巨噬细胞后与高尔基体和内质网的共定位.结果 SFTSV可特异性感染巨噬细胞,在SFTSV感染的巨噬细胞中SFTSV核蛋白与高尔基体共定位于核周,与内质网紧密相邻,但没有共定位.结论 在SFTSV感染的巨噬细胞中,内质网和高尔基体可能是病毒进行加工修饰及包装成熟的重要场所.     

自噬与心血管疾病

自噬是细胞在缺乏营养和能量供应时,部分胞质与细胞器被包裹并被降解为核苷酸、氨基酸及游离脂肪酸等小分子物质,再被重新利用合成大分子或者合成ATP的过程.自噬广泛参与多种疾病的发生,多种心血管疾病的病理过程伴随着心血管系统自噬活性的改变.     

药物组合帮巨噬细胞“吃掉”肿瘤

据2013年5月31日Milde P[Science,2013,340（6136）：41076-41080]报道,研究人员已经在小鼠身上设计出一种小型蛋白质,它可以截断这一信号,并且能大幅度地提高抗体药物的效力以使肿瘤萎缩。为了避免被免疫系统破坏,癌细胞耍了一些小手段。当它们分裂形成肿瘤时,会避免让巨噬细胞察觉到,巨噬细胞是从事消灭死亡细胞和危险入侵者的免疫细胞。     

利用细菌产生蛋白质药物的新技术

据Pandhal J（Biotech Bioeng,2013 Apr 8.doi：10.1002/bit.24920）报道,英国谢菲尔德大学的研究者开发出了一种廉价高效的技术——利用细菌来获得复杂的蛋白质药物。研究者使用大肠杆菌来进行研究,从而就可以增加其细胞产生特殊修饰蛋白质的产量及改善其稳定性。蛋白质的修饰目前在三分之二的人类治疗性药物中使用,而且包括将特殊的糖类基团添加到蛋白质上,也就是糖基化的过程。     

妊娠期糖尿病患者血清FAP4、25(OH)D水平与新生儿结局的关系

目的探究妊娠期糖尿病(GDM)患者血清脂肪酸结合蛋白质4(FAP4)、25-羟维生素D[25(OH)D]水平与新生儿结局的关系。方法选取2018年3月至2020年4月本院收治的GDM患者102例(观察组),另选取同期在本院生产的健康孕妇83例(对照组),比较两组的血脂相关指标、血糖相关指标、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、血清FABP4、25(OH)D水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清FABP4、25(OH)D水平预测新生儿结局的应用价值。结果观察组的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、空腹血糖(FPG)和餐后2 h血糖(2 h PG)水平均高于对照组,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和HOMA-IR水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组的胎儿窘迫、胎儿生长受限、新生儿窒息和低体重出生发生率比较差异无统计学意义(P>0.05),观察组的新生儿不良结局总发生率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组的血清FABP4水平高于对照组,25(OH)D水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组两亚组患者血清FABP4、25(OH)D水平比较,结局不良组患者的血清FABP4水平明显高于结局良好组,25(OH)D水平明显低于结局良好组,差异有统计学意义(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,FABP4、25(OH)D的曲线下面积(AUC)分别为0.660和0.715,对新生儿结局均有一定的预测能力(P<0.05)。结论 GDM患者血清FABP4、25(OH)D水平与新生儿不良结局有关,二者对GDM患者新生儿不良结局具有一定的预测价值。     

氢吗啡酮后处理经PI3K/Akt通路减轻大鼠心肌缺血-再灌注细胞凋亡

目的:探讨PI3K/Akt信号通路在氢吗啡酮后处理减轻大鼠心肌缺血-再灌注细胞凋亡中的作用。方法:健康雄性SD大鼠40只,按照随机数表法随机分为5组,每组8只,假手术组（Sham组）、缺血-再灌注组（I/R组）、缺血-再灌注+氢吗啡酮组（I/R+H组）、缺血-再灌注+PI3K抑制剂组（I/R+W组）、缺血-再灌注+氢吗啡酮+ PI3K抑制剂组（I/R+ H+ W组）。采用左冠状动脉前降支结扎30 min、再灌注120 min的方法建立心肌缺血-再灌注损伤模型。实验结束后,用TTC染色法测心肌梗死面积;用比色法检测血清乳酸脱氢酶（LDH）漏出量;末端标记法（TUNEL）测心肌细胞凋亡;Western blot法检测p-Akt、Bcl-2、Bax蛋白表达。采用SPSS 13.0软件行统计分析。采用单因素方差分析进行组间比较。结果:与Sham组比较,I/R组心肌梗死面积、血清LDH漏出量及心肌细胞凋亡增多,p-Akt表达和Bax表达上调,Bcl-2表达下调（ P<0.05）;与I/R组比较,I/R+H组心肌梗死面积、血清LDH漏出量及心肌细胞凋亡减少,心肌p-Akt及Bcl-2表达上调,Bax表达下调（ P<0.05）;与I/R+H组比较,I/R+H+W组心肌梗死面积、血清LDH漏出量及心肌细胞凋亡增多,p-Akt表达和Bcl-2表达下调,Bax表达上调（ P<0.05）。 结论:氢吗啡酮后处理可减轻心肌缺血-再灌注引起的心肌细胞凋亡,其心肌保护机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。     

新生儿脐带血红细胞相关参数及血红蛋白电泳结果分析

目的 了解梧州市新生儿α-珠蛋白生成障碍性贫血(简称地贫)的发生率,明确新生儿脐带血红细胞相关参数在筛查α-地贫中的意义.方法 选择2018年8月至2019年8月在梧州市中医医院出生的696例新生儿作为研究对象,对新生儿脐带血行血红蛋白(Hb)电泳和血常规检测,对区带进行扫描分析.根据电泳结果将其分为Hb Bart's阳性组和电泳正常组,分析Hb Bart's阳性组新生儿红细胞相关参数变化特点,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析各参数对α-地贫的诊断效能.结果 696例脐带血标本中共检出Hb Bart's阳性标本72例,其中男44例,女28例,阳性率为10.34％;静止型14例,阳性率为2.01％,标准型57例,阳性率为8.19％,中间型1例,阳性率为0.14％.Hb Bart's阳性组红细胞各相关参数与电泳正常组相比,差异均有统计学意义(P<0.05),其中Hb Bart's阳性组新生儿脐带血红细胞计数(RBC)、红细胞分布宽度变异系数(RDW-CV)、红细胞计数与血红蛋白比值(RBC/Hb)、红细胞计数与红细胞平均体积比值(RBC/MCV)高于电泳正常组,而Hb、红细胞平均体积(MCV)、平均血红蛋白含量(MCH)、平均血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞分布宽度标准差(RDW-SD)低于电泳正常组.ROC曲线分析显示,各参数用于诊断α-地贫的曲线下面积为MCH>RBC/Hb>MCV>RDW-SD>RBC/MCV>MCHC.当RBC/MCV为4.7418时,其诊断α-地贫的灵敏度为79.2％,特异度为84.8％,当RBC/Hb为3.2013时,其诊断α-地贫的灵敏度为86.1％,特异度为96.3％.结论 以脐带血红细胞相关参数作为α-地贫筛查指标,具有准确、经济、便捷的特点,能及早地为α-地贫基因携带患儿立卡建档,降低α-地贫基因携带者成年后相互婚配导致重症地贫患儿出生的概率.