成年大鼠延髓薄片制备的改良方法

目的:建立一种适用于膜片钳记录研究的成年大鼠延髓薄片制备方法。方法:用改制的注射器将延髓和上颈髓段从离断的椎管中直接吹出;采用水平切的方式制备延髓薄片;记录三叉神经脊束核尾侧亚核(Vc)神经元的自发放电和诱发放电活动。结果:分离得到的延髓和上颈髓标本光滑完整;水平切的延髓薄片较好地保持了Vc的形态学结构和神经元活性,可较好地记录到Vc神经元自发的兴奋性突触后电流和诱发的双脉冲抑制活动。结论:本方法操作简单,取材快速,延髓薄片外形完整且能保持神经元活性,适用于成年大鼠Vc的膜片钳研究。     

双轴旋转运动刺激对大鼠前边缘皮质神经元放电的影响

目的:探索前庭信息是否调节前边缘皮质(prelimbic cortex,PrL)区神经元的活动。方法:体重130¹50 g雄性SD大鼠,分成两组:对照组和运动刺激组。运动刺激组动物接受2 h双轴旋转运动刺激,以刺激前庭感受器。采用全细胞脑片膜片钳技术,分别在电流钳和电压钳模式下,刺激PrL浅层(II/III层)并记录PrL深层(V/VI层)神经元,分析动作电位(action potential,AP)特性和诱发的兴奋性突触后电流(evoked excitatory postsynaptic current,eEPSC)。结果:2 h双轴旋转刺激没有改变PrL神经元AP阈值、幅值、半幅时程、峰值上升相最大斜率以及峰值下降相最大斜率等参数(P>0.05,n=10);但向神经元输入波宽180 ms,80150 g雄性SD大鼠,分成两组:对照组和运动刺激组。运动刺激组动物接受2 h双轴旋转运动刺激,以刺激前庭感受器。采用全细胞脑片膜片钳技术,分别在电流钳和电压钳模式下,刺激PrL浅层(II/III层)并记录PrL深层(V/VI层)神经元,分析动作电位(action potential,AP)特性和诱发的兴奋性突触后电流(evoked excitatory postsynaptic current,eEPSC)。结果:2 h双轴旋转刺激没有改变PrL神经元AP阈值、幅值、半幅时程、峰值上升相最大斜率以及峰值下降相最大斜率等参数(P>0.05,n=10);但向神经元输入波宽180 ms,80²80 pA的脉冲电流后,旋转刺激组PrL神经元放电数目显著增加(P<0.05,n=8)。结论:前庭信息可影响PrL神经元活动,故PrL很可能是接受和处理前庭信息的高级脑结构之一。     

促甲状腺激素释放激素对结肠平滑肌钾电流的影响

目的探讨促甲状腺激素释放激素(TRH)对大鼠结肠平滑肌细胞膜瞬时外向钾电流(Ito)和延迟整流钾电流(Ik)的影响。方法酶解法急性分离单个大鼠结肠平滑肌细胞,运用膜片钳方法检测10、20、50、100μmol/L的TRH对结肠平滑肌细胞膜Ito和Ik的影响。结果 TRH浓度依赖性减少Ito(P<0.05),10、20、50、100μmol/L的TRH可使峰值Ito降低13.4%、28.0%、39.5%、53.4%,但Ik降低不明显(P>0.05)。结论 TRH阻滞大鼠结肠平滑肌细胞的瞬时外向钾电流,但不能降低延迟整流钾电流,TRH可能通过调节细胞的兴奋性对肠道动力产生影响。     

大鼠纹状体主神经元和中间神经元电学特性的研究

目的:观察大鼠纹状体主神经元、快速放电中间神经元及低阈值放电中间神经元的电学特性。方法:应用脑片膜片钳全细胞记录技术,在大鼠纹状体脑片标本上,监测及观察纹状体内神经元的被动和主动电学特性以及动作电位的发放特征。结果:纹状体主神经元静息膜电位处于轻度超极化状态,具有内向整流特性,并且在触发第一个动作电位之前有一个相对缓慢的去极化过程;纹状体快速放电中间神经元的放电频率很高,其动作电位具有较大幅度的后超极化,去极化电流可以诱导该神经元产生快速放电并伴随阈下膜电位震荡;纹状体低阈值放电中间神经元具有较大的输入阻抗和绝对值较小的静息膜电位,这类神经元具有低阈值放电的典型电学特性。结论:大鼠纹状体主神经元和中间神经元的被动和主动电学特性存在明显差异,这可以作为区分不同类型神经元的依据。     

交泰丸及其组分含药血清对豚鼠心室肌细胞钠通道的影响

目的探讨交泰丸及不同组分含药血清对单个豚鼠心室肌细胞Na~+通道的影响。方法制备含药血清,急性分离豚鼠心室肌细胞,细胞复钙后随机分为空白组、黄连组(黄连100 g煎液)、肉桂组(肉桂10 g煎液)、黄连加肉桂组(黄连100 g单煎液+等体积肉桂10 g单煎液)和交泰丸组(黄连100 g+肉桂10 g合煎),各组分别加入各含药血清,实验分为10%和15%两个浓度组,加药完成后细胞放于37℃,5%CO_2的孵育箱中孵育24 h后进行膜片钳实验,记录Na~+通道电流及其激活和失活曲线。结果与空白组比较,15%浓度黄连组、肉桂组、黄连加肉桂组、交泰丸组均不同程度抑制Na~+电流(P0.05),其中黄连加肉桂组差异最显著;10%浓度药物组差异无统计学意义(P0.05)。与空白组比较,15%浓度交泰丸组Na~+通道激活和失活时间常数延长(P0.05)。结论交泰丸及各组分含药血清对钠离子电流有不同程度的抑制作用,与Ⅰ类抗心律失常药物的作用机制相同,这可能是交泰丸抗心律失常的电生理机制。     

大鼠心脏移植物排斥反应时心肌瞬时外向钾电流与心肌细胞动作电位变化的研究

目的:通过复制大鼠心脏移植模型,研究心肌瞬时钾电流在心脏移植物排斥反应时的变化,及动作电位变化。方法:复制大鼠腹部心脏移植模型,对照组(n=20)为Lewis-Lewis同基因移植,实验组(n=20)为Brown Norway-Lewis异基因移植。于移植后第2~4天处死大鼠,取心脏移植物进行病理检查并利用全细胞膜片钳技术记录心肌细胞动作电位(AP)、心肌瞬时外向钾电流(I_(to))及内向整流钾电流(Ik_1)。结果:大鼠腹部心脏移植模型复制成功,组织学可见对照组心脏移植物在移植后无明显排斥反应,而实验组在移植后第2、4天有轻度到中重度排斥反应;在移植后第2天,两组心肌细胞瞬时外向钾电流(I_(to))密度无明显差异;第4天,实验组较对照组Ito密度显著下降,内向整流钾电流(Ik_1)显著下降(P0.05)。在移植后第2、4天,实验组较对照组心肌细胞动作电位时程(APD)均显著延长(P0.01)。结论:在大鼠心脏移植物排斥反应发生时,心肌细胞APD明显延长,I_(to)及Ik_1密度均显著下降。     

癫癎发病机制研究

癫癎是一种常见的神经系统疾病,发病率(2～5)/1 000人,严重影响患者的生活、工作和学习,成为中枢神经系统疾病中的一大顽疾.因此,对癫发病机制的研究成为当今国际神经科学领域的重要课题.通过对动物模型和人类癫手术切除的海马标本研究,癫的发病机制可能是由于兴奋性异常增高、抑制机制不足或两者兼有之而导致的癫灶内神经元兴奋性过高,从而导致这些神经元的失控性自发性异常放电,进而引起了癫的反复性发作[1-2].     

在体记录大鼠海马神经元对不同单色激光闪光刺激的反应

目的:探讨海马CA1锥体神经元对不同单色激光闪光刺激的反应,为论证激光诱发的神经系统生物学效应提供实验支持。方法:健康成年SD大鼠麻醉后,行气管插管术,开颅钻孔暴露脑面,进行在体膜片钳记录。全细胞记录稳定后,采用4种不同波长的单色激光对其眼球进行闪光刺激,记录大鼠海马神经元的反应。结果:给予大鼠闪光刺激后,其海马神经元对蓝色激光和紫色激光表现出明显的超极化反应,对红色和绿色激光刺激则没有明显的反应。蓝光引起的变化中,超极化的幅值为(8.32±1.10)m V,反应持续时间为(115.32±13.02)ms;紫光引起的超极化的幅值为(9.01±2.25)m V,刺激反应持续时间为(109.27±16.62)ms,蓝光和紫光之间没有统计学差异。50 m W、75 m W、100 m W、125 m W功率的紫色激光刺激引起的超极化幅值,分别为(7.28±0.16)m V、(9.25±0.71)m V、(10.91±0.08)m V、(12.67±0.38)m V,相关性分析显示幅值变化与刺激功率高度正相关。结论:麻醉状态下,蓝光和紫色的闪光刺激可以诱导大鼠海马神经元出现明确的抑制性反应,红光和绿光没有明显的作用。     

绝对不应期电刺激对心力衰竭豚鼠心室肌细胞动作电位时程和L型钙电流的影响

目的 探讨绝对不应期电刺激(ARPES)对健康和心力衰竭豚鼠心室肌细胞(分别简称NVM和FVM)动作电位(AP)时程(APD)和L型钙电流(ICa-L)的影响。方法 应用膜片钳技术中电流钳,首先记录基础刺激S1所诱发的AP(APS1),与S1延迟10 ms给予ARPES,记录ARPES给予后的AP(APARPES),比较APS1和APARPES的APD的值,以APD30、APD50和APD90代表动作电位复极30%、50％和90％时的APD值。分别以APS1和APARPES为测试电压,记录AP电压钳下的细胞膜ICa-L。结果(1)在NVM和FVM,ARPES应用后APD均明显延长,以APD30和APD50最为显著(P<0.01)。(2)在NVM,与APS1电压钳记录的ICa-L相比,APARPES电压钳记录的ICa-L电流强度有一过性的减弱和继发增强,但其单位膜电容下的电流强度的整合值略有降低(P<0.05)。在FVM,与APS1电压钳记录的ICa-L相比,APARPES电压钳记录的ICa-L电流强度的减弱程度明显减少,其单位膜电容下的电流强度的整合值是增加的(P<0.01)。结论 ARPES延长NVM和FVM的APD,对NVM和FVM的ICa-L具有不同的影响。     

染料木黄酮对大鼠胰岛素分泌的调控作用

<正>我国糖尿病的发病率近年来呈现快速增长的趋势。2型糖尿病以胰岛素分泌相对不足和胰岛素抵抗为主要特征,因此,促进胰岛素分泌是临床治疗2型糖尿病的重要手段。染料木黄酮(genistein)主要来源于豆类植物,大量证据表明染料木黄酮对糖尿病、慢性缺氧、骨质疏松等有一定的预防和治疗作用[1-3]。研究显示,染料木黄酮可改善2型糖尿病大鼠的胰岛素抵抗[1],但其对胰岛素分泌的作用及机制尚不