他克莫司对大鼠肝脏组织蛋白磷酸酶2A和P-AKT表达的影响

目的 通过观察他克莫司对大鼠血糖、胰岛素水平、肝脏组织蛋白磷酸酶2A和磷酸化AKT表达的影响,进一步探究他克莫司导致血糖升高的机制。方法 将60只雄性SD大鼠（89.83?.44g）随机均分为他克莫司组和对照组,他克莫司组（n=40）,每日空腹（禁食水8小时）灌胃给药,剂量为4mg/kg?d;对照组（n=20）,每日空腹灌胃给予等量生理盐水,每月测量大鼠体重、空腹血糖, 5个月后处死大鼠,心脏穿刺取血,;取胰腺组织和肝脏组织,测大鼠血清胰岛素水平,行胰腺组织病理组织学观察,并对肝脏行组织处理和免疫组织化学技术检测肝细胞浆质中蛋白磷酸酶2A和磷酸化AKT的表达。结果 用药2个月后,他克莫司组大鼠的血糖水平明显高于对照组（P＜0.05）,他克莫司组大鼠的胰岛素分泌指数、胰岛素敏感指数和均明显低于对照组（P＜0.05）;胰岛素抵抗指数明显增高（P＜0.05）。他克莫司组大鼠与对照组相比,其肝细胞浆质内PP2A表达明显增加,磷酸化的AKT表达明显减少。结论 他克莫司导致胰岛细胞坏死,胰岛细胞数量减少,胰岛素的分泌降低、胰岛素敏感性下降、胰岛素抵抗增加,从而导致大鼠血糖升高。他克莫司增加大鼠肝脏组织PP2A的表达,减少肝脏组织磷酸化的AKT的表达,可能通过PI3K/AKT信号转导途径参与胰岛细胞凋亡和胰岛素抵抗,引起血糖的升高。     

龙血素A对大鼠肝星状细胞增殖及Frizzled-4受体蛋白表达的影响

［摘要］目的　研究WNT信号通路中卷曲蛋白-低密度脂蛋白相关蛋白复合受体（Frizzled/LRP）在体外培养活化大鼠肝星状细胞（aHSCs）中的表达及龙血素A（Loureirin A）干预对大鼠肝星状细胞（aHSC）增殖及α-平滑肌肌动蛋白、转化生长因子β1分泌的影响,探讨龙血素A抗肝纤维化的细胞分子机制．方法　分离SD大鼠肝星状细胞,体外传代培养诱导细胞活化,倒置相差显微镜下观察肝星状细胞活化前后形态学变化,用不同浓度龙血素A处理活化的大鼠肝星状细胞（aHSCs）．MTT法测定龙血素A对肝星状细胞的生长抑制率;Western Blot方法从蛋白水平检测肝星状细胞中Frizzled-4受体蛋白;Elisa测定药物干预后细胞培养上清液中α-SMA和TGFβ1的含量．结果　与对照组相比,龙血素A抑制肝星状细胞增殖并有明显的时间-剂量效应关系,IC50=0.30 μg/μL;龙血素A在蛋白水平显著下调受体蛋白Frizzled-4表达,同时抑制肝星状细胞分泌α-SMA、TGFβ1（P＜0.05）．结论　Frizzled-4受体蛋白在活化的大鼠肝星状细胞（aHSCs）中高表达,经龙血素A干预后,Frizzled-4表达量明显降低,细胞增殖受到抑制,α-SMA、TGFβ1合成和分泌量下降,这提示龙血素A可能与WNT信号通路调节肝纤维发生和血管新生的分子机制相关．     

曲古抑菌素A对博莱霉素致肺纤维化小鼠NF-κB表达的影响研究

目的观察曲古抑菌素A（TSA）对博莱霉素（BLM）诱导的肺纤维化小鼠核因子-κB（NF-κB）表达的影响。方法96只健康雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、TSA早期干预组和TSA晚期干预组,各24只。模型组、TSA早期干预组和TSA晚期干预组小鼠均予以气管内滴注BLM（10mg/kg体重）溶液0.15ml诱导肺纤维化模型,对照组小鼠予0.9%氯化钠注射液0.15ml气管内滴注。建模后,TSA干预组分阶段（早期：第1~14天;晚期：第15~28天）予以TSA（40mg/kg体重）溶液腹腔注射,2次/周。模型组和对照组予以等体积二甲基亚砜腹腔注射作为溶媒对照。建模后第7、14、28天各组均随机分3批处死小鼠8只,留取右肺上叶组织行HE染色和Masson染色观察肺泡炎及肺纤维化程度,并行Szapiel评分,右肺中、下叶组织碱水解法检测羟脯氨酸（HYP）含量,免疫组化方法检测NF-κB表达水平。结果病理学检查比较,对照组小鼠肺泡结构正常,模型组小鼠肺组织在第7天出现出血、渗出等肺泡炎性改变,第28天出现明显肺纤维化。模型组小鼠肺组织各时点肺泡炎Szapiel评分、HYP含量、NF-κB表达水平均高于对照组（均P＜0.05）;TSA早期干预组小鼠各时点以上指标均低于模型组（均P＜0.05）,而TSA晚期干预组与模型组比较均无统计学差异（均P＞0.05）。结论早期应用TSA或能通过抑制NF-κB的表达发挥延缓肺纤维化的作用。     

降钙素原联合激活素A评估老年重症脓毒症患者预后的价值

目的观察老年重症脓毒症患者降钙素原(PCT)和激活素A水平动态变化及其在预后和病情评估中的价值。方法对66例老年重症脓毒症患者随访28d,根据预后分为存活组48例和死亡组18例,比较两组患者入院时急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ（APACHEⅡ）和序贯器官衰竭（SOFA）评分,检测入院时、入院第3、5、7天CRP、乳酸、PCT和激活素A水平,分析两者与SOFA评分、APACHEⅡ评分的相关性及其预测预后的价值。结果两组入院时及入院第3天血清PCT水平和入院时激活素A水平分别比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）;死亡组入院时C反应蛋白（CRP）、乳酸、SOFA评分和APACHEⅡ评分均明显高于存活组（均P＜0.05）;死亡组入院第5、7天PCT水平和入院第3、5、7天激活素A水平均明显高于存活组（均P＜0.05）,与同组入院时比较差异无统计学意义（P＞0.05）;存活组入院后第5、7天PCT和激活素A水平较同组入院时明显下降（P＜0.05）;入院第5、7天PCT水平和入院第3、5、7天激活素A水平分别与SOFA评分、APACHEⅡ评分均呈正相关;PCT和激活素A预测死亡的ROC曲线下面积（AUC）分别为0.815和0.826。结论血清PCT和激活素A水平可评估老年重症脓毒症患者预后,两者持续保持高水平提示预后不良。     

趋化因子CXCL12可能参与白细胞介素17A对小鼠肺成纤维细胞的活化

目的: 研究IL-17A促进小鼠肺成纤维细胞活化及趋化因子CXCL12在其中的作用。方法: 以雄性BALB/c小鼠为研究对象,小鼠腹腔注射重组小鼠IL-17A后取小鼠肺组织。采用实时逆转录PCR和蛋白质印迹法检测小鼠肺组织α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和Ⅰ型胶原蛋白的mRNA和蛋白表达,采用免疫组织化学法和实时逆转录PCR法测定肺组织中趋化因子CXCL12的表达。分离培养正常小鼠原代肺成纤维细胞,采用免疫荧光染色法和光学显微镜观察鉴定原代肺成纤维细胞。将分离的肺成纤维细胞与不同浓度的重组小鼠IL-17A共培养后收集细胞及上清液,采用实时逆转录PCR法测定细胞中α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白和CXCL12的mRNA水平,采用ELISA法测定培养上清液中Ⅰ型胶原蛋白和CXCL12蛋白水平。结果: 与对照组比较,重组小鼠IL-17A处理后小鼠肺组织中α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白的mRNA和蛋白水平均升高（均P < 0.01）。与不同浓度的重组小鼠IL-17A共培养后,小鼠肺成纤维细胞表达α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白和CXCL12的mRNA明显增加（均P < 0.01）,其培养基上清液中Ⅰ型胶原蛋白、CXCL12的浓度也明显升高（均P < 0.01）,且呈剂量依赖性。结论: IL-17A能促进肺成纤维细胞的活化并转化为肌成纤维细胞,分泌Ⅰ型胶原蛋白明显增加,促进细胞外基质的沉积,从而导致肺纤维化的发生和发展,而活化的成纤维细胞分泌的趋化因子CXCL12可能参与了这个过程。     

基于脂质组学的子宫内膜异位症生物标志物研究进展

子宫内膜异位症的发病机制不明,缺乏有效的生物标志物,疾病的延误诊断非常突出。脂质组学技术为子宫内膜异位症的诊断和预测提供了新的途径。外周血、子宫内膜液、腹腔液和卵泡液的鞘磷脂、磷脂酰胆碱和磷脂酰丝氨酸等对子宫内膜异位症及疾病分型具有良好的诊断价值;在位子宫内膜的磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸联合磷脂酸有望成为早期子宫内膜异位症的生物标志物;外周血的脂代谢数据对预测子宫内膜异位症相关不孕也有重要价值。脂质组学技术的发展将进一步推进子宫内膜异位症相关发病机制、疾病预测、诊断和治疗等方面的研究进展。     

不同炮制方法对熟地黄中7种化学成分含量的影响

目的通过建立熟地黄中梓醇、益母草苷、地黄苷A、地黄苷D、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷和5-羟甲基糠醛（5-HMF）7种化学成分同时分析的方法,测定清蒸熟地黄、酒炖熟地黄、九蒸九晒熟地黄3种不同炮制品中7种化学成分的含量,探讨不同炮制方法对熟地黄中化学成分的影响。方法采用超声提取法处理熟地黄3种不同炮制品,赛默飞C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）;流动相:0.1%磷酸（A）-乙腈（B）,梯度洗脱,程序为:0~8 min,1% B;8~9 min,1%~4% B;9~25 min,4% B;25~35 min,4%~20% B;35~50 min,20% B;50~50.01 min,20%~1% B;50.01~55 min,1% B。柱温:30℃,检测波长:203 nm、332 nm,测定3种样品中7种化学成分的含量。结果生地黄中未检出5-HMF。清蒸熟地黄和酒炖熟地黄中,环烯醚萜单糖苷梓醇和益母草苷几乎全部降解;环烯醚萜双糖苷地黄苷A、地黄苷D和苯丙素苷毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷的含量较生地黄中含量降低;可以检测到5-HMF。九蒸九晒熟地黄中环烯醚萜单糖苷梓醇和益母草苷、环烯醚萜双糖苷地黄苷A、地黄苷D和苯丙素苷毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷几乎全部降解;可以检测到5-HMF。结论不同炮制方法对熟地黄成分的影响较大,该方法可用于熟地黄不同炮制品的质量控制。     

基因表达谱分析肝细胞癌的特征基因

目的:生物信息学方法建立全面的肝细胞癌（HCC）差异表达基因谱以及初步筛选基于该恶性肿瘤样本的特征 基因。方法:利用R语言中的edgeR包分析不同组之间差异表达的基因（DEGs）。利用STRING数据库分析预测蛋白质的 功能联系和蛋白质相互作用。R语言的clusterProfiler包做GO（gene ontology）（包括biological process、 molecular function和cellular component）及KEGG（kyoto encyclopedia of genes and genomes）通路富集分析。 筛选差异基因显著富集的GO和KEGG分子途径。利用SLC7A11（solute carrier family 7 member 11）和CCDC14 （coiled-coil domain-containing 14）基因作为肝细胞癌的标志物,利用ELISA法进行检测（确诊的HCC阳性患者为 HCC组,共195例;HCC阴性正常人群为对照组,共107名）,计算阳性率。结果:与癌旁对照样本相比,一共鉴定出454 个差异表达基因,其中高表达基因234个,低表达基因220个。PPI方法进一步筛选出排名前10的重要潜在基因,其中 SLC7A11和CCDC14两个基因排名靠前。利用富集分析,差异基因主要集中在neuroactive ligand-receptor interaction通路中。与对照组相比,HCC组SLC7A11和CCDC14存在显著的高表达[SLC7A11:（70.12±14.3） ng/mL比 （23.12±7.11）ng/mL,t=6.17,P<0.001;CCDC14:（6.17±2.31）pg/mL比（2.13±0.84）pg/mL,t=5.35, P<0.001]。SLC7A11针对HCC检测阳性率达到80.2%,而CCDC14达到68.8%。结论:SLC7A11和CCDC14可以作为HCC的两个 潜在的有效临床生物标志物。     

血清S1P、LXA4联合检测在诊断成人支气管哮喘中的价值

目的研究血清1-磷酸鞘氨醇(S1P)、脂氧素A4(LXA4)联合检测对成人支气管哮喘的诊断价值。方法选取哮喘发作期患者120例,按疾病严重程度分为轻度哮喘组(n=43)、中度哮喘组(n=43)和重度哮喘组(n=34);同时选取40例健康受试者为健康对照组。比较4组肺功能指标[1秒钟用力肺呼气容积(FEV1)与预计值比值(FEV1%)、用力肺活量与预计值比值(FVC%)、FEV1/FVC]及血清S1P、LXA4水平;采用Pearson相关性分析方法对血清S1P、LXA4水平与肺功能指标的相关性进行分析;采用ROC曲线研究血清S1P、LXA4水平单项检测及两者联合检测对诊断成人支气管哮喘的临床价值。结果 4组FEV1%、FVC%、FEV1/FVC值及血清S1P、LXA4水平比较差异有统计学意义(F=16.255、209.605、26.220、571.290、284.822,均P<0.01),且随着哮喘严重程度的增加,FEV1%、FVC%、FEV1/FVC值及血清LXA4水平逐渐降低,血清S1P水平逐渐升高。Pearson相关性分析显示,血清S1P水平与FEV1%、FVC%、FEV1/FVC值均呈负相关(r=-0.807、-0.860、-0.766,均P<0.01),血清LXA4水平与FEV1%、FVC%、FEV1/FVC值均呈正相关(r=0.655、0.707、0.819,均P<0.01)。ROC曲线结果显示,血清S1P、LXA4水平检测及两者联合检测诊断成年哮喘的AUC曲线下面积分别为0.864(95%CI 0.801～0.913)、0.807(95%CI 0.737～0.865)、0.981(95%CI 0.946～0.996),敏感度分别为88.33%、86.67%、99.17%,特异度分别为77.5%、80.00%、92.5%。结论血清S1P、LXA4水平能反映成人支气管哮喘患者肺功能情况及疾病严重程度;两指标联合检测对成人支气管哮喘的临床诊断有较高价值。