慢病毒载体介导增强绿色荧光蛋白感染人脂肪间充质干细胞及其成脂分化的实验研究

目的 探讨慢病毒载体介导增强绿色荧光蛋白(EGFP)感染人脂肪间充质干细胞(hADSCs)的最佳条件与其成脂分化能力.方法 以不同感染复数(MOI)感染hADSCs8h,在荧光倒置显微镜下观察感染效果;流式细胞仪检测感染率;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测感染前后hADSCs的增殖情况;成脂诱导14d后油红O染色,Image-ProPlus图像分析软件比较hADSCs在感染前后的成脂能力.结果 以MOI值1、10、25、50、75、100、150感染hADSCs时,其感染率依次为0.24％、13.48％、40.33％、89.27％、94.52％、98.49％和99.11％.以MOI值50感染hADSCs,比较感染前后细胞的增殖与成脂能力,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 慢病毒感染hADSCs的最佳MOI值为50.     

叶酸聚乙二醇接枝支化聚乙烯亚胺纳米载体转染螺旋神经节细胞

背景：新型阳离子纳米材料叶酸聚乙二醇接枝支化聚乙烯亚胺易于合成和改性,稳定性好,结构及性能容易调控,已被作为基因治疗转染载体应用于多种疾病的研究。 目的：观察叶酸聚乙二醇接枝支化聚乙烯亚胺转染体外培养小鼠内耳螺旋神经节细胞的可行性及特点。 方法：分别以叶酸聚乙二醇接枝支化聚乙烯亚胺（实验组）、阳离子脂质体Lipofectamine^TM 2000（对照组）作为载体,制备携带增强型绿色荧光蛋白的转染载体系统。将昆明小鼠螺旋神经节细胞分别培养于含实验组和对照组转染载体系统的DMEM/F-12培养基中,培养24 h后,MTT法观察载体系统的细胞毒性,倒置荧光显微镜观察细胞形态及绿色荧光蛋白表达强度,流式细胞仪检测细胞转染率。 结果与结论：两种载体分别转染后,螺旋神经节细胞形态均未发生明显改变,但两组载体对螺旋神经节细胞均有一定的毒性,实验组载体毒性较小且转染效率较高（P〈0.05）。结果说明叶酸聚乙二醇接枝支化聚乙烯亚胺基因转染体外螺旋神经节细胞的转染效率及细胞毒性均优于传统的阳离子脂质体。     

端粒酶启动子突变对EGFP启动效率影响

目的 观察人端粒酶催化亚单位(hTERT)的突变启动子启动增强型绿色荧光蛋白(EGFP)发光强度的变化情况。方法 应用PCR引入突变方法获得hTERT上游序列长约300bp的启动子片段,包括单增强子(E-box)突变序列(2个);双E-box突变序列;单转录因子特异蛋白1(Sp1)结合位点突变序列(5个);Sp1结合位点全部(Sp1-5)突变序列,分别克隆入无启动子的绿色荧光蛋白EGFP的基因上游,稳转入SW579细胞中,观察细胞EGFP的发光强度。结果 除了约-110bp的单Sp1突变对EGFP的启动效率影响不大之外,任何一种E-box或Sp1突变的启动子均显示启动效率不同程度的下降,其中双E-box突变的启动子和5个SP1结合位点均突变的启动子启动绿色荧光蛋白的表达强度明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 转染人端粒酶启动子突变基因,能够抑制SW579细胞EGFP的发光效率,证明人端粒酶启动子的E-box序列、SP1结合序列对启动子的启动效率密切相关,为hTERTp调控元件用于肿瘤靶向性基因治疗提供了基础依据。     

绿色木霉Tv04-2的筛选及其对人参立枯病菌拮抗机制的研究

用对峙培养法,筛选出1株对人参立枯病Rhizoctonia solani Kuhn具有较强拮抗作用的木霉菌株Tv04-2。显微观察发现,该菌株产生的大量较细的螺旋状菌丝对立枯茵具有缠绕作用,两种菌丝结合位点伴有细胞壁溶解现象。进一步研究发现,木霉菌孢子悬浮液、代谢液、难挥发性物质对人参立枯菌均有较高的抑制作用,而易挥发性物质对人参立枯菌的影响不显著。研究结果表明,木霉菌Tv04-2对人参立枯病菌的拮抗作用是营养、空间竞争、重寄生作用及代谢产物抗生作用的综合体现。     

绿化婺江两岸增加民族药源

对婺江河岸原有绿化等的调查研究,分析护坡结构与植被分布等存在的问题,提出合理的改进方案来改善河岸生境并形成良性生态循环、降低城市热岛效应、扩展河岸基本功能,形成几个绿色环保新兴产业并汇集成国内一流的产业集群,加速促进循环经济的发展。     

融合蛋白HSP70-EGFP的表达、纯化及其在树突状细胞内化抗原中的应用

目的:研究树突状细胞(DCs)对热休克蛋白70(HSP70)融合蛋白的内化作用.方法:首先原核表达并分离纯化HSP70和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合蛋白HSP70-EGFP.实验中所用DCs来源于人外周血.内化实验分3组进行:将1,2组DCs分别与融合蛋白HSP70-EGFP和蛋白EGFP孵育30 min;第3组先将DCs与HSP70孵育30 min,再与HSP70-EGFP孵育30 min.之后将3组DCs转至37 ℃孵箱内,培养0.5,1,2和24 h,应用流式细胞仪检测含HSP70-EG-FP或EGFP的DCs数量.应用IL-12 Eli-spot法检测HSP70-EGFP等抗原促进DCs分泌IL-12的效果.结果:①成功获得了重组蛋白HSP70-EGFP,Mr约为97 000,HSP70-EGFP表达量占总蛋白的35.7%.纯化后的融合蛋白HSP70-EGFP溶液经紫外线灯照射时发出鲜绿色的荧光.②流式细胞仪检测结果显示在37 ℃孵育0.5 h后,HSP70-EGFP孵育的DCs组阳性率为63.3%,其余两组为阴性.在37 ℃孵育1,2和24 h后,3组阳性率均大于80.0%.IL-12 Eli-spot检测结果显示,在刺激DCs活化及分泌IL-12的水平上,HSP70-EGFP与脂多糖(LPS)之间的差别无统计学意义(P＞0.05),而HSP70-EG-FP的活化DCs能力明显高于EGFP(P=0.001).结论:①受体介导的吞噬作用在DCs内化HSP70-EGFP的初始阶段起主要作用,随孵育时间的延续,吞饮作用占主要地位.②HSP70-EGFP可促进DCs分泌特征性细胞因子IL-12.     

混合菌固态发酵产纤维素酶条件的研究

目的 以稻草秸秆粉为碳源,利用绿色木霉和黑曲霉进行固体发酵产纤维素酶的研究.方法 从混合菌接种比例、麦麸与稻草粉质量比、发酵时间和三角瓶装量4个方面,通过单因素实验和正交实验优化混合菌固体发酵条件.确定该混合菌株的最优产酶条件.结果 混合菌最佳固体发酵条件为:绿色木霉和黑曲霉接种比例为1∶1.0,麦麸与稻草粉质量比为1∶3.0,发酵时间为4 d,装量为50 ml/1000ml三角瓶.在此最佳发酵条件下FPA酶活、CMC酶活、β-G酶活分别:5.29,9.33,49.91 IU/ml,分别是单菌发酵的2.28～2.47倍、2.39～2.45倍、1.38～2.09倍.结论 混合菌发酵产生的各酶活性均高于各种菌单独发酵.     

“围城必阙”——箍围药在肿瘤绿色治疗中的应用

"围城必阙"出自《孙子兵法·军争篇》,意为:围城之战,需要留出一门,这样守方以为留有一线生机,作战便不会以全力相对,故而便于攻方破城。肿瘤绿色治疗特别重视中医外治疗法的应用,讲求内外同治。箍围疗法作为中医外治疗法的重要组成部分,以箍围药布局在恶性肿瘤周围,对其进行围困,进而缩小肿瘤范围,并且在肿瘤周围人为的营造出一个"护场",进一步抑制肿瘤生长,在肿瘤的治疗上具有相当的优势,与"围城必阙"有异曲同工之妙。     

周新足疗

随着人民生活水平的提高和保健意识的增强,越来越重视生活的质量和身体的健康。"足反射法"这一古老而年轻的传统绿色疗法,也随着市场经济的潮流发展成为一个新兴的保健行业技术。     

绿色化学理念在天然药物化学实验教学中的渗透与应用

天然药物化学是一门以实验为基础的科学,总是与环境污染相联系,因此天然药物化学实验教学中渗透绿色化学理论,加强环保教育,不但可扩展学生的知识面,提高学生的学习兴趣,而且能在有限的教学时间内使学生受到绿色化学的熏陶,这种简便有效的方法值得进一步完善和推广。