制备脱细胞真皮基质的实验研究

目的 采用高渗盐一胰蛋白酶法制备脱细胞真皮基质(Acellular dermal matrix,ADM)并进行组织学观察和微生物学检测,探讨这种方法的可行性和机制。方法 SD大鼠4只,分别麻醉后以8％硫化钠溶液脱去躯干部皮毛,常规消毒铺巾,切取大鼠背部全层皮肤制成厚约0.4mm的中厚皮,1mol／LNaCl溶液37℃浸泡48h分离表真皮,以0．25％胰蛋白酶 0.1％乙二酸二乙胺(EDTA)溶液37℃分别热消化60、70、80、90min脱去细胞成分,并进行冷冻干燥处理。ADM作光镜、电镜观察和微生物学检测并比较分析每只大鼠不同时间消化处理的ADM的差别和不同大鼠经相同处理得到的ADM的差别。结果消化时间不同的ADM均具有柔软、一定的柔韧性和伸展性、弹性好、弯曲不断裂的特点,组织学观察见表皮细胞均完全去除,但是消化90min,ADM的基底膜(Basement membrane complex,BMC)和胶原纤维的结构与排列有不同程度的破坏;消化60、70min的ADM虽然基底膜和胶原纤维的结构与排列正常存在,但脱细胞不完全;消化80min制备的ADM组织学检查基底膜完整连续．胶原纤维、弹力纤维结构及排列完整规则,没有细胞成分存在。不同SD大鼠经同样的处理所得的ADM一般形状和组织学没有明显差别。微生物学检测没有细菌生长。结论采用高渗盐一胰蛋白酶法制备脱细胞真皮基质的方法能达到既完全脱去细胞成分又使基底膜完整连续,胶原纤维和弹力纤维结构及排列正常的双重目标,ADM柔韧性好、不断裂,无细菌生长。     

西达本胺增加慢性髓系白血病耐药株K562/ADM细胞对柔红霉素的敏感性

目的 观察西达本胺（CDM）能否影响人慢性髓系白血病耐药株K562/ADM细胞对柔红霉素（DNR）的敏感性,并探讨其可能的分子机制。方法 体外常规培养K562细胞和K562/ADM细胞,给予不同剂量CDM和（或）DNR处理48 h后,采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测CDM与DNR对K562和K562/ADM细胞的毒性作用,采用Chou-Talalay中效分析法对两药的联合效应进行评价,采用流式细胞术检测细胞增殖、细胞周期和凋亡,采用Western blotting方法检测组蛋白2AX（H2AX）、γH2AX（Ser139）、共济失调毛细血管扩张征突变基因（ATM）、p-ATM（Ser1981）、乳腺癌易感蛋白l（BRCA1）和p-BRCA1（Ser1524）的蛋白表达水平。 结果 DNR可剂量依赖性地抑制K562/ADM细胞活力（P<0.05）,半数抑制浓度（IC50）为11.76 μmol/L,耐药倍数为18.09;CDM可协同增强DNR对K562/ADM细胞的抑制作用置信区间（CI）（CI<1）,反转倍数为8.11;与对照组相比,DNR组细胞增殖率显著降低（P<0.05）,G2/M期细胞比例和凋亡率明显升高（P<0.05）,而无毒剂量的CDM可协同增强DNR引起的细胞增殖抑制、G2/M期阻滞和细胞凋亡（P<0.05）;耐药株K562/ADM细胞中ATM和BRCA1蛋白表达水平显著高于其亲代K562细胞（P<0.05）;DNR可上调K562/ADM细胞中H2AX、ATM和BRCA1蛋白的磷酸化水平（P<0.05）;CDM与DNR联用可使γH2AX蛋白水平进一步升高,但p-ATM和p BRCA1蛋白水平的变化则相反（P<0.05）。 结论 CMD可反转K562/ADM细胞对DNR的耐药性,这可能与上调H2AX蛋白的磷酸化水平以及下调ATM和BRCA1蛋白的磷酸化水平有关。     

环指蛋白146在Aβ诱导的C6细胞凋亡中的作用研究

目的:探讨环指蛋白146(RNF146)在Aβ诱导C6细胞的凋亡过程中的作用。方法:大鼠神经胶质瘤细胞株C6细胞分为对照组(control)和Aβ处理组(Aβ)。Annexin V-EGFP/PI染色法检测细胞凋亡,Western Blot方法检测C6细胞中RNF146的表达和凋亡诱导因子(AIF)蛋白的表达和分布。结果:与对照组比较,Aβ处理能够促进细胞凋亡,同时减少细胞中RNF146的表达,并促进AIF核转位。结论:Aβ可导致C6细胞凋亡,其机制与RNF146表达下调并激活AIF核转位有关。     

原发性皮肤CD4+小/中等大小T细胞淋巴组织增殖性疾病4例临床病理分析

目的探讨原发性皮肤CD4~+小/中等大小T细胞淋巴组织增殖性疾病的临床特点、组织学特征、诊断及鉴别诊断。方法分析4例原发性皮肤CD4~+小/中等大小T细胞淋巴组织增殖性疾病的临床资料、病理形态、免疫表型及基因重排,并复习相关文献。结果 (1)原发性皮肤CD4~+小/中等大小T细胞淋巴瘤好发于中老年人的头颈部,常为单发结节。(2)肿瘤细胞弥漫浸润真皮层。(3)肿瘤细胞小～中等大,轻～中度异形性,大细胞少于30%。(4)肿瘤细胞CD4~+/CD8~-,一般不表达CD30和细胞毒性标记。(5) T细胞受体克隆性重排。结论原发性皮肤CD4~+小/中等大小T细胞淋巴瘤属于少见的皮肤原发T细胞淋巴组织增殖性疾病,肿瘤完整切除后预后较好。     

2型糖尿病患者外周血CD8+CD25+Foxp3+Treg细胞检测及意义

目的探讨外周血CD8~+CD25~+Foxp3~+Treg(CD8~+Treg)细胞比例在2型糖尿病(T2DM)疾病过程中的作用。方法选取T2DM患者90例。根据尿微量白蛋白(MAL),分为45例T2DM伴正常蛋白尿患者(NMAU,MAL30 mg/24 h),45例T2DM伴微量蛋白尿患者(MAU,MAL 30～300 mg/24 h),同时选择门诊体检健康人员45名作为对照组(HC)。通过特定蛋白仪检测患者mAlb浓度;流式细胞仪检测CD8~+Treg细胞比例;Luminex200检测血浆白细胞介素(IL)-8、1β、6和肿瘤坏死因子(TNF)-α浓度。结果与HC组[4.43(3.26～5.75)%]相比,NMAU组[4.06(3.15～5.43)%]和MAU组[3.52(2.30～4.87)%]患者CD8~+Treg细胞比例降低,且MAU组降低更明显(P0.05);与HC组相比,MAU组和NMAU组患者血浆细胞因子TNF-α、IL-8、IL-6和IL-1β浓度均升高(P0.05);MAU组患者CD8~+Treg比例与血清细胞因子TNF-α(r=-0.444 8,P0.01)、IL-8(r=-0.341 2,P0.05)、IL-6(r=-0.365 3,P0.05)和IL-1β(r=-0.319 2,P0.05)呈负相关;Logistic回归分析显示CD8~+Treg对T2DM患者可能具有保护作用。结论通过调控T2DM患者外周血CD8~+Treg细胞比例,有可能减缓糖尿病的进程。     

鼻咽黏膜黑色素性嗜酸细胞化生1例并文献复习

目的探讨鼻咽黏膜黑色素性嗜酸细胞化生(melanotic oncocytic metaplasia of nasopharynx, MOMN)的临床病理特征。方法对1例MOMN进行HE及免疫组化EnVision两步法染色,并复习相关文献。结果患者男性,54岁,临床表现为耳鸣、听力下降等症状。行喉镜检查在咽鼓管开口处黏膜见一直径约0.3 cm黑色结节,表面光滑,边界清楚。镜下见鼻咽黏膜内大小相对一致的嗜酸性腺体,与周围组织界限清楚,缺乏包膜,部分腺体扩张,腺体由双层细胞排列构成;细胞呈柱状,胞质丰富嗜酸性,胞质内见黑色颗粒样物沉积,细胞核圆形,大小一致,染色质细腻,个别细胞见小核仁,未见核分裂象。免疫表型:Melan-A、S-100均阳性,HBM-45阴性。患者行喉镜下肿物切除,耳鸣消失,听力得到恢复,未见复发。结论 MOMN是一种极罕见的良性病变,均发生于亚洲人,临床医师或缺乏经验的病理医师易误诊为其它病变,手术完整切除即可治愈。     

γδT细胞在自身免疫病中的研究进展

自身免疫病(autoimmune disease, AID)是机体对自身抗原产生免疫反应,进而导致体内组织器官损害的疾病。作为一种具有独特表型和功能的T淋巴细胞亚群,γδT细胞与AID的发生发展密切相关。故文章就γδT细胞与多种免疫细胞的相互作用在AID中的作用、机制研究作一综述。     

血液相关指标与弥漫大B细胞淋巴瘤预后关系分析

目的分析弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)相关临床资料,探讨常见血液相关指标对DLBCL预后的指导意义。方法回顾性分析2011年1月至2017年12月世纪坛医院收治的45例初治DLBCL患者临床资料,生存分析应用Kaplan-Meier法,单因素分析应用Log-rank检验,多因素分析应用Cox回归模型。结果单因素分析结果显示:血小板计数(PLT)、Hans分型、血红蛋白水平(HGB)、血清白蛋白(ALB)水平差异具有统计学意义(P<0.05),与预后有关。多因素分析结果显示:PLT、Han分型差异具有统计学意义,可作为DLBCL独立预后因素。性别、年龄、初诊原发部位、红细胞计数(RBC)、白细胞计数(WBC)、中性粒细胞绝对值计数(Neu#)、淋巴细胞绝对值计数(Lym#)、中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)、血小板/淋巴细胞绝对值计数比值(PLR)、乳酸脱氢酶(LDH)、总蛋白(TP)差异均无统计学意义。结论PLT≤209×10^9/L,Hans分型为非生发中心型,HGB≤100g/L,ALB<40g/L可能是DLBCL不良预后因素。PLT、Hans分型可作为DLBCL患者总生存期的独立影响因素。