HPLC-UV-ELSD同时测定知母黄柏药对提取物中盐酸小檗碱、黄柏碱、知母皂苷BⅡ

目的:建立知母黄柏药对提取物中盐酸小檗碱、黄柏碱、知母皂苷BⅡ的HPLC-UV-ELSD含量测定方法。方法:采用HPLC-UV-ELSD方法,色谱柱:Dikma C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.2%冰醋酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,柱温30℃,UV检测波长280 nm,蒸发光散射检测器检测,漂移管温度46℃,氮气压力1.5 Bar。结果:盐酸小檗碱、黄柏碱及知母皂苷BⅡ的线性范围分别是1.008～3.528μg(r=0.999 5),0.322～1.127μg(r=0.999 6),0.702～2.457μg(r=0.999 8),平均加样回收率分别为100.11%,98.97%,99.56%;其RSD分别为1.08%,0.90%,1.37%。结论:该法简便快速,重复性良好,结果准确可靠,可用于知母黄柏药对提取物中主要有效成分的含量测定。     

大鼠口服知母皂苷后入血成分研究

目的 分析大鼠口服知母总皂后吸收入血的情况,为进一步研究知母总皂苷的药理作用提供化学物质依据。方法给大鼠灌胃知母皂苷2．5g／kg,于不同时间采集血清样品,用电喷雾质谱（ESI—MS）检测知母皂苷吸收入血成分。结果通过比较给药前后的TOF总离子流图,对给药后血浆中特征峰的保留时间及相关化合物离子峰进行了比较分析,在血浆中发现了两个原型皂苷。结论大鼠口服知母总皂苷后,知母皂苷B-Ⅱ和知母皂苷B-Ⅲ被吸收入血。     

不同产地知母饮片中菝葜皂苷元及芒果苷的含量测定

目的考察不同产地知母饮片中菝葜皂苷元及芒果苷的含量。方法采用高效液相色谱法分别测定不同产地知母饮片中菝葜皂苷元及芒果苷的含量。测定菝葜皂苷元以甲醇-水(95∶5)为流动相;流速为1.0 mL/min;柱温30℃;用蒸发光散色检测器检测,漂移管温度85℃。测定芒果苷以水-乙腈-0.85%磷酸(100∶25∶5)为流动相;流速为0.6 mL/min;柱温30℃;检测波长为258 nm。结果河北、内蒙、山西、陕西、安徽等产地菝葜皂苷元含量为1.5%~2.2%,芒果苷含量为0.3%~1.9%。结论本法测定知母饮片中菝葜皂苷元及芒果苷含量简单、快速、准确、重现性好,符合含量测定建立的要求,可以作为判断知母饮片质量的方法之一。     

百合知母汤治疗围绝经期综合征的实验研究

目的 观察百合知母汤对未成熟小鼠雌激素样活性的作用及其时围绝经期综合征大鼠的影响.方法 采用幼龄雌性小鼠,连续灌胃4、8、16 g/kg3个剂量的百合知母汤10 d后,测定各组小鼠子宫、卵巢质量,并计算脏器系数.选用老龄雌性大鼠,连续灌胃2、4、8 g/kg3个不同剂量的百合知母汤30～34 d后,测定各组大鼠卵巢、子宫、垂体、肾上腺质量,计算脏器系数,进行卵巢、子宫组织学检查,并检测血清中雌二醇(E2),促滤泡生成激素(FSH)及促黄体生成激素(LH)的水平.结果 与其他组比,百合知母汤能明显增加未成熟小鼠子宫、卵巢系数(P<0.05～0.01);显著增加大鼠卵巢、子宫、肾上腺系数(P<0.05～0.01);组织学检测显示,百合知母汤具有改善大鼠卵巢内卵泡发育状况,减轻子宫萎缩性病变的作用(P<0.05～0.01);百合知母汤3个剂量组均能明显增加自然衰老型围绝经期综合征大鼠血清E2水平(P<0.01).并降低血清FSH、LH水平(P<0.05～0.01).结论 百合知母汤时未成熟小鼠具有雌激素样活性,并且对自然衰老型围绝经期综合征大鼠的内分泌水平与围绝经期综合征症状具有明显改善作用.     

百合知母汤对自然衰老型围绝经期综合征肾虚证大鼠中枢神经递质含量的影响

目的:观察百合知母汤(BHZMT)对自然衰老型围绝经期综合征肾虚证大鼠脑内中枢神经递质含量的影响.方法:采用自然衰老雌性15～16月龄SD大鼠,随机分为:围绝经期组、围绝经期+BHZMT组、围绝经期+TX肾阴虚组、围绝经期+TX+BHZMT组、围绝经期+ADE肾阳虚组、围绝经期+ADE+BHZMT组,另设一青年对照组共7组,造模1周后,各组连续灌胃给予BHZMT 3周.于末次给药次日,脱颈椎处死大鼠,迅速分离下丘脑,分别采用高效液相色谱--电化学方法测定单胺类神经递质NE、DA、5-HT的含量和免疫组化方法测定P物质和β-内啡肽的含量.结果:围绝经期大鼠NE、β-内啡肽水平下降,DA、5-HT、P物质水平明显升高;肾阴虚证大鼠NE、DA、5-HT、P物质水平明显升高,β-内啡肽则明显减少;肾阳虚证大鼠5-HT水平明显升高;经BHZMT治疗后,肾阴虚大鼠下丘脑NE、DA、5-HT(P<0.01)、P物质的含量降低,β-内啡肽的含量升高;肾阳虚大鼠下丘脑NE、DA含量升高,5-HT水平降低,但无显著性差异.结论:BHZMT可有效调节围绝经期肾阴虚大鼠脑内中枢神经递质含量,从而改善围绝经期综合征.     

抗氧化天然产物对芥子气氧化损伤的保护作用

目的 观察丹参、知母提取物对芥子气中毒所致氧化损伤的影响,评价其对芥子气中毒的预防和(或)治疗效果。方法 (1) 细胞水平试验：乳腺癌细胞MDA-MB-231和血管平滑肌细胞(VSMC)与芥子气200 μmol·L^-1作用15 min;受试药为丹酚酸4 mg、知母黄酮16 mg（1∶4）或丹酚酸4 mg、知母黄酮8 mg（1∶2）溶于50 μl DMSO,无血清DMEM稀释至100和50 mg·L^-1。预防给药时,药物与细胞预孵2 h,然后染毒; 治疗用药时,细胞染毒后与药物孵育24 h。分别观察细胞存活率并检测MDA水平。(2) 整体动物试验：雄性SD大鼠随机分为正常对照组、中毒对照组、维生素C（200 mg·kg^-1）治疗组（阳性对照）、抗氧化剂低剂量治疗组、中剂量治疗和高剂量治疗组。芥子气染毒剂量为3.5 mg·kg^-1（70%LD₅₀）,皮下注射,1 h后给予治疗;按丹酚酸∶知母黄酮1∶4,每日ig给予30, 60和120 mg·kg^-1,连续7 d。观察大鼠生存状况,测定血清中MDA, GSH和SOD水平,并取肠、肝进行病理学检查。结果 不同浓度的提取物复方对芥子气细胞毒性均无预防作用,但有一定治疗作用;复方提取物对芥子气引起的细胞氧化损伤有一定防护效果。提取物复方可提高芥子气中毒动物存活率;对脂质氧化和SOD抗氧化体系无明显影响;但可剂量依赖性地恢复芥子气中毒后的GSH水平。结论 芥子气对SD大鼠引起的氧化损伤可能主要由GSH体系介导,丹参、知母提取物通过升高GSH水平,发挥抗氧化作用,进而起到抗芥子气中毒效果。     

新蛋白质合成介导知母活性成分对M_2受体稳定性的调节作用

目的 探讨知母活性成分ZMS提高CHOm2细胞毒蕈碱样乙酰胆碱2型受体 (M_2受体) mRNA表达的机制.方法 体外培养至80% ～90%融合的CHOm2细胞分为ZMS 1组(单纯添加1×10~(-5) mol/L ZMS作用24 h)、ZMS 2组(添加1×10~(-5) mol/L ZMS作用24 h后加入1 μg/mL环己酰亚胺作用12 h)、ZMS 3组(加入1 μg/mL 环己酰亚胺预处理4 h后加入1×10~(-5) mol/L ZMS作用24 h),以上各组分别设立对照组(以等体积DMSO替代ZMS,其他处理与相应ZMS组相同).各组细胞培养基中均加入放线菌素D抑制mRNA合成,于不同时间点收集CHOm2细胞,Real-time PCR检测M_2受体mRNA相对表达量并计算半衰期.结果 与相应对照组比较,ZMS 1组和ZMS 2组CHOm2细胞M_2受体mRNA的半衰期明显延长,分别为(4.75±0.54)h vs(2.13±0.23)h和(5.43±1.13)h vs (2.46±0.09) h(均P<0.05);添加1 μg/mL 环己酰亚胺预处理的ZMS 3组CHOm2细胞M2受体mRNA半衰期的(3.06±0.23)h与其相应对照组的(3.00±0.20)h比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 ZMS提高M2受体mRNA的稳定性需要有新蛋白质合成的参与.     

桂枝芍药知母汤加减治疗类风湿性关节炎

本文结合桂枝芍药知母汤治疗类风湿性关节炎的中医理论及临床病例分析,得出了桂枝芍药知母汤疗病机理和组方原则,并在此基础之上提出了中医治疗杂病的一些思路.     

唐祖宣应用桂枝芍药知母汤治疗四肢关节病经验

唐祖宣老师从事周围血管病研究40余年,擅长应用仲景经方治疗周围血管病,尤对温阳药物有独到阐发。喜用峻剂,多起沉疴。桂枝芍药知母汤是仲景经方,有温阳散寒,祛风除湿,清利湿热之作用。文章介绍唐老师用此方治疗四肢关节病的独到经验,文中列举了桂枝芍药知母汤治疗历节（类风湿关节炎）、下肢水肿（深静脉血栓形成）、漏肩风（肩关节周围炎）,并分别附以验案,以利于经方的继承和灵活应用。