复方对乙酰氨基酚胶囊治疗感冒发热、疼痛的疗效和安全性

目的:评价复方对乙酰氨基酚治疗由感冒引起的发热疼痛的效果及安全性。方法:随机双盲双模拟对照研究。入选139例,完成135例,其中A组(试验组n=68)服用复方对乙酰氨基酚胶囊+模拟片;B组(对照组n=67)服用对乙酰氨基酚片+模拟胶囊。2组按入组顺序服药,每日3次,疗程均为3~5d。观察2组疗效和不良反应。结果:试验组痊愈率为74 %,有效率达96 %,对照组痊愈率为69 %,有效率达91 % (P>0. 05),对发热和头痛的临床症状2组均有改善,试验组68例发热病人中有97 %病人恢复正常, 62例头痛病人有95 %的病人恢复正常;对照组65例发热病人和头痛病人分别有92 %和91 %恢复正常。试验组不良反应发生率为2 % (1 /68),对照组为3 % (2 /67) (P>0. 05)。未出现严重及预料之外的不良反应。结论:复方对乙酰氨基酚对治疗感冒具有明显的效果。2药的疗效相仿,无明显不良反应。     

重组Pichia pastoris的发酵条件初步研究

在摇瓶中进行重组Pichia pastoris菌株SIBAS 5071发酵条件的研究,考察了碳源、底物、pH、磷酸盐浓度、溶氧量等对该菌细胞生长和产生S-腺苷甲硫氨酸(sAM)的影响,初步确定的优化条件下发酵3 d后,SAM产量可达2.3 g/L(118 mg/g干细胞).     

无机砷甲基化及其毒性的研究进展

砷剂已成功应用于急性早幼粒细胞白血病的治疗,但砷暴露会导致中毒和癌症发生。砷的这种"致癌"和"治癌"的双面生物学效应与其在细胞内甲基化代谢产物的种类密切相关。砷在体内代谢是一个极其复杂的过程,无机砷甲基化是砷在动物体内的主要代谢方式,被公认为砷元素的解毒过程。近年来,对无机砷体内代谢产物甲基砷比无机砷毒性更强的报道也逐年增多。因此,了解无机砷甲基化代谢的生物学机制,有助于发现降低砷毒性的有效手段。     

HPLC法测定人红细胞中的S-腺苷同型半胱氨酸和S-腺苷甲硫氨酸

目的建立HPLC法测定人红细胞中S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)和S-腺苷甲硫氨酸(SAM)浓度的方法。方法人红细胞经同体积醋酸盐缓冲液稀释后,经10%高氯酸蛋白沉淀后直接进样。采用Athena C18 WP柱(150 mm×4.6 mm,3μm),柱温35℃,流动相为含5 mmol·L-1庚烷磺酸钠的50 mmol·L-1 Na H2PO4缓冲液(pH 4.0)-甲醇(80:20,v/v),流速:1.0 m L·min-1,检测波长254 nm。采用外标法定量。结果SAH和SAM分别在0.025~10 mg·L-1和0.05~20 mg·L-1内线性关系良好,SAH和SAM的日内、日间RSD均<12%,加样回收率在95.5%~106.3%,样品提取后在24 h内稳定性良好。结论该法快速、简便、准确,适用于SAH和SAM的体内分析检测。     

育龄女性MTHFR、MTRR基因多态性分布以及与血清叶酸和同型半胱氨酸水平的相关性研究

目的探讨叶酸代谢关键酶基因5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T、A1298C和甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)A66G多态性在育龄女性中的分布特征,并分析不同遗传特征对外周血叶酸和同型半胱氨酸(Hcy)水平的影响。方法选取2018年3月至2020年1月在上海计生所医院妇科就诊的汉族育龄女性2 651例,根据知情同意原则,采集口腔黏膜上皮脱落细胞,抽提基因组DNA,使用荧光定量PCR方法检测MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G基因多态性,采用化学发光法检测外周血叶酸水平,循环酶法检测血清Hcy水平。结果 (1)MTHFR C677TCC、CT、TT的基因型频率分别为33.2%、47.9%、18.9%,C、T等位基因频率分别为57.1%、42.9%;MTHFR A1298C AA、AC、CC的基因型频率分别为66.6%、30.5%、2.9%,A、C等位基因频率分别为81.8%、18.2%;MTRR A66G AA、AG、GG的基因型频率分别为56.4%、36.9%、6.8%,A、G等位基因频率分别为74.8%、25.2%。(2)MTHFR C677T和A1298C两位点连锁有7种组合,频率最高的是CT/AA(31.9%),没有CT/CC和TT/CC组合。两位点间存在完全连锁不平衡(D′=0.984,R2=0.161)。(3)MTHFR C677T不同基因型的叶酸和Hcy水平差异有统计学意义(P<0.05)。TT基因型的叶酸水平低于CC基因型,TT基因型的Hcy水平高于CC基因型。经单因素Logistic回归分析发现,MTHFR C677T TT基因型发生高Hcy血症的危险性是CC基因型的9.97倍(95%CI:3.81~26.05)。MTHFR A1298C和MTRR A66G不同基因型与血清叶酸及Hcy水平差异无统计学意义(P>0.05)。(4)经单因素回归分析,Hcy水平与叶酸水平呈负相关(R2=0.061,P<0.05),叶酸水平可解释Hcy水平个体差异的6.1%。结论获取了上海市汉族育龄女性MTHFR和MTRR基因多态性的群体遗传学特征,血清Hcy水平与MTHFR C677T基因多态性以及血清叶酸水平有关。筛查MTHFR和MTRR基因多态性并监测Hcy水平对围生期保健有重要的指导意义。     

甲硫氨酸饥饿通过抑制程序性死亡配体1诱导胃癌细胞凋亡

目的 研究甲硫氨酸饥饿诱导胃癌细胞凋亡的分子机制。方法 TCGA数据库分析胃癌组织中PD-L1的表达;胃癌AGS细胞分为对照组、甲硫氨酸饥饿处理组、siPD-L1处理组、甲硫氨酸饥饿联合siPD-L1处理组,CCK-8检测胃癌细胞活力,AO/EB双染检测胃癌细胞凋亡数目,流式细胞仪检测胃癌细胞凋亡率,western blotting检测胃癌细胞PD-L1、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达;Starbase数据库分析PD-L1与Bcl-2抗凋亡蛋白家族(BCL2A1,MCL1,BCL2,BCL2L1)之间的联系。结果 PD-L1在胃癌组织中高表达(P=0.0011),PD-L1的表达与胃癌G分级相关(P＜0.05);甲硫氨酸饥饿和siPD-L1能够抑制胃癌细胞存活率(P＜0.05),促进凋亡(P＜0.05),抑制PD-L1和Bcl-2表达(P＜0.05),上调促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达(P＜0.05);甲硫氨酸饥饿联合siPD-L1处理显示siPD-L1与甲硫氨酸饥饿起协同作用(P＜0.05)。PD-L1与Bcl-2抗凋亡蛋白家族之间存在正相关(P＜0.005)。结论 甲硫氨酸饥饿是通过抑制PD-L1的表达下调抗凋亡蛋白Bcl-2、上调促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达从而诱导胃癌细胞凋亡。     

L-甲硫氨酸通过调节脊髓DNA甲基化水平减轻甲醛溶液所致急性炎性痛机制研究

背景　甲硫氨酸能够促进DNA甲基化的发生,DNA甲基化参与疼痛的发生发展和维持。急性炎性痛是临床常见症状,控制不及时会转化成慢性炎性痛,外源性补充甲硫氨酸可能通过调节DNA甲基化参与调节急性炎性痛,改善患者疼痛症状。目的　本研究采用甲醛溶液诱导急性炎性痛模型大鼠,观察注射L-甲硫氨酸（L-MET）是否会减轻大鼠足底急性炎性痛并探讨其机制,以期为寻找新的疼痛生物标志物和开发理想的镇痛新药提供理论依据。方法　2017年7月-2018年12月,将24只健康成年清洁级雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠按照随机数字表法分为A组（0.9%氯化钠溶液+0.9%氯化钠溶液组）、B组（L-MET+0.9%氯化钠溶液组）、C组（0.9%氯化钠溶液+2 g/L甲醛溶液组）、D组（L-MET+2 g/L甲醛溶液组）,每组6只。B组、D组腹腔注射L-MET,2次/d,总量不超过0.18 mg/kg,连续注射3 d;A组、C组注射等量0.9%氯化钠溶液。C组、D组左后足足跖部皮下注射2 g/L甲醛溶液20 μl,制作甲醛溶液所致急性炎性痛模型,大鼠足部肿胀并会出现相应的抬足舔足行为视为模型制作成功;A组、B组注射等量0.9%氯化钠溶液。全程记录给药后60 min大鼠行为学,并记录疼痛次数,每隔3 min为1个观察时段,共分20个观察时段。行为学检测结束后,将大鼠处死,取脊髓L4~L6之间脊髓组织,检测大鼠脊髓全基因组DNA甲基化水平及大鼠脊髓DNA甲基化转移酶（DNMT）1、DNMT2、DNMT3a、DNMT3b RNA水平。结果　A组、B组大鼠无明显不适异常反应;C组、D组大鼠出现躁动不安、注射足抬起不着地、舔咬或抖动注射足等反应,其疼痛行为反应呈典型的双相变化,从注射后即刻开始,持续3~5 min的急性疼痛时相（第一时相）,5~10 min的静息期,随后出现可持续0~45 min的继发性疼痛时相（第二时相）。C组、D组大鼠各时间点疼痛次数均多于A组、B组（P<0.05）;D组大鼠6~39 min疼痛次数少于C组（P<0.05）。B组、D组大鼠脊髓全基因组DNA甲基化水平高于A组（P<0.05）;C组、D组大鼠脊髓全基因组DNA甲基化水平低于B组（P<0.05）;D组大鼠脊髓全基因组DNA甲基化水平高于C组（P<0.05）。C组、D组大鼠脊髓DNMT3a、DNMT3b RNA水平高于A组、B组（P<0.05）;D组大鼠脊髓DNMT3a RNA水平低于C组,DNMT3b RNA水平高于C组（P<0.05）。结论　L-MET对于甲醛溶液所致急性炎性痛模型大鼠具有明显镇痛作用,其机制与脊髓全基因组DNA甲基化水平以及DNMT水平的变化有关。     

S腺苷甲硫氨酸对肝癌细胞急性缺血/缺氧过程中的生物学作用

目的：研究S腺苷甲硫氨酸（SAMe）在急性缺血/缺氧过程中对肝癌细胞HepG2的生物学作用,并通过检测自噬的变化探讨其可能机制。方法：real time-PCR检测自噬特异性基因（Beclin 1）表达的变化;吖啶橙染色后,采用荧光显微镜定性观察自噬;CCK-8法检测HepG2细胞的成活率;用AnnexinⅤ/PI流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。结果：SAMe可诱导HepG2细胞的自噬,在单纯缺血和缺血/缺氧处理因素下,HepG2自噬在荧光强度和Beclin 1基因水平分别比空白对照组增强约3.2倍和3.5倍。细胞成活率分别比空白对照组增加了约20%和30%。SAMe对HepG2细胞具有显著的抑制作用,这种抑制作用在缺血/缺氧环境中更加明显,SAMe单独处理组和SAMe预处理结合缺血/缺氧组,其细胞成活率与空白对照组相比分别下降了约30%和70%。随着细胞成活率下降,细胞凋亡比例相应增加,与空白对照组相比,细胞经SAMe处理后凋亡比例增加约18%;细胞经SAMe预处理后再予以缺血/缺氧,凋亡比例增加约30%。结论：在SAMe抑制HepG2细胞生长过程中,自噬起着重要作用。     

血清缬氨酸、甲硫氨酸浓度水平与乳腺癌临床特征及风险的相关性

  目的  比较健康人群、乳腺良性肿瘤患者和乳腺癌患者的血清Val、Met浓度差异,探究血清缬氨酸和甲硫氨酸与乳腺癌临床特征及风险的关系。  方法  采用液相色谱-串联质谱法测定38名乳腺良性肿瘤患者,87名乳腺癌患者的血清Val、Met浓度,同时选择91名健康人群作为对照组。经Kruskal-Wallis H检验比较不同分组间的血清Val、Met浓度差异,分析不同化疗方案及手术方式对乳腺癌患者血清Val、Met浓度的影响。再通过二元Logistic回归分析、计算优势比和95%置信区间（CI）来评估血清Val、Met与乳腺癌的风险关系并绘制ROC曲线评估血清Val及Met对乳腺癌的诊断效能。  结果  与健康对照组相比,乳腺癌（BC）组的血清Val浓度水平高于乳腺良性肿瘤（BE）组和健康对照组,BC组和BE组的Met水平都高于健康对照组,差异有统计学意义（P < 0.05）。不同TNM分期及接受不同化疗方案的乳腺癌患者血清Val、Met浓度,差异无统计学意义（P > 0.05）,但不同分子分型组间乳腺癌患者的血清Val浓度,差异有统计学意义（P < 0.05）。另外,血清Val浓度水平和乳腺癌风险无明显关系,但血清Met会显著影响乳腺癌的发生（P < 0.001）,血清Met的浓度越高,乳腺癌的患病风险就越高,并且Met的浓度水平每增加一个单位,乳腺癌患病风险就增加24%（OR = 1.24 95% CI:1.15～1.34）。并且血清Met（P < 0.001）对乳腺癌的诊断具有统计学意义。其AUC为0.83、敏感度及特异性分别为69%和90.1%,临界值为19.76 μmol/L。  结论  乳腺癌患者的血清Val浓度高于乳腺良性肿瘤患者及健康人群;与健康人群相比,乳腺癌患者及乳腺良性肿瘤患者的血清Met浓度水平也有所升高。血清Val浓度水平和乳腺癌风险无明显关系,但血清Met与乳腺癌风险呈负相关,并且血清Met对乳腺癌诊断具有一定的诊断效能。     

湖北松滋市汉族女性 MTHFR 和 MTRR 基因多态性分布

目的分析湖北省松滋地区女性亚甲基四氢叶酸还原酶（methylenetetrahydrofolatereductase,MTHFR）C677T、A1298C及甲硫氨酸合成酶还原酶（methioninesynthasereductase,MTRR）A66G基因多态性的分布特征。方法采用现况研究方法,以松滋市1077例女性为研究对象,提取其口腔黏膜上皮细胞的基因组DNA,通过荧光定量PCR方法检测MTHFR和MTRR基因多态性。统计分析本地区基因多态性的分布特征,并与已报道其他地区进行比较。结果松滋市女性的MTHFR677TT纯合突变基因型频率为15．41％,与四川省德阳市（13．80％）基本一致,差异无统计学意义（P〉0．05）;高于广东省惠州市（10．86％）、海南省琼海市（6．14％）,低于江苏省镇江市（21．84％）、河南省郑州市（34．5％）、山东省临沂市（35．03％）,均有极显著性差异（P〈0．01）。MTHFR1298CC纯合突变基因型的分布百分数为2．60％,与四川省德阳市（6．26％）基本一致,差异均无统计学意义（P〉0．05）;低于海南省琼海市（7．13％）、广东省惠州市（7．24％）,高于山东省临沂市（2．42％）,差异均有统计学意义（P〈0．01）。MTRR66GG纯合突变基因型频率为6．41％,与琼海市比较,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论松滋市女性MTHFR和MTRR基因多态性分布具有地域特异性。