神经干细胞外泌体对低氧所致神经元凋亡的抑制作用

目的:初步探讨神经干细胞分泌的外泌体是否能抑制氯化钴(cobalt chloride,CoCl_2)诱导的缺氧模型中神经元的凋亡,并促进神经元的存活。方法:超速离心法分离大鼠神经干细胞分泌的外泌体;Western blot检测外泌体表面标志物ALG-2相互作用蛋白X(ALG-2-interacting protein X,Alix)和肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene 101,TSG101)的表达水平;用透射电子显微镜观察外泌体的形态;q Nano纳米生物颗粒分析仪检测外泌体的粒径分布。采用不同剂量的Co Cl_2处理神经元,建立CoCl_2诱导神经元凋亡的模型;将神经干细胞分泌的外泌体加入凋亡组神经元,CCK-8法检测细胞活力,TUNEL法检测细胞凋亡。结果:神经干细胞分泌的外泌体可表达Alix和TSG101;外泌体在透射电镜下的形态呈"杯口"状,大小约为100 nm;q Nano纳米生物颗粒分析仪检测外泌体的粒径为(95.0±23.5)nm(n=370);CCK-8实验结果显示不同浓度(200、400和600μmol/L)CoCl_2作用24 h,神经元活力呈剂量依赖性下降(P0.05);将神经干细胞分泌的外泌体加入凋亡组(CoCl_2浓度为400μmol/L)神经元后,神经元活力升高(P0.05),凋亡率下降(P0.05)。结论:神经干细胞分泌的外泌体能抑制低氧状态下神经元的凋亡并促进存活。     

红细胞增多时大鼠肺动脉压和血液流变学变化及普萘洛尔对其影响

为了研究红细胞增多对血液流变学和肺动脉高压的影响。同时观察普萘洛尔（心得安）对红细胞增多的治疗作用。将实验大鼠分为三组：对照组;氯化钴引起单纯红细胞增多组：红细胞增多加心得安组。结果发现,单纯红细胞增多引起肺动脉压、右室压增高,所有切变率下尤其低切变率下的全血粘度也增高,红细胞膜流动性降低,下肢肌肉血流量和体表温度下降。肺动脉压与红细胞压积和右室压之间有良好的正相关性。心得安对上述指标无改善作用。提示单纯红细胞增多即可形成肺功脉高压。而心得安对红强胞增多引起的血液流变学和肺动脉压的变化无影响。     

低氧模拟剂氯化钴诱导人类胆管癌细胞株QBC939 HIF-1α、VEGF表达的研究

目的在细胞水平探讨氯化钴（COCl2）诱导的缺氧状态下人类胆管癌细胞株QBC939 HIF-1α、VEGF蛋白的表达情况及其相关性。方法ELISA技术和免疫组织化学技术检测不同浓度CoCl2组（200、150、100、50μmol／L,不加药组为对照组）、缺氧不同时间段（6、12、24、48h）对QBC939细胞HIF-1α和VEGF蛋白表达的影响。结果CoCl2可上调胆管癌细胞株QBC939 HIF-1α、VEGF蛋白的表达,并且体现出一定剂量和时间范围内的依赖性关系。ELISA检测：不同浓度组（200、150、100、50μmol／L、对照组）VEGF蛋白的浓度分别为（1215．8±8．1）、（1030．8±11．1）、（710．9±3．2）、（414-3±2．5）、（102．1±5．6）pg／ml,不同浓度组与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）;缺氧不同时间段（6、12、24、48h）VEGF蛋白的浓度分别为（397．8±3．5）、（701．9±7．2）、（1038．8±8．2）、（1229．8±19．8）pg／ml,任意两组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。免疫组织化学检测：不同浓度组（200、150、100、50μmol／L、对照组）VEGF蛋白的平均灰度分别为（123．1±5．9）、（146．9±4.3）、（154．6±4．9）、（162．7±4．5）、（172．7±1．8）,与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）,HIF-1α蛋白的平均灰度分别为（109．5±5．3）、（137．5±4．4）、（151．7±2．9）、（161．3±4．9）、（172．0±5．4）,不同浓度组与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）;缺氧不同时间段（6、12、24、48h）VEGF蛋白的平均灰度分别为（154．8±3．8）、（142．9±2．7）、（136．6±4．7）、（110．3±4．9）任意两组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）,HIF-1α蛋白的平均灰度分别为（155．3±6．4）、（142．9±2．7）、（137．4±4．4）、（105．4±6．2）,任意两组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。分析不同浓度?     

金雀异黄素对氯化钴诱导的兔视网膜色素上皮细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的：研究氯化钴对体外培养的兔视网膜色素上皮(RPE)细胞血管内皮生长因子(vEGF)表达的诱导作用，以及金雀异黄素(genistein，Gen)对其表达的影响。方法：采用免疫荧光组织化学技术和激光共聚焦显微镜，以荧光比值来表示VEGF的表达，半定量分析氯化钴处理不同时间对体外培养的BPE细胞VEGF蛋白表达的诱导作用，以及Gen对低氧或氯化钴诱导的VEGF表达的影响。结果：对照组有低水平VEGF蛋白的表达，随着低氧或氯化钴处理时间的延长，荧光比值的变化表现为时间依赖性，在6h点达到高峰。Gen(50、100、200μmol/L组)与二甲基亚砜(DMSO)对照组相比，均可明显抑制氯化钴诱导的VEGF的表达，且此种抑制作用呈浓度依赖性。结论：Gen可抑制氯化钴诱导的RPE细胞VEGF表达，提示Gen对视网膜新生血管的形成具有潜在的预防及治疗价值。     

低氧对人白血病细胞株HL-60细胞增殖及HIF-1α表达的影响

目的探讨模拟低氧环境对人白血病细胞株HL-60细胞增殖及低氧诱导因子表达的影响。方法常规方法复苏、传代培养细胞,待细胞进入对数生长期后用于实验。将细胞分为低氧处理组和常氧对照组,常氧对照组采取常规培养,低氧处理组分别用50、200、400、800μmol/L二氯化钴(CoC12)处理,并于24、48、72 h收集细胞进行以下指标检测:≧倒置相差显微镜观察细胞形态变化;≧MTT比色法检测细胞增殖抑制率;≧实时荧光定量PCR检测HIF-1α在转录水平的表达。结果 1:低氧模拟环境下,细胞在形态上呈较明显变化,并随CoCl2浓度和处理时间的延长变化显著;2:MTT实验结果显示,与常氧对照组比较,CoCl2处理组均产生明显抑制作用,抑制率随着药物浓度增加而增大;3:实时荧光定量PCR结果表明,与对照组(24 h)相比,50μmol/L CoCl2和200μmol/L CoCl2低浓度处理组HIF-1αmRNA的表达均有上调,且上调呈剂量和时间依赖关系。结论 1:CoCl2模拟低氧后,细胞生长明显受抑;2:低浓度(50~200μmol/L)CoCl2组HIF-1αmRNA表达上调并呈现时间、浓度依赖性;3:本研究涉及的低氧模拟环境对HL-60细胞未引起明显的诱导分化现象。     

脂联素对氯化钴诱导肾小管上皮细胞凋亡及炎症反应影响研究

目的 探讨脂联素对氯化钴诱导的肾小管上皮细胞凋亡及炎症反应的影响.方法 将人肾小管上皮细胞株HK-2细胞分入4组:正常对照组,用DME/F-12培养液培养细胞24 h;氯化钴诱导缺氧模型组,用含600.0μM氯化钴的培养液培养细胞24 h;单独脂联素处理组,用含2.5μg/ml脂联素的培养液培养细胞24 h;氯化钴+脂...     

热休克蛋白90对抗氯化钴引起的心肌细胞损伤

目的探讨热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)在对抗氯化钴(cobalt chloride,CoCl2)诱导H9C2心肌细胞损伤中的作用。方法应用不同浓度的CoCl2处理H9C2心肌细胞,建立化学性缺氧诱导心肌细胞损伤的实验模型。应用CCK-8比色法检测细胞存活率;Western-blot法检测HSP90的表达;双氯荧光素染色荧光显微镜照相检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)检测试剂盒分析SOD活性抑制率。结果在400～1000μmol/L浓度范围内,CoCl2处理H9C2心肌细胞36 h,呈剂量依赖性地抑制细胞存活率。在0.5～36 h时间范围内,600μmol/L CoCl2呈时间依赖性地促进H9C2心肌细胞HSP90的表达。2～16μmol/L HSP90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-allylamino-17demethoxygeldanamycin,17AAG)呈剂量依赖性地加重600μmol/L CoCl2对H9C2细胞存活率的抑制。...     

Uhrf1过表达对缺氧小鼠心肌细胞HIF-1α/VEGF的影响

目的 研究泛素样含植物同源(PHD)结构域和环指域1(Uhrf1)过表达对体外缺氧小鼠心肌细胞中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探究Uhrf1对缺氧心肌细胞的保护作用。方法 选用氯化钴(CoCl₂)建立体外心肌细胞缺氧模型,以CCK-8、Western blot检测心肌细胞存活率和HIF-1α蛋白水平。用qPCR检测缺氧对心肌细胞Uhrf1表达的影响。心肌细胞随机分为正常组、空载组和Uhrf1组,观察各组心肌细胞形态学变化及自发搏动频率,用qPCR、Western blot检测Uhrf1过表达对缺氧心肌细胞HIF-1α和VEGF表达的作用。结果 250μmol/L CoCl₂可作为建立心肌细胞缺氧模型的最佳诱导浓度;与正常心肌细胞相比,缺氧使心肌细胞Uhrf1 mRNA水平上调(P<0.05)。成功转染Uhrf1质粒后,Uhrf1组缺氧心肌细胞中HIF-1α蛋白和HIF-1α、VEGF mRNA较空载组显著增加,心肌细胞自发搏动频率明显提高(P<0.05)。结论Uhrf1过表达显著上调缺...     

氯化钴预处理对缺氧预适应小鼠海马组织HIF-1α表达的影响

目的检测氯化钴预处理后小鼠海马组织缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在急性重复氧过程中的变化及其可能的机制。方法用数字表法将Balb/C小鼠随机分为氯化钴实验组和生理盐水对照组,2组动物分别在实验前3 h注射氯化钴和生理盐水,进行0次(H0)、1次(H1)、4次(H4)缺氧暴露,随即分别取海马组织,用Western blot及EMSA法检测HIF-1α蛋白质含量及HIF-1 DNA结合活性。结果生理盐水预处理后,小鼠的缺氧耐受时间逐次显著递增;氯化钴预处理后缺氧耐受时间恒定增高。氯化钴预处理H0、H1、H4组海马组织的HIF-1α蛋白质含量差异未见统计学意义,但HIF-1 DNA结合活性在H1组升高、H4组降低。生理盐水预处理组海马组织的蛋白质含量及HIF-1 DNA结合活性在H0、H1、H4组均依次增加。结论氯化钴预处理能显著增强小鼠对缺氧的耐受能力、激活海马组织中的HIF-1,但其分子机制可能与急性重复缺氧暴露增强缺氧耐受力的机制不同。     

镍铬钴混合物对小鼠肝脏毒作用机制的研究

目的：探讨镍铬钴混合物致小鼠肝脏损伤的机制，为早期防治镍铬钴混合物联合毒性所致的肝脏损伤提供理论依据。方法：模拟金川矿区矿石中Ni、Cr、Co平均含量百分比（0．26：0．30：0．02），连续10d小鼠腹腔注射硫酸镍2．5mg/kg、重铬酸钾0．14mg/kg、氯化钴0．41mg/kg及混合物0．09，0．17mg/kg染毒。制备肝细胞膜，采用定磷比色法检测肝细胞膜Ca^2 -ATPase活性；PDE法检测钙调素（CaM）含量；TBA法检测MDA含量和邻苯三酚自氧化改进法测定SOD活性。结果：各单体和混合物明显抑制肝细胞膜Ca^2 -ATPase活性，使肝组织中钙调素（CaM）含量降低，MDA含量升高的同时抑制SOD活性，尤以混合物组显著，并且混合物毒性大于各单体毒作用。结论：混合物在体内可能产生联合毒性，抑制肝细胞膜Ca^2 -ATPase活性，使钙调素（CaM）含量降低，导致钙稳态失衡；同时引起肝细胞脂质过氧化作用增强而致肝脏损伤。