盐酸埃他卡林对[~3H]格列本脲与动脉平滑肌K_(ATP)结合和解离动力学过程的影响以及与核苷酸的交互作用

目的　研究盐酸埃他卡林 (Iptakalimhydrochloride,Ipt)对 [3 H]格列本脲 (glibenclamide,Gli)与大鼠血管平滑肌ATP敏感性钾通道 (ATP sensitivepotassiumchannel,KATP)的硫脲受体(Sulfonylureareceptor,SUR2B)结合和解离动力学过程的影响 ,并比较其作用特点与核苷酸类物质的异同点及它们之间的交互效应。方法　KATP拮抗剂 [3 H]Gli与大鼠去内皮主动脉平滑肌特异性结合与解离的动力学试验。结果　 (1 )在浓度为 1 0pmol·L-1 ～ 0 5mmol·L-1 范围内 ,Ipt不能取代SUR2B与 [3 H]Gli2 0 0 3 0 616收稿 ,2 0 0 3 112 5修回 国家新药研究与发展重点项目 ,No 9690 10 10 1;国家“863”计划重大专项 ,No 2 0 0 2AA2Z3 13 7作者简介 :何华美 ,男 ,3 6岁 ,博士 ,副教授。研究方向 :心血管药理学。E mail:longchaoliang @sohu .com ;汪　海 ,男 ,40岁 ,研究员 ,博士生导师。研究方向 :心血管药理和新药。通讯作者。Tel :86 10 6693 2 65 1,Fax:86 10 682 1165 6,E mail:wh @nic.bmi.ac .cn之间的特异性结合。Ipt 1 0 0 μmol·L-1 调节 [3 H]Gli与SUR2B特异性结合的动力学过程的特征为抑制其结合动力学过程 ,使其结合速率减慢 ,结合幅度降低 ;促进其解离动力学过程 ,使其解离速率加快 ,解离幅度增加。 (2 )ATP     

建立5'-核苷酸实验室参考值范围必要性的探讨

5’-核苷酸（5＇-nucleotidase，5’-NT）是一种特殊的磷酸脂水解酶，能特异水解5’-核苷链于戊糖的5’-磷酸，生成核苷和无机磷酸，主要存在于肝脏中，最适pH值为6．6～7．0。受锰离子激活，但受镍离子抑制，长期以来作为一种检测肝胆疾病的指标应用于临床。我们在实际工作中发现，本实验室5’-NT的参考值范围与试剂厂家提供的参考值范围存在较大差异，因此必须建立实验室的参考值范围。本研究了上述两个参考值范围对血清5’-NT测定值阳性率的影响，现报告如下。     

浙江地区幽门螺杆菌临床菌株空泡毒素基因的变异及其表达活性分析

目的 了解浙江地区消化性溃疡(PU)和慢性胃炎(CG)患者感染幽门螺杆菌(Hp)vacA基因的变异及其空泡毒素表达情况。方法 从70株Hp中选择部分菌株测定其vacA基因的s区和m区核苷酸序列。用细胞培养的方法检测Hp菌株的空泡毒性。结果 6株sla型Hp菌株的s区扩增产物与报道的sla型60190株核苷酸序列相似性为93．2％～98．3％，4株m2型Hp菌株的m区扩增产物与报道的m2型87—203株核苷酸序列之间相似性为93．8％～97．6％。1株m1b型Hp菌株的m区扩增产物与报道的m1型60190株相应序列相似性为87．3％，与m2型87—203株相应序列之间相似性为71．7％。所有5株sla／m1型Hp对HeLa、RK-13和SGC-7901三种细胞均有明显的空泡毒作用；仅27.9％(12／43)的sla／m2型菌株对HeLa细胞表现为空泡毒作用，但分别有65．1％(28／43)和62.8％(27／43)的菌株对RK-13细胞和SGC-7901细胞有空泡毒作用。所有sla／m1b和sla／m1b—m2型Hp菌株对三种细胞均有明显的空泡毒作用，以RK-13细胞计，81.0％(17／21)的sla／m1b型Hp菌株和1株sla／m1b—m2型有空泡毒性。PU组感染的Hp菌株空泡毒性(84．4％)强于CG组(60．5％)，差异有统计学意义(P＜0．05)。结论 浙江地区患者感染的Hp菌株vacA基因变异主要在于m区。vacA基因空泡毒性的表达在HeLa细胞中低毒性的sla／m2型菌株在RK-13和SGC-7901细胞中仍有较高的空泡毒性。m1b型Hp空泡毒性强度介于m1和m2型之间。PU患者感染的Hp菌株其空泡毒性明显强于CG组。     

核苷酸切除修复基因表达水平与肺癌易感性的关系

[目的]探讨核苷酸切除修复基因表达水平与肺癌易感性关系。[方法]采用病例一对照分子流行病学方法，以RT-PCR技术检测98例原发性肺癌患者和112名健康者外周血淋巴细胞核苷酸切除修复基因(XPB、XPC、XPG、ERCCl)表达水平，比较基因表达水平与肺癌易感性的关系。[结果]肺癌病例组4种基因的表达水平均低于健康对照组，其中XPB和XPC表达水平在两组之间有显著性差异，吸烟人群中病例与对照组基因表达水平差异大于非吸烟人群与对照组的差异，低表达XPB和XPC的人群患肺癌的相对危险度分别是高表达人群的2．06和2．27倍。[结论]低表达XPB和XPC的人群肺癌发病风险增高。     

补锌对急性冷应激大鼠解偶联蛋白水平的影响

目的　研究补锌对大鼠耐寒力的影响及其可能机制。方法　雄性SD大鼠 6 0只 ,随机分为 4组 ,1、3组正常进水进食 ,2、4组给予正常饲料 ,饮高锌水 [补锌 1mg (kg·d) ],5d后 ,3,4组大鼠于 - 15℃的冷室中暴露 2h ,测各组直肠温度后与 1,2组一同宰杀 ,测定血浆和组织中的锌含量 ;用3 H标记的鸟嘌呤核苷酸 (3 H GTP)与线粒体上解偶联蛋白 (UCP)相结合 ,用液体闪烁仪测定其放射性活性 ,经ScatchardPlot测定出两者结合的解离常数 (Kd)和最大结合量 (Bmax)。结果　未补锌组和补锌组直肠温度下降的幅度分别为 - 2 95± 0 6 1和 - 1 16± 0 39℃ (P <0 0 5 ) ;冷暴露可以增加组织的锌水平 ;补锌组、冷暴露组与对照组相比Bmax增加 ,Kd值无明显差别。结论　适量补锌可以通过增加棕色脂肪组织线粒体中UCP含量提高机体的耐寒力。     

外源核苷酸对免疫抑制小鼠胸腺细胞DNA损伤的影响

目的:检测外源核苷酸对经环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠胸腺细胞DNA损伤的影响。方法:采用18～20 g昆明种小鼠30只,雌雄各半,随机分成阴性对照组(NEC)、阳性对照组(POC)和核苷酸组(NTG),每组10只。NEC组和POC组小鼠均饲喂半纯合无核苷酸的基础日粮,NTG组则在基础日粮中添加0.25%的核苷酸,实验期为21 d。在实验结束前18 h POC组和NTG组小鼠按照150mg/kg bw的剂量腹腔注射环磷酰胺,NEC组注射生理盐水,实验结束时测定脾脏和胸腺脏器指数,并取胸腺细胞,做单细胞凝胶电泳,观察细胞DNA损伤情况。结果:在基础日粮中添加核苷酸对小鼠免疫器官重量没有显著影响(P>0.05),但能极显著降低受损胸腺细胞百分率(P<0.01)和受损细胞DNA尾长(P<0.01)。结论:外源核苷酸能显著降低免疫抑制小鼠受损胸腺细胞百分率和损伤程度。     

封闭野生型p53表达使卵巢癌细胞药物敏感性增加的机制

目的：观察p53状态对卵巢癌细胞的顺铂药敏性的影响。方法：将pCMV-MDM2质粒转染于p53状态为野生型A2780卵巢癌细胞系，同时转染pCMV空载体作为对照。通过Western blot证明转染后细胞在受到损伤时p53表达被封闭。通过集落形成实验检验A2780在p53状态改变前后细胞药敏性，并通过流式细胞技术检测其细胞周期的改变，原子吸收光谱仪测定DNA-顺铂结合物以检验其核苷酸切除修复功能是否丧失。结果：(1)p53失表达的细胞集落形成率与对照组相比，在给予顺铂后明显下降，提示对顺铂的药物敏感性增加。(2)实验组细胞在给以顺铂治疗后，出现了明显的S期阻滞，而在p53功能完整的对照组细胞却主要出现G2／M期阻滞。(3)给予顺铂后，所有细胞的铂吸收量相同。p53被封闭后，细胞的铂结合量增加。结论：封闭野生型p53表达增加了卵巢癌细胞A2780对顺铂的敏感性，这是由于p53参与细胞周期检查点的调节和DNA修复过程而致。     

基质金属蛋白酶-9基因二核苷酸重复序列多态标志ACn多态与2型糖尿病蛋白尿肾病相关

目的探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因二核苷酸重复序列多态标志ACn与中国人2型糖尿病蛋白尿肾病的相关性。方法收集中国人2型糖尿病合并及非合并肾病患者245例,其中非肾病组(Non-DN) 78例,微量蛋白尿肾病组(DN-1)129例。显著蛋白尿肾病组(DN-2)38例；非糖尿病对照组83例。采用荧光染料FAM标记引物5′末端．将聚合酶链反应(PCR)产物进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,采用基因片段分析法检测个体MMP-9基因ACn的基因型,比较各组间基因型和等位基因频率。结果①共发现9种等位基因,ACn重复数目为16至24。其中以AC21等位基因最为常见,其他等位基因频率大小顺序依次为AC19＞AC20＞AC18。②DN-2组的AC18等位基因频率为11．8%,显著高于Non—DN组的3．8%(P=0．042,OR=3．7．95%CI 1．2～11．4)。③DN-1组的AC20等位基因频率为23．7%,显著低于Non—DN组的13．9%(P=0．016,OR=2．0,95%CI 1．1～3．6)。结论中国人MMP-9基因(AC)n重复数16至24,最常见等位基因为AC21。AC18等位基因可能是糖尿病发生显著蛋白尿肾病的风险因子．而AC20等位基因可能是防止糖尿病微量蛋白尿肾病发生的保护因子。因此,MMP-9基因微卫星多态可能是中国人2型糖尿病肾病的遗传标志。     

SiRNA联合asODN靶向逆转白血病细胞多药耐药的研究

目的:探讨靶向多药耐药基因(MDR-1)的siRNA和asODN联合应用逆转人白血病耐药细胞K562/A02的效果。方法:设计并合成针对MDR-1基因同一序列的siRNA和asODN及阴性对照siRNA,采用转染试剂lipofectin2 000分别转染人白血病耐药细胞K562/A02;利用RT-PCR检测MDR-1mRNA和Western Blot检测MDR-1蛋白质的表达;采用罗丹明123外排实验检测P-糖蛋白(P-gp)的转运功能,MTT法检测K562/A02细胞对阿霉素的耐药逆转效果。结果:siRNA、asODNa、sODN和siRNA联合应用均能降低MDR-1mRNA和蛋白质的表达,提高P-gp的转运功能,对阿霉素的敏感性明显恢复,asODN和siRNA联合应用效果明显提高(P<0.05),低浓度的siRNA(200 nmol/L)比高浓度的asODN(5μmol/L)的效果强(P<0.05)。结论:siRNA、asODN能有效地逆转人白血病耐药细胞K562/A02的多药耐药,asODN和siRNA联合应用效果明显加强。     

MTHFR基因C677T和A1298C多肽与直肠癌的遗传易感性

目的探讨叶酸代谢中的亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因单核苷酸多肽与直肠癌风险的关系。方法以聚合酶链反应和限制性片段长度多态方法,对56例直肠癌患者和143例正常人对照的MTHFR基因C677T和A1298C基因型进行检测分析其对直肠癌风险的相关性。结果在正常对照组中,MTHFRC677TCC、CT、TT基因型频率分别为62·90%、35·08%和2·12%,而在直肠癌病人中分别为58·93%、26·77%和14·26%。A1298C与A1298C基因型在病例和对照中的分布差异无显著性意义。MTHFRA1298C基因型在病例和对照中的分布差异无显著性意义,1298变异基因型与677变异基因型之间无协同作用。结论MTHFR单核苷酸多肽不是中国人直肠癌的遗传易感性因素。