IS256与医院感染表皮葡萄球菌耐氨基糖苷类抗菌药物的关系

目的了解医院感染表皮葡萄球菌对不同类型氨基糖苷类抗菌药物的敏感特征，分析插入序列（IS）256与表皮葡萄球菌耐氨基糖苷类抗菌药物的关系。方法收集2007年2月至2007年7月外科病区中引起医院感染的表皮葡萄球菌48株，利用纸片扩散法测定细菌对4种氨基糖苷类抗菌药物（庆大霉素、奈替米星、链霉素和阿米卡星）药敏特征；构建IS256特异性引物，利用聚合酶链反应（PCR）检测48株细菌中IS256分布状况。结果48株临床分离的表皮葡萄球菌对4种氨基糖苷类抗菌药物的药敏特征分别为：对庆大霉素的耐药率为69％，敏感率为31％；对奈替米星的耐药率为8％，敏感率为79％，中介率为13％；对链霉素的耐药率为42％，敏感率为35％，中介率为23％；对阿米卡星的耐药率为15％，敏感率为75％，中介率为10％。全部临床分离株中，有25株细菌检出IS256。在庆大霉素耐药菌株中，IS256检出率高达70％，与敏感菌相比差异具有统计学意义（P〈0．01）；而对其他3种抗菌药物耐药的菌株中，IS256的检出与耐药无明显相关性（P〉0．05）。结论表皮葡萄球菌临床分离株对氨基糖苷类抗菌药物存在不同程度耐药。IS256与表皮葡萄球菌对庆大霉素耐药密切相关。     

耐药鲍氏不动杆菌blaOXA基因与插入序列连锁检测及菌株亲缘性研究

目的探讨耐药鲍氏不动杆菌的抗菌药物耐药基因及可移动遗传元件遗传标记的携带、blaOXA基因与插入序列连锁与菌株间的亲缘性。方法收集2012年1月-2013年8月ICU患者痰液标本中分离到的25株耐药鲍氏不动杆菌,经看家基因测序作BLAST比对确认菌种,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析A~D类共34种β-内酰胺酶基因、15种氨基糖苷类耐药基因、2种喹诺酮类耐药基因、6种可移动遗传元件遗传标记,再做ISaba1与blaOXA-2、blaOXA-23、blaOXA-66连锁检测,扩增有阳性条带者再进行DNA测序验证,测序结果用Chromas作BLAST比对,最后对57种耐药基因测得结果作样本聚类分析。结果 25株耐药鲍氏不动杆菌共检出7种β-内酰胺类耐药基因、4种氨基糖苷类耐药基因、2种喹诺酮类耐药基因、4种可移动遗传元件遗传标记,且阳性率非常高;插入序列与blaOXA基因的连锁检测中,检测到blaOXA-23与ISaba1连锁,但blaOXA-2、blaOXA-66与ISaba1未连锁;样本聚类分析发现,1~18号株为同一克隆,20~25号株亦为同一克隆,19号株为孤立株。结论多药耐药鲍氏不动杆菌中携带的耐药基因导致本组菌对β-内酰胺酶类、氨基糖苷类、喹诺酮类耐药,且耐药基因和耐药表型相对应,样本聚类分析提示1~18号株和20~25号株可能为医院感染菌株。     

扩增插入序列IS986检测痰中的结核杆菌

应用聚合酶链反应（PCR）技术建立了扩增结核杆菌（TB）特异重复序列IS986部分基团的方法，对7种抗酸分枝杆菌、6株非结核菌进行检测，结果仅人型结核杆菌、牛型结核杆菌及BCG扩增出245hp特异条带。用50μll％TritonX－100裂解废液中结核杆菌，而快速制备TB－PCR样品，应用此法检测了106份肺结核痰标本，总阳性事为56．6％，明显高于抗酸染色的阳性率互7．9％（P＜0．005），也高于BACTEC460TB系统培养结核杆菌阳性率44．3％．此结果表明，PCR具有较好的敏感性和特异性，可辅助结核病的早期快速诊断．     

结核分枝杆菌DNA指纹分析研究

目的：采用结核分枝杆菌IS6110－RFLP DNA分型的方法分析上海近年分离的部分结核分枝杆菌临床分离株，并进行分子流行病学分析。方法：提取结核分枝杆菌基因组DNA，纯化后经限制性内切酶PvuⅡ切割，琼脂糖凝胶电泳和Southern转印后，用荧光标记的IS6110 DNA序列中245bp探针杂交，以核酸化学发光试剂盒探测荧光信号，比较各菌株指纹的IS6110拷贝数和带型，分析各菌株指纹的IS6110拷贝数和带型。结果：经245bp探针杂交后的指纹图谱显示大部分菌株含9－21个IS6110拷贝,但有1菌株不含IS6110拷贝。另一株含1个IS6110拷贝。结论：结核分枝杆菌上海分离株指纹图谱呈高度多态性。零拷贝菌株和单拷贝菌株不能用IS6110－RFLP DNA指纹分析方法分析。     

耐药肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶编码基因及KPC-ISKpn6连锁检测

目的研究和分析18株耐药肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶基因表达及KPC型阳性菌株与插入序列ISKpn6的关联。方法采用微生物鉴定仪鉴定并通过gyrA、parC基因测序和比对确认了18株肺炎克雷伯菌,对抗菌药物的药敏试验采用K-B纸片扩散法;40种β-内酰胺酶基因和KPC型β-内酰胺酶编码基因与插入序列(KPCISKpn6)连锁检测均采用PCR法,β-内酰胺酶编码基因的亚型通过测序和比对进行确认。结果 18株耐药肺炎克雷伯菌除对四环素、米诺环素的敏感率>83.3%外,对其余抗菌药物的敏感率均<50.0%,有的甚至100.0%耐药;40种β-内酰胺酶基因中共检出TEM-1 17株、CTX-M-3 4株、LAP-2 1株、KPC-2 14株、IMP-4 2株、DHA-1 4株、OXA-1 1株共7种耐药基因亚型,且基因检出与其细菌耐药表型相符合;14株KPC-2型阳性菌株KPC-ISKpn6连锁检测均为阳性。结论耐药肺炎克雷伯菌每一株均有阳性基因检出,且检出的7种耐药基因亚型分布于β-内酰胺酶4个类别中,显示耐药株携带的β-内酰胺酶编码基因多种性;14株携带KPC-2型基因的阳性株其KPC-ISKpn6连锁检测均为阳性,提示KPC-2型β-内酰胺酶编码基因与插入序列ISKpn6高度关联。     

老年患者耐亚胺培南鲍氏不动杆菌研究

目的 明确医院临床分离老年患者耐亚胺培南鲍氏不动杆菌的耐药件、同源性、碳青酶烯酶基因型及其基因周围环境.方法 收集医院2005年1月-2007年1月临床分离的142株鲍氏不动杆菌,纸片扩散法筛选耐亚胺培南鲍氏不动杆菌;琼脂稀释法测定亚胺培南耐药菌株对14种抗菌药物的MIC值;脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析亚胺培南耐药菌株同源性;PCR扩增及克隆测序分析碳青酶烯酶基因及其周围基因环境.结果 142株鲍氏不动杆菌中筛选到97株耐亚胺堵南鲍氏不动杆菌;PFGE分型中全部菌株属于4个流行的克隆株;97株耐亚胺培南鲍氏不动杆菌中90株携带OXA-23-like基因,97株携带OXA-51-like基因,86株菌株OXA-23-like基因上游检测到插入序列ISAbal,6株OXA-51基因上游检测到ISAbal.结论 所有耐亚胺培南鲍氏不动杆菌均为泛耐药菌,克隆播散足最主要的传播方式,OXA-23组和OXA-51组D类β-内酰胺酶基因足最主要的碳青酶烯酶基因型,未检测到OXA-24组、OXA-58组、IMP型和VIM型碳青酶烯酶基因,OXA类碳青酶烯酶基因与插入序列ISAbal关系密切.     

中国脑膜炎奈瑟菌中插入序列1301的分布与分子流行病学研究

目的 研究中国脑膜炎奈瑟菌(Nm)中插入序列IS1301的分布与分子流行病学特征.方法 设计IS1301引物,应用PCR方法检测2007年1月至2008年10月收集全国16个省、市、自治区219株Nm菌株的IS1301,对IS1301扩增产物进行DNA测序和序列比对,PCR扩增IS1301阳性菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析及核酸印迹杂交,研究不同Nm菌株中IS1301的分布特征.结果 219株Nm菌株中,34株携带IS1301(15.53%),A、B、C群和不可分群的Nm菌株IS1301阳性率分别为11.11%、20.75%、6.17%和28.57%;IS1301扩增产物测序结果与GenBank登记编号ZA9092.1的Nm菌株序列相似度为94%～100%,进化树分析可分为两簇;C群Nm菌株与其他血清群菌株IS1301序列存在较大差别;研究的Nm菌株基因组中至少存在6～17个IS1301拷贝,相同PFGE带型Nm菌株所携带的IS1301拷贝数具有多态性特征.结论 IS1301在中国Nm菌株中的分布具有遗传多态性.     

细菌多重耐药性的组合遗传进化

近年来,抗生素耐药性日益严重,并且呈现多重耐药现象,已引起临床医生和微生物工作者的高度关注。耐药机制包括染色体基因突变、外膜孔蛋白改变、药物主动外排系统表达亢进和产生灭活酶等。细菌耐药基因通过接合性质粒、转座子、整合型噬菌体、整合子的水平传递等发生传递。现就整合子、插入序列、插入序列共同区域在细菌多重耐药性中的作用予以综述。     

幽门螺杆菌插入序列的研究进展

幽门螺杆菌 (Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ简称Ｈｐ)是 1 983年发现的一种革兰氏阴性 ,微需氧杆菌。定植于胃的粘膜表面。现已查明 ,幽门螺杆菌的感染与慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌和ＭＡＬＴ(粘膜相关胃淋巴瘤 )密切相关。1 994年世界卫生组织已将其列为第一类生物致癌因子。由于幽门螺杆菌的发现 ,对于胃、十二指肠疾病的研究有了很大的突破 ,使Ｈｐ成为生物学领域研究的热点。近年来飞速发展的分子生物学技术在Ｈｐ研究中的应用 ,使有关Ｈｐ的研究飞跃猛进。 1 997年Ｈｐ菌株2 6 6 95全基因序列测出 ,1 999年菌株Ｊ99全基因序列…     

抗11β-羟类固醇脱氢酶1的单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备抗人11β-羟类固醇脱氢酶1(homo sapiens hydroxysteroid 11-beta dehydrogenase 1,HSD11B1)的单克隆抗体(mAb)并初步鉴定其特性.方法:将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,并通过间接ELISA法、Western blot、免疫组化的方法对mAb进行特性鉴定,通过免疫沉淀、Uni-ZAP XR肝脏cDNA表达文库筛选鉴定抗原.结果:通过间接ELISA筛选获得1株可稳定分泌抗人HSD11B1 mAb的杂交瘤细胞系.其分泌的mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ),Western blot结果显示该mAb可以特异地识别相对分子质量(Mr)为35 000的蛋白;应用mAb CBF245对人肝脏cDNA表达文库(Uni-ZAP XR)进行筛选,阳性噬菌斑测序结果显示5个阳性克隆插入序列均为HSD11B1.结论:mAb BAD062特异地识别抗原HSD11B1,该mAb可用于ELISA检测、Western blot、免疫组化和免疫沉淀实验,为HSD11B1的研究提供了有力的工具.