荧光定量PCR检测血清微小RNA-21方法的建立及对乳腺癌诊断的初步应用

目的 建立一种SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测血清miR-21方法,并初步探讨其对乳腺癌诊断的应用价值.方法 用Trizol试剂提取血清总RNA.用茎环引物将miR-16(作为miR-21内参基因)与miR-21分别逆转录成相应cDNA.再用SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR对cDNA进行扩增、检测.然后,通过信噪比(signal to noise ratio,SNR)分析试验的准确性;通过熔解曲线评价试验的特异性;通过标准曲线的R2评估试验的精确性;通过批内和批间差异计算试验的稳定性.另外,用自建方法检测33例乳腺癌患者、18例乳腺良性疾病和49名健康人群血清miR-21和miR-16水平,并根据乳腺癌组与健康对照组中miR-21相对表达量确定临界值,以评价其对乳腺癌诊断的敏感度、特异度.结果 通过PCR退火与延伸在温度和时间上的优化,本试验所建立方法SNR≥99.36％;熔解曲线为单峰;标准曲线R3=0.994 8;批内CV＜ 1.5％,批间CV＜ 4％.以miR-16为内参,用自建SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测乳腺癌组、良性疾病组与健康对照组血清miR-21的相对表达量分别为20.83±18.18、20.86±10.11和9.33±4.44,经Kruskal Wallis检验,3组间表达量差异有统计学意义(x2=16.92,P＜0.001),且健康对照组与乳腺癌组、健康对照组与良性疾病组间的差异均有统计学意义(Z值分别为-2.58、-4.42,P均≤0.01),而乳腺癌组与良性疾病组血清miR-21表达量差异无统计学意义(Z=-0.51,P=0.608).以miR-21相对表达量18.32为临界值,其对乳腺癌诊断的敏感度为51.5％(17/33),特异度为93.9％(46/49).结论 建立了一种较敏感、特异、稳定的SYBRGreen Ⅰ荧光定量PCR检测血清miR-21方法,该方法对乳腺癌的诊断可能有一定价值.     

血液透析对脂蛋白（a）及相关检验指标的影响

目的动态观察血液透析对慢性肾功能衰竭（CRF）患者血清脂蛋白（a）[Lp（a）]的影响。方法分别测定50例进行血液透析的CRF患者透析前、后以及30名健康体检者血清Lp（a）及相关指标[三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、载脂蛋白A（apo A）、载脂蛋白B（apo B）、白蛋白（A lb）、尿素（Urea）、肌酐（Cr）]浓度并作比较。结果 CRF组血液透析后Lp（a）、Urea、Cr浓度明显低于透析前（P〈0.05）,TG、TC、HDL-C、LDL-C、apo A、apo B浓度与透析前比较差异无统计学意义（P〉0.05）。CRF组血液透析前Lp（a）、TC、TG、LDL-C浓度明显高于对照组（P〈0.05、P〈0.01）,HDL-C、A lb浓度低于对照组（P〈0.05、P〈0.01）,而apo A和apo B 2组间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论血液透析可以有效降低CRF患者Lp（a）的浓度,有利于防止各种血栓性疾病的发生与发展。     

肺癌与癌旁组织中miR-20a的定量检测及其意义

目的：探讨人肺癌与癌旁组织miR-20a定量检测的临床意义。 方法：real-time PCR检测31例肺癌及其对应癌旁组织中miR-20a的表达量, 分析其与肺癌组织学类型、临床分期、分化程度等临床病理特征的关系。 结果：肺癌组织miR-20a表达量(2^{-△△Ct)为3.630（1.042～7.727）,与对应癌旁组织相比,有显著性差异(P<0.05)。miR-20a与肺癌临床分期、分化程度、病理类型、肿块大小和淋巴结转移均无相关性(P>0.05) 。 结论:miR-20a在肺癌组织高表达,可能与肺癌的发生有关。}     

儿童急性髓系白血病DNMT3a基因突变的分析

随着新一代基因测序技术的发展,越来越多与肿瘤发生发展有关的基因被发现,比如最近发现的DNMT3a基因。此基因为急性髓系白血病预后判断提供了新的分子生物学标记。本研究探讨儿童急性髓系白血病患儿骨髓中DNMT3a基因的突变情况。选取就诊于中国医学科学院血液病医院儿童血液病诊治中心的57例儿童急性髓系白血病患儿,通过PCR直接扩增其骨髓细胞中DNMT3a基因全部23个外显子,并通过直接测序方法与野生型DNMT3a基因比对,检测DNMT3a基因的突变情况。结果表明,在57例患儿中未发现DNMT3a突变热点R882位点的突变,进一步分析其它位点也未发现任何突变。而在这些患儿中AML1/ETO突变10例,CBFB/MYH11突变3例,PML/RARa突变13例,FLT3/ITD突变5例,FLT3/TKD突变1例,既含有PML/RARa又含有FLT3/TKD突变2例。结论:DNMT3a基因虽然在成人急性髓系白血病患者中有着较高的突变率,且是预后不良的一个独立因素,但其突变率在儿童患者中很低,甚至没有突变。这提示儿童和成人急性髓系白血病的发生可能存在不同机制。     

人泛素-核糖体蛋白27a原核表达载体构建及表达

目的构建并表达携带谷胱甘肽S-转移酶(GST)标签的人泛素-核糖体蛋白S27a(UBRPS27a)原核表达载体。方法利用反转录聚合酶链反应从HL-60细胞中扩增RPS27A基因全长,克隆至pMD-19T载体中,酶切回收后插入原核表达载体pGEX4T-1,构建重组表达载体pGEX4T1-RPS27A,转化大肠埃希菌BL21,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达GST-UBRPS27a融合蛋白。结果经测序与酶切鉴定,重组质粒pGEX4T1-RPS27A构建正确;经重组质粒转化的BL21细菌诱导4h后可高效表达UBRPS27a融合蛋白。结论成功构建UBRPS27a原核表达载体,为进一步研究其结构、功能及其在肿瘤发生发展中的作用奠定了基础。     

1种新型国产超敏HBsAg试剂在血液筛查中的应用研究

目的 对1种新型国产超敏HBsAs试剂在血液筛查中的应用进行评估.方法 用考核试剂WT CLEIA分别检测WHO标准品、HBV阴性的血清、各种HBV亚型及HBsAg突变株标本以及无偿献血者标本,并与参比试剂做比较.结果 WT CLEIA对HBsAg阴性标本的检测特异性为99.81％(95％ CI:99.57％ ～ 99.93％);对WHO标准品检测的分析灵敏度可达0.012 IU/mL,高于参比试剂Hepanostika HBsAg Ultra的0.05 IU/mL和Abbott Murex V3的0.1 IU/mL;对HBsAg突变株及不同亚型的检出率也高于2种参比试剂;对近5 000份标本的检测结果与参比试剂Abbott Murex V3有高度的符合率(99.60％).结论 该试剂检测性能良好,在血液筛查中有较好的应用前景.     

mir-181a对滋养细胞HTR-8/SVneo功能的影响

目的 MicroRNAs在子痫前期的发生发展过程中发挥了重要作用,本实验通过观察mir-181a对人滋养细胞HTR-8/SVneo凋亡功能的影响,进一步探讨mir-181a在子痫前期发病过程中的功能.方法 采用瞬时转染技术对人滋养细胞HTR-8/SVneo分别进行过表达与抑制mir-181a,应用RT-PCR检测mir-181a mRNA的表达.应用荧光显微镜检测细胞凋亡的变化.结果 RT-PCR显示过表达组和抑制组分别与阴性对照组和空白对照组相比均有明显差异（P＜0.05）,说明转染有效.细胞凋亡结果显示与阴性对照组和空白对照组相比,过表达mir-181a实验组细胞凋亡能力增加,抑制组细胞凋亡能力降低,差异有统计学意义（P＜0.05）;阴性对照组和空白对照组比较无统计学意义（P＞0.05）.结论 mir-181a能促进人滋养细胞HTR-8/SVneo的凋亡,有望作为子痫前期的治疗靶点.     

RNAi沉默CDC25a基因对人肝癌细胞HepG2裸鼠移植瘤的影响

目的:研究细胞分裂周期素25a(cell division cycle 25a,CDC25a)基因RNAi(RNA干扰)的重组慢病毒载体对人肝癌细胞Hep G2 CDC25a基因表达和裸鼠移植瘤生长的影响。方法:实验组以CDC25a基因重组慢病毒颗粒感染Hep G2细胞;阴性对照组以RNAi-NC慢病毒颗粒感染Hep G2细胞;空白对照组常规培养。三组细胞分别接种至裸鼠皮下,建立人肝癌裸鼠移植瘤模型。连续28 d观察裸鼠成瘤情况及移植瘤生长情况,28 d后测定肿瘤体积和重量。用RT-PCR、Western blot及免疫组织化学法检测移植瘤中CDC25a的表达情况。结果 :各组裸鼠接种Hep G2细胞后第7天均有肿瘤形成,实验组的肿瘤生长速度、体积和重量明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。实验组瘤体中CDC25a的m RNA及蛋白表达与阴性对照组及空白对照组相比明显下降(P<0.05)。结论:LV-CDC25a-RNAi重组体沉默Hep G2细胞的CDC25a基因后能有效抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长,提示CDC25a基因可被认为是肝癌治疗的关键靶点。     

miR-125家族与肿瘤的相关性研究进展

<正>微小RNA(miRNA)是一类进化保守的非编码单链RNA,长约20~22个核苷酸,主要通过降解靶mRNA或者抑制其翻译[1],调节细胞增殖、分化和凋亡[2],参与肿瘤的发生、发展。在众多miRNA家族中,miR-125家族被广泛关注。miR-125家族由miR-125a、miR-125b-1、miR-125b-2组成。miR-125a位     

Lp(a)的生物学特性及其与动脉粥样硬化的关系

本文对Lp（a）的结构、生理功能、Apo（a）的基因表达、Lp（a）的不均匀性，合成与分解代谢、药物激素等对Lp（a）代谢的影响，Lp（a）在动脉粥样硬化中的作用等诸多方面的研究进行了详细的综述。