FXR信号通路介导何首乌导致脂质沉积的作用及机理研究

目的 探索何首乌对肝细胞脂质沉积的影响及其机制。方法 利用永生化肝细胞系LO2,采用1 mmol/L游离脂肪酸（FFA）处理,建立脂肪肝沉积细胞模型。同时加入不同浓度的何首乌提取物处理（0、2.5、5、10 μg/mL）,采用油红O染色以观察何首乌对LO2细胞脂肪沉积的作用;采用实时荧光定量PCR进行实验组LO2细胞内法尼酯X受体（FXR）基因及其下游通路胆盐输出泵（BSEP）、小分子异源二聚体伴侣（SHP）、胆固醇7α-羟化酶1（CYP7A1）关键基因的检测;并采用蛋白免疫印迹法检测FXR及其下游通路关键蛋白的表达水平。结果 何首乌处理后的LO2细胞中,油红O的染色量会随着药物浓度增加而增加;FXR的mRNA表达下降,而FXR蛋白诱导促进的下游基因BSEP、SHP的表达相应下降,而其下游抑制基因CYP7A1的表达则上升（P均<0.05）。何首乌处理的LO2肝细胞中,FXR的蛋白水平明显降低,蛋白激酶C （PKC）蛋白磷酸化水平明显降低,而PKC总蛋白表达水平无明显改变,SHP的蛋白水平也明显下降。结论 何首乌可通过抑制FXR-PKC/SHP信号转导通路,从而促进LO2肝细胞内的脂质沉积。为何首乌导致胆汁淤积所引起的肝损伤的治疗提供新的理论依据。     

黄芪多糖对阿尔茨海默病大鼠神经细胞活性、认知功能及Caspase-9表达水平的影响

目的 探讨黄芪多糖(Astragalus polysacharin,APS)对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)大鼠神经细胞活性、认知功能及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Cysteinyl aspartate specific protease,Caspase)-9表达水平的影响。方法 36只无特定病原体(Specific pathogen free, SPF)级美国斯泼累格·多雷(Sprague Dawley)雌雄各半的大鼠,按照随机数字表分为6组,正常组、AD组、药物对照组、干预A组、干预B组及干预C组; 除正常组外,其余大鼠建立AD大鼠模型; 建模后药物对照组采用0.5 g/kg的吡拉西坦灌胃,干预A组、干预B组及干预C祖均采用0.2、0.4及0.8 g/kg的黄芪多糖(Astragalus polysacharin,APS)灌胃,正常组及AD组灌胃等剂量的生理盐水,均1次/d,灌胃时间连续60 d。采用Morris水迷宫实验观察认知功能; 苏木精-伊红(Hematoxy lin-Eosin,HE)染色观察海马组织病理学表现; 末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法[Terminal dexynucleotidyl transferase(TdT)-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL]法检测神经细胞凋亡率; 免疫印迹及实时定量聚合酶链反应(Quantitatie real time polymerase chain reaction,QRT-PCR)技术分别检测细胞色素C(Cytochrome c,Cyt-c),Caspase-3及Caspase-9蛋白及信使核糖核酸(Messenger RNA,mRNA)相对表达水平。结果 与正常组比较,AD组大鼠灌胃后第1～5 d的逃避潜伏期均延长(P<0.05); 与AD组比较, 干预A组、干预B组、干预C组逃避潜伏期均缩短(P<0.05),药物对照组逃避潜伏期与干预C组比较无明显差异(P>0.05)。与正常组比较,AD组大鼠游泳距离增加(P<0.05); 与AD组比较,干预A组、干预B组及干预C组大鼠游泳距离均减少(P<0.05),干预C组与药物对照组相似(P>0.05)。正常组海马结构完成,神经元排列紧密,细胞核清晰且无空泡; AD组大鼠海马组织结构紊乱,神经元数目减少,细胞核深染,细胞膜收缩及部分消失; APS干预组及药物对照组神经元排列较AD组整齐有序,肿胀程度减轻,细胞核较清晰。各组大鼠海马组织神经细胞凋亡率比较有明显差异(F=134.900,P<0.001); 与正常组比较,AD组神经细胞凋亡率升高(P<0.05); 与AD组比较,干预A组、干预B组及干预C组神经细胞凋亡率降低(P<0.05),药物对照组与干预C组神经细胞凋亡率相似(P>0.05)。与正常组比较,AD组海马组织Cyt-C,Caspase-3及Caspase-9蛋白及mRNA 相对表达水平上调(P<0.05); 与AD组比较,不同水平干预组海马组织Cyt-C,Caspase-3及Caspase-9蛋白及mRNA 相对表达水平下调(P<0.05),药物对照组与干预C组上述蛋白及mRNA相对表达水平相似(P>0.05)。结论 黄芪多糖能够改善AD大鼠认知功能,减轻海马组织病理损伤,抑制神经元凋亡且呈现水平依赖性,其机制可能与抑制Cyt-C及caspase-3/9信号通路有关。     

水通道蛋白4对一氧化碳中毒后迟发性脑病大鼠神经损伤的影响

目的 探讨水通道蛋白4(Aquaporin 4,AQP4)对一氧化碳(Carbon monoxide,CO)中毒后迟发性脑病(Delayed encephalopathy,DEACMP)大鼠神经损伤的影响。方法 将210只雄性SD大鼠随机分为空白对照(Blank control,BC)组、CO中毒(CO)组、钠-钾-氯共转运体(Na⁺-K⁺-Cl^- cotransporter,NKCC)抑制剂处理(布美他尼)组、p38-丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen activated protein kinase,MAPK)抑制剂处理(MAPK)组和AQP4特异性抑制剂处理(AQP4抑制剂)组,每组各42只; 根据造模后不同时间点将每组大鼠进一步分为染毒3、6、12、24、48、72 h和7 d后共7个亚组,每亚组各6只; 取大鼠脑前额叶皮质组织,计算脑皮质含水量,采用HE法观察脑皮质形态; 采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(Streptavidin-perosidase,SP)染色法测定大鼠脑皮质AQP4,p38 MAPK,NKCC1、胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)和S100钙结合蛋白B(S100 calcium binding protein B,S100B)蛋白表达水平。结果 与BC组比较,CO组大鼠在染毒3、6、12、24、48、72 h后尾静脉COHB水平和脑皮质含水量显著升高,脑皮质AQP4,p38 MAPK,NKCC1,GFAP和S100B蛋白表达水平显著升高,染毒7 d后恢复正常(P<0.05); 与CO组比较,布美他尼组、MAPK组和AQP4抑制剂组大鼠脑皮质含水量显著降低,脑皮质AQP4,p38 MAPK,NKCC1,GFAP和S100B蛋白表达水平显著降低,且AQP4抑制剂组变化更明显(P<0.05)。结论 p38-MAPK/NKCC信号通路可能参与调控CO中毒DEACMP大鼠脑皮质AQP4表达,抑制AQP4表达可有效减轻大鼠脑水肿并改善预后,有望成为预防和治疗DEACMP的新靶点。     

医用臭氧对宫颈癌细胞增殖和迁移抑制作用的初步研究

【摘要】 目的 探讨医用臭氧是否通过核因子（NF）-κB信号通路调控上皮-间质细胞转化（EMT）相关蛋白表达抑制宫颈癌细胞增殖和迁移。 方法 选用人宫颈癌Hela细胞,分别设空白组、N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）处理组、NAC和臭氧共处理组、臭氧组。细胞在臭氧处理前以60 mmol/mL NAC溶液预处理20 min,随后将细胞悬液与等体积半最大效应浓度（EC50）臭氧混合15 min。细胞计数试剂盒（CCK）-8和细胞集落实验检测细胞增殖抑制。二氯二乙酸酯（DCFH-DA）探针通过流式细胞术检测活性氧（ROS）水平。划痕实验和Transwell实验验检测臭氧处理后Hela细胞迁移能力。蛋白质印迹法检测NF-κB和EMT相关蛋白表达水平。 结果 臭氧处理后Hela细胞增殖能力下降,臭氧EC50为10 mg/mL,同时其迁移能力也下降。臭氧处理后,Hela细胞NF-κB和κB抑制性蛋白激酶（IKK）α表达及其磷酸化水平均降低,同时EMT相关波形蛋白（vimentin）和β-连环蛋白（β-catenin）表达水平降低,而NAC预处理可逆转臭氧的作用。 结论 医用臭氧可能通过抑制NF-κB信号通路下调vimentin、β-catenin抑制宫颈癌Hela细胞增殖和迁移,ROS在其中发挥重要作用,表明医用臭氧有望成为宫颈癌新的辅助治疗手段。     

安罗替尼对人肾癌细胞ACHN增殖和迁移的抑制作用

目的 观察安罗替尼(anlotinib)对人肾癌细胞增殖和迁移能力的影响,探讨其抑制肾癌细胞生长、迁移能力的机制,以及在肾癌治疗领域的临床应用前景.方法 体外培养肾癌ACHN细胞,采用不同浓度(0、1.25、2.5、5和10 μmol/L)的安罗替尼处理ACHN细胞24、48和72h,MTT法检测安罗替尼对ACHN细胞增殖的影响,计算半数抑制浓度(IC50);划痕修复实验检测安罗替尼对ACHN细胞迁移能力的作用,计算迁移率;克隆形成实验检测细胞贴壁后细胞的成活能力,计算克隆数目;Western印迹法检测安罗替尼对PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达和活性的影响,用灰度分析方法计算其灰度值.结果 安罗替尼能显著抑制ACHN细胞增殖,具有明显的浓度依赖性;与对照组相比,安罗替尼处理后,能明显抑制ACHN细胞的克隆形成、迁移和信号通路相关蛋白的活化(P＜0.05).结论 安罗替尼能显著抑制人肾癌ACHN细胞的增殖、克隆形成和迁移能力,其机制与PI3K信号通路的抑制相关.     

Ras-MAPK通路在食管癌中的研究进展

Ras is best known for the ability of regulating cell growth, proliferation and differentiation. Mutations in Ras are associated with abnormal cell proliferation, resulting in the incidence of all human cancers. Mitogen-activated protein kinase (MAPK) signaling pathways are the most well described pathways in carcinogenesis, which has been identified as a key downstream effector in Ras signaling as well as playing important roles in prognosis of tumors. Recently, evidence has gradually accumulated to demonstrate that mutation in Ras or aberrant expression of MAPK has profound effects on the incidence of esophageal carcinoma, and applications of some chemotherapeutic drugs can not lead to the expectant function. Further understanding of the relevant molecular mechanisms of Ras-MAPK signaling pathways will be helpful for development of efficient targeting therapeutic approaches to the treatment of esophageal cancer. In this article, the advances of Ras-MAPK signaling pathways in esophageal carcinoma are reviewed.     

侧壁开窗法上颌窦底提升术植入Bio-Oss后骨生成的mRNA表达谱

 目的：探讨侧壁开窗法上颌窦底提升术这种特殊的引导性骨再生（guided bone regeneration, GBR）过程的转录组特点。方法：3只Beagle犬,随机选择一侧经侧壁开窗行上颌窦底提升术,同时植入Bio-Oss骨粉,术后2周,对另一侧用相同的方法行上颌窦底提升术。第2次术后2周,收集植入的Bio-Oss骨粉组织块,提取总RNA,全基因组表达谱芯片检测分析上颌窦底提升后2周和4周时的差异表达基因。利用基因本体论（gene ontology, GO）对差异表达的基因进行功能分类,以及京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG）进行信号通路分析。结果：在2周时表达升高的基因与刺激反应、免疫-炎症反应和细胞增殖有关,同时,与神经元分化、破骨细胞分化和早期血管化过程相关的基因也高表达。在4周时,与细胞代谢和发育相关的基因表达升高,重要的是,与血管生成和骨骼发育相关的基因都高表达,与骨骼发育相关的基因包括骨生成相关的生长和分化因子［转化生成因子β1（transforming growth factor beta 1, TGFB1）和骨形态发生蛋白4（bone morphogenetic protein 4, BMP4）］、软骨和骨胞外基质［软骨黏附素（chondroadherin, CHAD）、Ⅰ型胶原α1链（collagen type I, alpha 1 chain, COL1A1）、Ⅰ型胶原α2链（collagen type I, alpha 2 chain, COL1A2）、Ⅴ型胶原α2链（collagen type Ⅴ, alpha 2 chain, COL5A2）、核心蛋白聚糖（decorin, DCN）、骨连接蛋白（osteonectin, SPARC）和骨钙素（osteocalcin, BGLAP）］等相关的基因。信号通路分析显示4周时表达升高的基因与转化生长因子β/骨形态发生蛋白（transforming growth factor beta/bone morphogenetic protein, TGF-β/BMP)信号通路有关。无翅型MMTV整合位点家族（wingless-type MMTV integration site family, WNT）信号通路中的关键基因WNT5A和卷曲蛋白受体9（frizzled receptor 9, FZD9）在2周时表达升高,而连环蛋白β1（catenin beta 1, CTNNB1）在4周时表达升高。结论：侧壁开窗法上颌窦底提升术2周后转录表达谱变化以免疫-炎症反应和破骨反应下调、骨生成相关基因表达升高为特点,骨再生的过程还与神经生成和血管生成过程相关。在骨再生的过程中,TGF-β/BMP和WNT信号通路起重要作用,WNT信号通路的作用复杂。     

Shh/Gli1信号参与小鼠脊髓损伤后血-脊髓屏障渗透性改变及运动功能恢复

目的:探讨sonic hedgehog/Gli1(Shh/Gli1)信号在小鼠脊髓损伤后病理变化及运动功能恢复中的作用。方法:成年雄性C57野生型、Gli1lz和Gli1lz/lz小鼠行T8节段脊髓夹伤及假手术。Gli1lz小鼠脊髓损伤及假手术后3 d行X-gal染色;7 d行Shh/PDGFr-α、Shh/GFAP、LacZ/GFAP染色,观察Shh/Gli1信号在小鼠脊髓损伤后的激活。C57野生型和Gli1lz/lz小鼠脊髓夹伤后7 d行GFAP染色和实时定量RT-PCR,观察星形胶质细胞反应;术后14 d尾静脉注射伊文氏兰观察血-脊髓屏障改变;术后1、3、5 d和7 d行BMS评分评价小鼠后肢运动功能。结果:脊髓损伤7 d后,损伤区Shh表达升高;Shh/Gli1信号报告基因LacZ表达升高,主要表达于反应性星形胶质细胞;免疫组织化学及实时定量RT-PCR结果显示Gli1基因敲除不影响脊髓损伤后GFAP表达;伊文氏兰染色及其定量分析显示Gli1lz/lz小鼠脊髓损伤后脊髓组织伊文氏兰外渗增加。BMS评分显示Gli1lz/lz小鼠运动功能恢复显著差于野生型小鼠。结论:Shh/Gli1信号在小鼠脊髓损伤后激活,可能参与脊髓损伤后血-脊髓屏障渗透性的改变,并影响脊髓损伤后的运动功能恢复。     

RIP3/CaMKⅡ信号通路对重症病毒性心肌炎小鼠心脏功能及生存曲线的影响

目的:观察RIP3/CaMKⅡ信号通路对柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导的重症病毒性心肌炎小鼠心脏功能及生存曲线的影响,并探讨CaMKⅡ特异性抑制剂KN-93对心肌损伤的作用。方法:将60只雄性BALB/c小鼠分为正常对照组、CVB3组、CVB3+KN-93组和CVB3+KN-93+Ti(活性氧簇特异性抑制剂)组,以上小鼠腹腔及尾静脉注射药物连续7 d。采用双抗体夹心免疫法检测小鼠心肌细胞坏死标志物,心脏超声技术检测小鼠心脏结构和功能,绘制Kaplan-Meier生存曲线,观察KN-93对小鼠心肌的保护作用。结果:CVB3+KN-93组小鼠心肌细胞坏死较CVB3组显著减轻,心脏功能和生存曲线改善(P<0.01);CVB3+KN-93组小鼠心肌组织H2O2含量较CVB3组显著下降(P<0.01);加入Ti后,CVB3+KN-93+Ti组H2O2含量较CVB3+KN-93组轻度下降(P<0.05),但无论是心脏功能还是生存曲线均无显著差异。结论:RIP3/CaMKⅡ信号通路在CVB3诱导的急性重症病毒性心肌炎小鼠心肌细胞损伤中起到主导作用;KN-93能阻断这种作用并可能产生新的治疗方式,其效果可能是通过对CaMKⅡ的直接抑制和对活性氧簇的间接抑制而实现的。     

姜黄素通过上调PPARγ/c-Ski信号通路在大鼠乙型病毒性肝炎模型中发挥保护作用

目的 探讨姜黄素在乙型病毒性肝炎中发挥抗纤维化作用的相关机制.方法 制备SD大鼠乙型病毒性肝炎模型,将SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(HBV组)和姜黄素治疗组(Curcumin组);HE染色法检测各组大鼠肝脏的病理损伤情况;ELISA法检测血清中丙氨酸转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(Aspartateaminotransferase,AST)、透明质酸(Hyaluronic acid,HA)、层粘连蛋白(Laminin,LN)、肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF-α)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)的水平变化;实时荧光定量PCR法对肝脏中HBV-DNA的表达水平进行检测;Western blot法检测肝脏中的过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome proliferatorsactivated receptor γ,PPAR-γ)、c-Ski(cellular Sloan-Kettering institute)、转化生长因子-β(Transforming growth factor-β,TGF-β)、Smad2、p-Smad2、Smad3和p-Smad3的表达状况.结果 姜黄素可以显著改善肝组织损伤,降低肝功能损伤的相关指标和炎症因子的水平,抑制肝脏组织中HBV-DNA的表达,促进PPARγ、c-Ski的表达,抑制TGF-β、Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3的表达.结论 姜黄素在乙型病毒性肝炎中具有显著的抗纤维化的作用,其机制可能是通过激活PPAR-γ、c-Ski的表达,抑制TGF-β/Smads信号通路的活化来实现的.