HCV核心基因插入突变体编码蛋白对人肝癌细胞系(Huh-7)细胞基因表达的影响

目的用基因表达分析法鉴定丙型肝炎病毒(HCV)核心(Core，C)区基因插入突变体编码蛋白在人肝癌细胞系(Huh-7)表达，探讨该蛋白生物学功能及其基因表达改变与致病的关系。方法构建HCV-1bc基因插入突变体编码蛋白重组表达质粒，建立表达c基因插入突变体编码蛋白Huh-7细胞系，按Affymetrix公司实验程序制备探针、再与该公司H0u133A和Hg-u133b芯片杂交。对基因表达上调或下调≥3倍的基因，用NetAflk作进一步分析。并用半定量RT-PCR对其中3个上调基因进行鉴定。结果Microarray分析显示，HCV-1b C基因插入突变体编码蛋白比c蛋白引起更多的基因表达改变，主要集中在信号传导、蛋白酶活性、分子转运、免疫反应等，特别是免疫反应基因表达更加显著。C基因插入突变体编码蛋白表达可同时导致凋亡基因／抗凋亡基因表达上调或下调及致癌基因上调。半定量RT-PCR对有趣的致癌基因FHL2、抗凋亡基因PRKCZ和凋亡基因LGALSI的鉴定结果表明，FHL2、PRKCZ和LGALSI基因的表达比空载体转染对照组相同基因明显上调。结论Hcvc基因插入突变体编码蛋白在Huh-7细胞表达对其基因表达有很大影响，其中对免疫反应基因的影响更明显，这一结果对理解HCV C基因插入突变体编码蛋白在HCV致病过程中的作用及其研制抗HCV药物均有重大的参考价值。     

用荧光定量-聚合酶链反应比较不同核染色方法对经激光显微切割组织细胞DNA聚合酶链反应的影响

在石蜡切片中，对特定细胞或组织进行显微切割和分离是一项非常重要的技术，特别是对研究异质性肿瘤(如癌前病变、原发肿瘤等)的基因改变和形态学之间联系很有帮助。在进行显微切割时，为了辨别细胞或组织的形态或功能，往往要进行组织化学染色或免疫组织化学。这就有可能对DNA模板的质量和聚合酶链反应(PCR)的反应系统造成影     

荧光定量PCR快速诊断21三体综合征

目的　建立荧光定量PCR技术检测 2 1三体综合征。方法　采用PCR方法同时扩增位于 2 1号染色体上的人肝型磷酸果糖激酶基因 (humanliver typephosphofructokinasegene ,PFKL CH 2 1)和位于 1号染色体上的人肌型磷酸果糖激酶基因 (humanmuscle typephosphofructokinasegene ,PFKM CH1) ,使用SYBRGreenⅠ荧光染料处理产物、琼脂糖电泳后在凝胶成像系统进行分析 ,得出扩增产物的荧光强度对比值。用此方法检测 2 6例 2 1三体综合征患儿及 2 0名正常人。结果　 2 6例 2 1三体综合征患儿PFKL CH2 1/PFKM CH 1扩增产物的荧光强度对比值为 1.5 8± 0 .17,而正常人为 1 0 0± 0 .0 5 ,两者差异有显著性。结论　SYBRGreenⅠ荧光定量PCR技术检测 2 1三体综合征具有准确、快速、安全、实用等特点 ,有较高的临床使用价值。     

蛋白质组学及其在疾病研究中的应用

生命的表现形式最终是由蛋白质决定的。因此，对蛋白质组的研究具有很现实的意义。从研究之初至今，研究技术不断提高，涉及面日益广泛，其应用价值越来越大。本着重从技术及应用的角度，追踪最新的研究进展，对蛋白质组学及其在疾病研究中的应用作一的概述。     

人巨细胞病毒感染对体外培养肺成纤维细胞中明胶酶的影响

目的探讨人巨细胞病毒（HCMV）感染对体外培养肺成纤维细胞（HEL）中明胶酶活性的影响。方法体外培养HEL细胞感染HCMV，分为低感染复数（MOI）组及高MOI组，每组重复6例。明胶酶谱法检测HEL细胞中MMP-2及MMP-9的明胶酶活性，用半定量RT-PCR检测各组HEL细胞中MMP-9及TIMP-1的转录水平。结果在低MOI组及高MOI组HEL细胞中MMP-9及MMP-2活性均增强（P〈0．05），高MOI组MMP-9及MMP-2活性较低MOI组显著增加（P〈0．05）。进一步检查MMP-9及TIMP-1的mRNA水平发现，正常对照组HEL细胞中MMP-9及TIMP-1的mRNA处于一个较低的水平，HCMV感染使HEL细胞中MMP-9及TIMP-1的mRNA水平均明显升高（P〈0．05），低MOI组和高MOI组差异无统计学意义（P〉0．05）。在低MOI组及高MOI组，HEL细胞MMP-9／TIMP-1的比值和正常对照组相比明显升高（P〈0．05），表明MMP-9升高更为显著。高MOI组和低MOI组中MMP-9／TIMP-1的比值差异无统计学意义（P〉0．05）。结论HCMV感染可以造成MMP-9和TIMP-1转录和MMP-9／TIMP-1的失衡，同时造成MMP-9及MMP-2明胶酶活性增强，导致肺泡结构的破坏和肺纤维化的发生，这在CMV肺炎的发病机制中起着重要的作用。     

老年学习记忆减退大鼠齿状回突触的定量研究

据老年大鼠在Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫中的行为表现，将其分为老年学习记忆减退和学习记忆正常两部分，采用透射电镜观察、拍片，对齿状回中分子层触的数量和大小进行体视学定量分析。     

荧光定量PCR法筛查混合血浆中的HBV及HCV的可行性

输血所致病毒感染一直受到国内外输血界的关注。因病毒感染初期“窗口期”(从病毒感染到血清标志物检出的时间)的存在，采用现开展的ELISA检测可造成不合格血液的漏检。目前使用各种试剂的“窗口期”如下：HIV1／2抗体22d，HCV抗体70d，HBsAg约56d，其中HCV抗体的“窗口期”已大于70d。通过ELISA法对抗-HCV抗体进行筛查，仍有输血后HCV的感染，这是目前多数输血相关传染病多为丙型肝炎的主要原因。     

醛固酮对肾小球系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物1基因表达的影响

目的:探讨醛固酮(ALD)对大鼠肾小球系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物l(PAI-1)基因表达的影响.方法:(1)以不同浓度的ALD(10-11、10-10、10-9、10-8、10-7 mol/L)刺激肾小球系膜细胞72 h后,用半定量RT-PCR法检测该细胞中PAI-1 mRNA的表达.(2)以10-7 mol/L的ALD刺激肾小球系膜细胞不同时间(12、24、48、72 h)后,用半定量RT-PCR法检测该细胞中PAI-1 mRNA的表达.结果:半定量RT-PCR结果显示,ALD促进培养的大鼠肾小球系膜细胞PAI-1mRNA的表达,且具有浓度依赖性和时间依赖性的特点.结论:ALD促进大鼠肾小球系膜细胞PAI-1 mRNA的表达,从而抑制细胞外基质的降解,促进肾小球疾病进展.     

医学综合评价性问题的定性分析与定量灰关联分析研究

采用定性分析与定量灰关联分析相结合的方法处理医学综合评价性的问题和诊断性的问题。定义了诊断值，诊断灰度和信息覆盖率等医学新概念，实例应用说明，这种分析研究和于临床诊断时，诊断符合率高，误诊率低，而且克服了一般医学诊断模式只能定性分析，不能作定量分析的缺点。     

Real-time PCR检测风疹病毒方法学建立及临床应用

为了建立一种能广泛应用于临床快速、简便、灵敏度和特异性较好的风疹病毒(RV)定量诊断方法。针对RV基因保守序列设计两对引物和一条荧光双标记探针。将PCR扩增所得到的产物片段克隆,作为定量检测的标准品,进行Real-time PCR检测,绘制标准曲线。将此方法和ELISA试剂盒平行检测50份孕妇血清,评估两种方法检出阳性率的差异显著性。Real-time PCR法能较好地检出RVcDNA载量。曲线的相关系数(r)为0.998,可检测线性范围大约在103~109copies/μl,灵敏度接近103copies/μl;批间、批内CV值分别为3.36%、0.94%;也有较好的特异性。与经典的ELISA方法相比,有显著性差异。Real-time PCR方法操作简单、快速,并能避免PCR后处理导致的假阳性污染,实现实时定量。此方法对RV感染的临床诊断和疗效判断等方面有较大的指导意义。