葡甘聚糖-胶原蛋白-壳聚糖共混膜(I)

用溶液共混法制备了葡甘聚糖-胶原蛋白-壳聚糖(KCCS)共混膜。并用FT-IR,X-RD,SEM及透光率表征了膜的结构,同时测试了膜的抗张强度、断裂伸长率、吸水率、透水汽性、渗透性和吸附性。结果表明:共混膜中葡甘聚糖、胶原蛋白及壳聚糖之间存在着强烈的相互作用和良好的相容性,三者共混明显改善了纯聚合物和二元膜的性能。以共混膜为载体培养内皮细胞,发现共混膜具有良好的细胞相容性,预示着共混膜可作为潜在的组织工程支架材料。     

纳米壳聚糖纤维强化型磷酸钙骨水泥的研究

目的探讨纳米壳聚糖纤维强化型磷酸钙骨水泥的机械及生物相容性能。方法使用纳米壳聚糖纤维强化CPC骨水泥,通过MTT比色法及DAPI染色观察其生物相容性情况;通过三点弯曲试验检测其力学性能。结果三点弯曲试验表明经过壳聚糖纤维强化后的骨水泥的机械性能(17.3±4.5)MPa较之普通骨水泥有明显改善(5.3±1.4)MPa;并且这样的改进对材料的生物相容性没有影响,其毒性试验显示新材料相容性比值为(97.5±3.3)%。细胞增值实验3天吸光值分别为(0.237±0.025)、(0.451±0.015)、(0.726±0.032)。结论新型纳米壳聚糖纤维强化型骨水泥无细胞毒性,具有良好的机械性能及生物相容性。     

肝素化胶原/壳聚糖多孔支架的制备及其血管化的研究

本研究旨在构建一种能快速血管化的人工真皮替代物。用冻干法制备了胶原／壳聚糖多孔支架，并对其进行肝素化，观察此支架的结构特征、亲水性、体外降解性和组织相容性，同时将血管生成素引入到此支架，对复合有血管生成素的肝素化支架的体内血管化进行了初步研究。结果表明，肝素化胶原／壳聚糖多孔支架具有合适的三维多孔结构、良好的吸水性和较理想的酶解稳定性，体内实验表明，此支架具有良好的组织相容性，血管生成素可加快支架的血管化。     

骨髓基质细胞和壳聚糖/明胶共混材料生物相容性研究

目的:研究壳聚糖/明胶共混材料对离体培养的骨髓基质细胞粘附及增殖的影响,寻找骨髓基质细胞新的载体材料。方法:取2周龄幼兔的长骨采集骨髓,培养骨髓基质细胞,体外扩增1周后,种植于纯壳聚糖和壳聚糖/明胶共混材料的表面。在倒置光学显微镜、扫描电镜的辅助下,观察细胞的粘附和生长情况,种植7d后用透射电镜观察细胞功能状况,用MTT方法检测种植后2d、4d、6d、8d细胞的增殖情况。结果:壳聚糖/明胶共混材料和纯壳聚糖能促进骨髓基质细胞在材料表面粘附并保持其在机体内的形态。壳聚糖/明胶共混材料表面的骨髓基质细胞功能活跃。在材料表面和培养板表面培养的骨髓基质细胞均能持续增殖,而壳聚糖/明胶共混材料能显著促进骨髓基质细胞的增殖(P<0.01)。结论:壳聚糖/明胶共混材料保持了壳聚糖的某些生物活性,同时由于加入明胶,能促进骨髓基质细胞的增殖,可作为骨髓基质细胞的载体应用于组织工程。     

含银介孔二氧化硅-壳聚糖复合材料的制备与性能研究

目的探讨含银介孔二氧化硅-壳聚糖复合材料(Ag/MSN-Chi)的制备方法及其微观表征、细胞毒性、吸水性能、抗菌性能及止血性能。 方法以正硅酸乙酯为前驱体，十六烷基三甲基溴化铵为致孔剂，采用离子交换法在介孔二氧化硅纳米粒子(MSN)中引入银离子，制备出具有抗菌作用的新型有序的含银介孔二氧化硅纳米粒子(Ag/MSN)材料。再利用烷基化壳聚糖负载Ag/MSN，制备出Ag/MSN-Chi。根据所用材料不同将实验分为实验组和空白对照组，实验组又分为3个亚组：MSN组、Ag/MSN组、Ag/MSN-Chi组，空白组为不加任何材料的阳性对照。计算MSN和Ag/MSN的比表面积、孔容、孔径和Ag/MSN与Ag/MSN-Chi的电荷。并通过吸水实验、体外凝血实验、抗菌实验对MSN、Ag/MSN和Ag/MSN-Chi的细胞毒性、吸水性能、止血性能及抗菌性能进行评价，计算细胞相对存活率、吸水率、凝血酶原时间(PT)、凝血活酶时间(APTT)及抑菌率。取健康成年新西兰大白兔18只，随机分成3组：对照组(采用医用纱布处理)、Ag/MSN组(采用Ag/MSN处理)、Ag/MSN-Chi组(采用Ag/MSN-Chi处理)，每组6只，建立肝创伤出血模型，计算止血时间。数据比较采用方差分析和t检验。 结果MSN的比表面积为(523.8±12.4) m²/g、孔容为(1.2±0.4) m³/g、孔径为(3.5±0.9) nm；Ag/MSN的比表面积为(521.6±11.7) m²/g、孔容为(1.15±0.5) m³/g、孔径为(3.6±0.7) nm，2种材料的比表面积、孔容、孔径比较差异均无统计学意义(t＝0.224、0.135、0.015，P值均大于0.05)。经测量，Ag/MSN的Zeta电位为－19.7 mV，Ag/MSN-Chi的Zeta电位为10.27 mV，表明Ag/MSN表面电荷从负值变为正值。Ag/MSN-Chi组、Ag/MSN组和MSN组与小鼠成肌细胞共培养1、4、7 d的细胞相对存活率比较，差异均无统计学意义(F＝2.61、4.72、3.52, P值均大于0.05)。Ag/MSN组吸水率分别与MSN组和Ag/MSN-Chi组比较，差异均无统计学意义(t＝0.482、1.159，P值均大于0.05)。经检测，Ag/MSN-Chi组、Ag/MSN组、MSN组和空白对照组的PT比较，差异无统计学意义(F＝10.28，P>0.05)；Ag/MSN-Chi组、Ag/MSN组、MSN组和空白对照组APTT分别为(20.9±2.1)、(28.5±3.4)、(31.4±2.6)、(38.7±2.5) s，4组比较差异有统计学意义(F＝8.70，P<0.05)；Ag/MSN-Chi组、Ag/MSN组、MSN组APTT分别与空白对照组比较，差异均有统计学意义(t＝9.443、4.186、3.506，P值均小于0.05)；Ag/MSN-Chi组APTT与Ag/MSN组比较，差异有统计学意义(t＝3.294，P<0.05)。MSN组在培养0.5、2、4、6、24 h 5个时间点抑菌率比较差异无统计学意义(F＝5.437，P>0.05)；培养0.5 h，Ag/MSN组和Ag/MSN-Chi组抑菌率分别为(99.7±5.2)%、(97.1±5.4)%，与培养0.5 h MSN组抑菌率(11.2±5.8)%比较，差异均有统计学意义(t＝19.678、18.775, P值均小于0.05)；培养24 h，Ag/MSN组和Ag/MSN-Chi组抑菌率分别为(73.2±5.1)%和(72.9±6.9)%，与MSN组(11.8±5.7)%比较，差异均有统计学意义(t＝13.904、11.825, P值均小于0.05)。Ag/MSN-Chi组、Ag/MSN组和对照组止血时间分别为(12.3±1.5)、(17.2±3.4)、(28.1±3.8) s，3组比较差异有统计学意义(F＝5.892，P<0.05)；Ag/MSN-Chi组和Ag/MSN组止血时间分别与对照组比较，差异均有统计学意义(t＝9.473、5.236, P值均小于0.05)；且Ag/MSN-Chi组与Ag/MSN组止血时间比较，差异有统计学意义(t＝3.230，P<0.05)。 结论Ag/MSN-Chi在不增加细胞毒性的基础上具有有较好的吸水性能、止血性能及抗菌性能。     

伸长细胞移植促进成年大鼠脊髓再生修复的研究

目的探讨采用体外培养的伸长细胞(Tanycytes,TAs)移植治疗大鼠脊髓损伤的可行性。方法将体外培养的TAs标记后,移植入全横断脊髓损伤大鼠。实验大鼠共分5组:A.单纯TAs细胞移植组,B.TAs细胞加壳聚糖载体移植组,C.壳聚糖载体移植组,D.单纯损伤组,E.假手术组。移植后通过BBB评分法评价大鼠的运动功能恢复情况,并且通过光学显微镜观察移植细胞的存活、迁移和损伤脊髓的修复情况,以及观察大鼠脑区神经元存活状况。结果与对照组相比,TAs移植促进了脊髓损伤局部结构的修复和大鼠下肢运动功能的恢复;移植组可在脑皮质观察到HRP逆行标记神经元;对照组皮质感觉运动区和红核神经元密度小于移植组,差异有显著意义。结论TAs移植可促进损伤脊髓轴突的再生、促进大鼠后肢运动功能的改善。     

壳聚糖与硫酸软骨素共混膜性质的研究

以壳聚糖和硫酸软骨素按一定比例制备出共混膜，研究了膜片的透光性、含水量、渗透性、力学性质、表面结构、生物降解性、生物相容性等性质。结果表明该共混膜具有较好的透光性、通透性、生物降解性和生物相容性，膜表面较粗糙。以此共混膜为载体培养兔角膜基质细胞，发现细胞在此共混膜上生长良好。制备膜片随着加入CaSO4量的增加，膜的通透性也随之增加。     

骨髓间充质干细胞与仿生纳米壳聚糖-胶原复合物修复大鼠胫骨缺损的实验研究

目的： 4周龄SD大鼠骨髓间充质干细胞离体培养后与仿生纳米壳聚糖-胶原（nano chitosan-sodium collagen, nano-CS-COL）形成复合支架，植入SD大鼠胫骨缺损处, 比较修复节段性胫骨缺损的效果, 初步探讨治疗骨缺损的组织工程学方法。方法: 4周龄SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs) 离体培养、纯化、鉴定、扩增后在等同于细胞培养的条件下与nano-CS-COL复合培养, 制成MSCs/nano-CS-COL复合物并经电镜扫描证实复合物有细胞生长。制成同种异体SD大鼠胫骨干5mm节段性动物模型, MSCs/nano-CS-COL复合物通过手术移植入动物模型胫骨缺损处, 通过大体观察、X线放射学、组织学对比实验组与对照组、空白组骨缺损修复情况。结果: 术后6、12周实验组与实验对照组放射学检查评价新骨生成有显著差异(P<0.05) 。术后组织学检查新骨生成速度、生成量均有显著差异。实验组标本与正常组基本一致。空白对照组不能自行修复骨缺损, 最后缺损由纤维组织充填。结论: BMSCs是骨组织工程中适宜的种子细胞。Nano-CS-COL复合支架能够与SD大鼠骨髓间充质干细胞体外复合培养, 移植入异体SD大鼠后未见明显免疫排斥反应, 是可以选择的细胞载体。MSCs/nano-CS-COL复合物植入修复鼠胫骨缺损能够加速新骨形成, 修复效果明显优于单纯CS植入组。     

壳聚糖—明胶混合膜的制备及其生物降解性研究

将壳聚糖与明胶按一定比例混合制膜，通过体外降解及动物体内实验研究了其降解性和生物相容性，结果表明壳聚糖－明胶混合膜在小鼠体现人降解速度较快，并具有较好的生物相容性，溶菌酶对混合膜的生物降解有促进作用。     

壳聚糖纳米颗粒包裹对鼠白细胞介素2基因表达和调节小鼠免疫效应的影响

本实验制备壳聚糖纳米颗粒 (CNP) ,包裹小鼠白细胞介素 2基因 (mIL 2 )真核表达质粒 (VRMIL 2 ) ,肌注接种 2 1d昆明小鼠 ,观察mIL 2基因体内表达及其对免疫应答和免疫保护的影响。实验结果发现 :CNP包裹VRMIL 2注射小鼠血液中IgG、IgM和IgA不同程度地增多 ,均显著高于CNP包裹空白质粒组 (P <0 .0 5 ) ;其血清中IL 2、IL 4和IL 6的含量明显升高 ,与对照组差异显著 (P <0 .0 5 ) ;外周血液的白细胞和淋巴细胞数量也较对照组显著增加。免疫后 35d以大肠杆菌口服攻毒实验小鼠 ,检测发现 :CNP包裹VRMIL 2组小鼠的上述免疫指标除中性粒细胞外均显著多于对照小鼠 ,VRMIL 2接种小鼠均健康存活 ,而对照小鼠均发病 ;尽管CNP包裹VRMIL 2接种小鼠的体液和细胞免疫指标与未包裹VRMIL 2免疫鼠差异不显著 (P >0 .0 5 ) ,但剂量仅为后者的 1/ 5。这些结果表明 :壳聚糖纳米颗粒包裹VRMIL 2可显著提高外源IL 2基因体内表达水平 ,明显增强体液和细胞免疫水平的效应 ,增强对大肠杆菌的抗病力 ,提示壳聚糖纳米颗粒包裹IL 2基因可明显增强动物的体液和细胞免疫 ,可作为有效的抗感染免疫调节剂。