星点设计-效应面法优化壳聚糖微球对凝血酶的固定化作用研究

目的 考察壳聚糖微球对凝血酶的固定化作用。方法 本研究以壳聚糖微球为载体,以戊二醛为交联剂将凝血酶固定于空白微球上,以固定化凝血酶的活性回收率为指标,采用星点设计-效应面法优化固定凝血酶的条件。结果 试验结果表明,壳聚糖微球固定凝血酶的最优条件是：凝血酶浓度69.32 U·mL^-1、戊二醛浓度0.18%、固定化时间1.88 h、固定化pH 7.08,凝血酶的活性回收率为81.55 %。结论 壳聚糖微球对凝血酶的固定化效果良好。     

柴黄清胰活血方治疗高脂血症性急性胰腺炎的疗效观察

目的观察柴黄清胰活血方治疗高脂血症性急性胰腺炎的疗效。方法将高脂血症性急性胰腺炎患者86例根据随机数字表法分为对照组(西医综合治疗)与观察组(西医综合治疗基础上联合柴黄清胰活血方治疗)各43例,比较两组患者治疗后的临床疗效。结果观察组患者腹痛缓解时间、首次大便时间、血淀粉酶恢复时间、尿淀粉酶恢复时间均显著短于对照组(P<0.05)。两组治疗3、7 d后血清胰蛋白酶原2(TPG-2)、胰脂肪酶(TGL)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-18(IL-18)、血小板膜蛋白-140(GMP-140)、甘油三酯(TAG)水平均较治疗前下降,且观察组各项指标显著低于对照组(P<0.05)。结论柴黄清胰活血方治疗高脂血症性急性胰腺炎可减轻患者炎症反应,改善消化功能指标,降低GMP-140、TAG的表达水平,有效缓解临床症状。     

胰蛋白酶差速脱壁法分离纯化人表皮干细胞

背景：表皮干细胞对于修复皮肤缺损具有重要意义，但如何方便、快捷地对所获取的表皮干细胞进行纯化培养一直没有比较好的技术方法。目的：拟应用胰蛋白酶差速脱壁法去除表皮干细胞中混杂的成纤维细胞。设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2006-06／2007—06在解放军军事医学科学院输血医学研究所干细胞与再生医学研究室完成。材料：实验所用皮肤来源于20～30岁女性乳房缩小整形术患者，由北京协和医院整形外科提供。方法：无菌条件下切取皮肤，剪除皮下脂肪组织，采用胶原酶／Dispase酶和胰蛋白酶两步法体外分离培养表皮干细胞。待细胞生长达70％～80％融合时，加入胰蛋白酶消化尚未脱壁的细胞，30s～1min后吸出脱壁细胞，同法传代培养至第5代细胞。主要观察指标：第1，5代表皮干细胞表面标志CD29、CD49f、CD71的表达。流式细胞仪检测第5代细胞生长周期。免疫荧光检测第5代表皮干细胞和传代时胰蛋白酶消化30s～1min即脱壁细胞角蛋白19及波形蛋白的表达。透射电镜观察表皮干细胞超微结构。结果：第1代表皮干细胞CD29阳性率94．32％，CD49f阳性率86．24％，CD71呈弱阳性，经过4次胰蛋白酶差速脱壁去除混杂细胞后，第5代表皮干细胞CD29阳性率96．77％，CD49f阳性率96131，CD71呈弱阳性，82．58％表皮干细胞处于G0～G1期。第5代表皮干细胞角蛋白19呈阳性，波形蛋白呈阴性，而传代时胰蛋白酶消化脱壁的细胞角蛋白19呈阴性，波形蛋白呈阳性，证实为成纤维细胞。表皮干细胞呈克隆样生长，透射电镜下胞质中可见呈束状排列的角蛋白丝。结论：应用胰蛋白酶差速脱壁法能够简单、有效地获取纯化的表皮干细胞。     

过敏性输血反应的原因分析及检测方法

<正>免疫相关非溶血性输血反应包括过敏反应、发热反应、输血后紫癜、输血相关移植物抗宿主病,输血相关急性肺损伤等。其中过敏反应发生率在近年来国内外报道中均高于其他种类输血反应。输血相关过敏反应(allergic transfusion reactions,ATRs)的临床表现症状有:荨麻疹、瘙痒、皮肤红斑、潮红、血管性水肿、支气管痉挛、肺水肿、血压下降以及过敏性休克等,一些症状主要累及局部组织器官发生过敏性炎症,药物治疗有效,但也会存在     

乌司他丁对严重创伤患者凝血功能的影响

乌司他丁是从男性尿液中分离纯化的尿胰蛋白酶抑制剂,除对多种蛋白酶、糖和脂水解酶有抑制作用外,还能延长部分活化凝血酶原时间和凝血酶     

胰蛋白酶在猪慢性胰腺炎胰腺组织中的分布及免疫组化阳性标准

目的:建立慢性胰腺炎(CP)胰蛋白酶免疫组化阳性判断标准,探讨胰蛋白酶在CP中的分布特征及与CP严重程度的关系.方法:取正常猪4例及不同程度CP猪14例的胰腺组织,用链菌素亲生物素-过氧化酶连接法(streptavidin peroxidase conjugated method,SP)免疫组化法检测胰蛋白酶在实验性CP胰腺组织中的分布特征并初步建立阳性判断标准,分析胰蛋白酶的阳性标准与CP严重程度的相关性.结果:胰蛋白酶在CP胰腺组织主要表现为腺泡细胞质内、间质及胰管内棕色或棕黄色染色,染色程度在轻度CP以强阳性( )为主,中度CP以中等阳性( )为主,重度CP以弱阳性(±)为主,3组染色程度之间差异有统计学意义(P<0.05).胰蛋白酶强阳性染色与慢性胰腺炎严重程度具有相关性(r=0.742).结论:胰蛋白酶原异常活化可见于腺泡细胞质内、间质及胰管内,建立了胰蛋白酶阳性判断标准.随着慢性胰腺炎实质纤维化,胰蛋白酶阳性率降低.     

椒目油对豚鼠哮喘模型肥大细胞和类胰蛋白酶的影响

目的:探讨椒目油(ZSO)对豚鼠哮喘模型肺组织中肥大细胞及血浆类胰蛋白酶的影响,为ZSO治疗哮喘提供理论依据. 方法:实验分为4组:对照组,哮喘模型组,地塞米松治疗组和ZSO治疗组. 用卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏和雾化吸入激发建立哮喘豚鼠模型. 镜下观察肺组织肥大细胞数量及脱颗粒现象. 运用UniCAP100全自动体外变应原检测仪测定豚鼠血浆类胰蛋白酶含量. 结果:哮喘模型组豚鼠肺高倍视野肥大细胞数、脱颗粒百分率及血浆类胰蛋白酶含量分别为(14.87±4.67),(42.85±5.99),(119.78±12.50),与对照组(2.38±0.52),(24.91±9.79),(88.78±4.74)相比均升高,差异有统计学意义(P＜0.01). ZSO治疗组豚鼠肺高倍视野肥大细胞数、脱颗粒百分率及血浆类胰蛋白酶含量分别为(6.38±1.06),(25.44±8.21),(93.22±6.40),与地塞米松治疗组豚鼠肺高倍视野肥大细胞数、脱颗粒百分率及血浆类胰蛋白酶含量分别为(6.63±1.41),(25.33±6.14),(92.10±7.11),与哮喘模型组相比显著降低,差异有统计学意义(P＜0.01). ZSO与地塞米松两治疗组之间上述指标相比差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论:ZSO能有效地减少哮喘豚鼠肺肥大细胞数量,抑制肥大细胞脱颗粒、释放类胰蛋白酶,从而能有效地治疗哮喘.     

自噬在急性胰腺炎发生发展中的作用

急性胰腺炎是胰酶提前激活造成胰腺及周围组织自身消化的一种急性炎症性疾病,自噬作为细胞清除异常物质的一种方式,出现在急性胰腺炎的早期病理过程中,其中自噬过程受损是其关键病理反应。自噬受损、组织蛋白水解酶失调、自噬调节异常提示自噬在急性胰腺炎中发挥重要作用。针对自噬形成、自噬与酶原激活、自噬受损与急性胰腺炎及自噬缺陷促进炎症发展等方面对自噬在急性胰腺炎中的作用进行探讨。     

类胰蛋白酶与代谢综合征

代谢综合征是心血管疾病的多种代谢危险因素在个体内集结的状态,主要包括肥胖、糖尿病或糖调节受损、血脂紊乱以及高血压.近来研究发现,代谢综合征的发病与机体慢性炎性反应状态相关.类胰蛋白酶是肥大细胞中含量最丰富的颗粒蛋白,也是一种重要的炎性介质,它可通过促进炎性反应细胞的聚集、细胞凋亡、新生血管形成、基质蛋白重塑等多种机制参与代谢综合征的发生与发展.