蛋白酶激活受体2激动剂对肥大细胞释放组胺的影响

目的 研究PAR-2激动剂(tc-LIGRLO-NH2与SLIGKV-NH2)和胰蛋白酶对结肠肥大细胞释放组胺的影响。方法 结肠组织经酶消化后,细胞成份用全HBSS重新悬浮。激发过程在LP4试管中、37℃条件下完成。组胺水平用以玻璃纤维为基础的荧光方法测定。结果PAR-2激动剂tc-LIGRLO-NH2和SLIGKV-NH2均可诱导人结肠肥大细胞剂量依赖性组胺释放。浓度为100μmol／mL时,tc-LIGRLO-NH2和SLIGKV-NH2可分别引起比基础分泌量多出2．5倍和2倍的组胺释放,而反PAR-2激动剂tc-OLRGIL-NH2和VKGILS-NH2在实验浓度高至300μmol／mL时仍对组胺释放无影响。胰蛋白酶在1．0～100μg/mL间可引起剂量相关性组胺释放,胰蛋白酶抑制剂可抑制之。PAR-2激动剂tc-LIGRLO-NH2的作用从加样后1min开始,3min后完成。细胞经过百日咳毒素和代谢抑制剂预先处理后,几乎失去了对tc-LIGRLO-NH2、SLIGKV-NH2和胰蛋白酶刺激的反应性。结论 PAR-2激动剂和胰蛋白酶是高效的组胺释放刺激剂,其在人结肠炎症性疾病中起一定的作用。     

稳定层流剪应力对内皮细胞骨架调节蛋白VASP表达的影响

为探讨生理强度的稳定层流剪应力对内皮细胞骨架actin相关蛋白VASP特征影响规律，我们采用胰蛋白酶消化法分离人脐静脉内皮细胞(HUVECs)，模拟体内流动环境，建立平行板流动腔模型。利用细胞图像分析系统和ALEXA488—若丹明一次毒蕈环肽双标记法，观察内皮细胞在稳态层流下形态、actin排列变化与VASP分布变化之间的规律。采用Western blot定量动态检测细胞内VASP表达及磷酸化的水平。结果表明，内皮细胞在10dyn／cm^2剪切作用后，随时间细胞逐渐延长，长轴趋于剪应力作用方向排列，细胞与静息态的细胞相比，细胞内骨架沿剪应力方向重组，与此同时VASP表达增强，沿着actin纤维呈点状分布，尤其集中在细胞膜下actin末端区域；Western blot检测显示在剪切后，细胞内VASP出现快速磷酸化，VASP总体表达量增加，2h达高峰后逐渐恢复，8h后再次逐渐升高。以上结果提示血流动力学特性中剪应力引起了细胞胞质内骨架蛋白分子重组，血管内皮细胞形态改变，在此过程中，VASP发挥骨架调节蛋白的作用。     

尿胰蛋白酶原—2测定对急性胰腺炎的早期诊断价值

目的 探讨尿胰蛋白酶原－2测定在急腹症中筛选急性胰腺炎的价值。方法 对346例连续就诊的急腹症病人同时测定尿胰蛋白酶原－2及血、尿淀粉酶。结果 41例急性胰腺炎中有38例尿胰蛋白酶原－2阳性,敏感性为92．7％,305例非胰腺炎的急腹症病人有15例假阳性,特异性为95．1％。5例重症急性胰腺炎中尿胰蛋白酶原－2全部阳性。结论 尿胰蛋白酶原－2是急腹症病人筛选急性胰腺炎快而简便的方法,具有较高的特异性和敏感性。     

尿胰蛋白酶原—2检测诊断急性胰腺炎

<正> 多数急性胰腺炎(AP)病人病情较轻,偶尔呈现能够自愈的临床状态,约20—30％的病人为严重的坏死型,伴有全身或局部的并发站(休克、肾衰、呼吸功能不全、弥漫性血管内凝血、胰腺坏死、脓肿、假性囊肿、肠穿孔或出血)。急性重症胰腺炎临床表现重进展快,有些病人病程只有几小时,非常凶险,死亡率高达40％。尤其是胰腺炎坏死继发细菌感染。总之急腹痛的病人临床症状不特异鉴别诊断即时排除AP是非常重要     

乙二胺羟丙基壳聚糖固定化天门冬酰胺酶的研究

研制了新型壳聚糖胺基衍生物-乙二胺羟丙基壳聚糖（EDA-HPCS）,并将其用于固定天门冬酰胺酶,分别考察了甲醛活化载体和戊二醛活化载体对固定化酶活力的影响,结果表明,在适当的固定化条件下,甲醛活化EDA-HPCS的固定化酶活力约为30U/g载体,而戊二醛活化EDA-HPCS固定化酶活力约为16U/g载体。     

丝素蛋白用于生物材料的研究进展

阐述了丝素蛋白用于固定化酶载体、生物酶防护剂、生物传感器、药物缓释载体、功能性细胞培养基质、抗血凝物质、人工器官等生物材料的研究进展。丝素蛋白在生物材料方面有非常广阔的应用前景。     

胶原凝胶固定化α—糜蛋白酶的研究

目的：采用化学交联方法将α－糜蛋白酶固定化于胶原蛋白凝胶。方法：以戊二醛促进提取的1型胶原蛋白与α－糜蛋白酶形成西夫碱,从而生成固定化糜蛋白酶,并计算固定化效率,观察pH,温度对酶活性影响及固定化对胶原蛋白生物学特性的影响。结果：作出pH,温度等外界因素对固定化酶活性的影响曲线,并得到具一定活性的固定化α－糜蛋白酶,结论：已成功地制备以胶原固定化α－糜蛋白酶的创面外用膜片,可作进一步研究。     

应用胰蛋白酶／DNA酶消化法分散人绒毛膜滋养层细胞

目的：获得人绒毛膜滋养层细胞,方法：应用胰蛋白酶／DNA酶消化法进行消化,经光镜和电镜观察。结果：我们获得了人绒毛膜滋养层细胞。结论：取人妊娠45－55天刮宫术后的绒毛,甲胰蛋白酶消化可得到绒毛滋养层细胞。     

成年猪胰岛分离方法的改进

目的 :开发成年猪胰岛分离方法。方法 :取成年猪胰腺体尾部 ,胰管内注入冷 0 .1 %胶原酶消化液 ,在 38.5℃水浴箱中消化后 ,放入 4℃ Hanks液中分离并用 60 0μm的滤过网过滤回收。残留的组织重新悬浮在冷 Hanks液中 ,并放入 Ricordi′s chamber内振荡 5min后再次过滤回收。用Ficoll不连续密度液梯度离心法进行胰岛纯化。结果 :纯化前、后胰岛收获量分别为 ( 850 5± 3349)g-1〔IEQ:( 4 2 53± 2 732 ) g-1)、( 2 334± 1 2 2 3) g-1〕,纯度 >80 %。胰岛收获量与消化后的消化液胰蛋白酶活性显示了弱的负相关 ( r=- 0 .44,P=0 .1 3) ,胰岛收获量≥ 80 0 0 g-1组的消化后消化液胰蛋白酶活性明显低于胰岛收获量 <80 0 0 g-1( 78.3± 2 6.7vs1 37.5± 48.4BAEEU,P<0 .0 5)。结论 :我们采用的胰岛分离方法能够获得大量的猪胰岛细胞 ;胰蛋白酶活性影响胰岛收获量。     

慢性荨麻疹患者的类胰蛋白酶测定

目的研究类胰蛋白酶与慢性荨麻疹发病的关系. 方法采用Pharmacia Unicap-100系统酶免疫荧光检测仪,分别对25例慢性荨麻疹患者和29例正常人作类胰蛋白酶检测. 结果慢性荨麻疹患者组类胰蛋白酶阳性率为72.0%,正常对照组阳性率为10.3%,两组比较有明显差异(P＜0.01). 结论类胰蛋白酶可作为慢性荨麻疹发病过程中肥大细胞激活的一个标示物,并可能与Ⅰ型变态反应的延缓相有关.