OX40Ig修饰大鼠脂肪间充质干细胞的实验研究

目的构建含OX40融合蛋白(OX40Ig)基因修饰的大鼠脂肪间充质干细胞(ADSCs)即ADSCs^OX40Ig,探讨其在体外对淋巴细胞的免疫调节作用。方法构建pcDNA3.1(+)/OX40Ig融合基因表达载体,采用核转染技术转染大鼠ADSCs,Western blot检测ADSCs中OX40Ig表达水平。ADSCs与大鼠异基因淋巴细胞共培养后分为对照组(反应细胞+刺激细胞)、ADSCs组(反应细胞+刺激细胞+ADSCs)及ADSCs^OX40Ig组(反应细胞+刺激细胞+ADSCs^OX40Ig),MTT法检测淋巴细胞增殖抑制率,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测淋巴细胞内干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-10及转化生长因子(TGF)-βmRNA表达。结果经测序鉴定验证,pcDNA3.1(+)/OX40Ig质粒构建成功,转染ADSCs后OX40Ig蛋白呈高表达;与ADSCs组比较,ADSCs^OX40Ig显著增强异基因淋巴细胞增殖抑制率(P<0.05);对照组、ADSCs组及ADSCs<...     

密码子优化人PD-L1基因在巴斯德毕赤酵母中的表达与鉴定

目的 利用巴斯德毕赤酵母获得具有可溶性、免疫原性的重组PD-L1蛋白。方法 根据巴斯德毕赤酵母表达系统的密码子使用偏好,优化人PD-L1基因序列,将优化后的序列构建至质粒pPIC9K,合成重组质粒pPIC9K-PDL1。使用SacⅠ-HF将pPIC9K-PDL1线性化,然后通过电击法将pPIC9K-PDL1上的PD-L1基因序列整合至巴斯德毕赤酵母基因组中,依次使用MD平板(无组氨酸)和遗传霉素G418从电击处理过的菌液中筛选重组巴斯德毕赤酵母菌株,然后使用PCR和测序对筛选到的菌株进行鉴定。利用甲醇体积分数为0.005的BMMY培养基诱导重组巴斯德毕赤酵母菌株表达,使用免疫印迹法检测菌株培养基上清液中的表达产物。结果 筛选得到了稳定表达PD-L1蛋白的重组巴斯德毕赤酵母菌株,表达的PD-L1相对分子质量约为44 700,可以与抗PD-L1抗体特异性结合。结论 成功构建了稳定表达PD-L1蛋白的重组巴斯德毕赤酵母菌株,菌株表达的PD-L1蛋白可用于开发血清PD-L1检测试剂盒。     

三黄益肾胶囊调控NF-κB信号通路减轻糖尿病肾病大鼠炎症反应的机制研究

目的：旨在探究三黄益肾胶囊治疗糖尿病肾病（DN）可能的炎症反应机制。方法：按照随机数字表法将60只大鼠分为正常组、模型组、厄贝沙坦组及三黄益肾低、中、高剂量组,每组10只。除正常组外,其余各组大鼠用高糖高脂饲料联合链脲佐菌素（STZ）注射建立DN模型。正常组和模型组给予生理盐水2 mL灌胃;厄贝沙坦组给予厄贝沙坦11.51 mg/kg灌胃;三黄益肾低、中、高剂量组分别给予三黄益肾胶囊0.41、0.81、1.62 g/kg灌胃。各组大鼠均1次/d,连续给药4周。比较各组大鼠空腹血糖（FBG）、体质量、24 h尿白蛋白、肾功能指标、肾组织病理学变化、肾组织抗氧化相关指标（SOD、GSH-Px活性及MDA水平）、肾组织炎症介质［白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）］、肾组织诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、肾组织CD68、CC趋化因子受体2(CCR2)表达、肾组织CC趋化因子配体2(CCL2)、NF-κB P65、p-NF-κB P65、IκB、p-IκB表达。结果：与模型组比较,各三黄益肾胶囊组大鼠体质量高,FBG、血清肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）及24 h尿蛋白水平低,肾脏组织病理变化减轻,三肾组织中SOD、GSH-Px活性高,MDA水平低,IL-6、IL-1β、TNF-α水平低,肾组织中iNOS水平低,肾组织CCR2与CD68共定位水平低,CCL2、p-NF-κB P65、p-IκB蛋白表达低。结论：三黄益肾胶囊治疗DN的机制可能与抑制肾组织中NF-κB信号通路激活,减轻肾脏氧化应激及炎症反应有关。     

免疫检查点HHLA2和PD-L1在肝癌组织中的表达及临床意义

目的:考察免疫检查点人内源性逆转录病毒-H长端重复相关蛋白2(human endogenous retrovirus-H long terminal repeat-associating protein 2,HHLA2)和程序性死亡配体-1(programmed death ligand-1,PD-L1)在肝细胞癌组织中的表达,分析两者之间表达的相关性及与临床病理特征和临床预后关系。方法:应用免疫组织化学染色方法检测90例肝癌组织及相对应癌旁组织中HHLA2和PD-L1的表达,分析HHLA2和PD-L1在肝癌组织中表达的相关性,并分析HHLA2和PD-L1的表达与肝癌的临床分期、血清甲胎蛋白(AFP)水平、病理分级、慢性乙型肝炎病毒感染、血管侵犯等临床病理参数和总生存时间(OS)之间的关系。结果:在肝癌组织中,HHLA2阳性表达率(49/90,54.4%)高于癌旁组织(33/90,36.7%),但差异无统计学意义(P>0.05);PD-L1阳性表达率(52/90,57.7%)较癌旁组织(44/90,48.9%)差异无统计学意义(P>0.05)。HHLA2与PD-L1表达在肝...     

PD-L1过表达对CLL-1 CAR-T细胞抗急性髓系白血病作用的影响

目的探讨程序性死亡受体配体1(PD-L1)对CLL-1 CAR-T细胞抗急性髓系白血病(AML)作用的影响。方法通过构建PD-L1表达载体、制备慢病毒、转导、单克隆筛选技术获得稳定表达PD-L1的THP-1单克隆细胞株(THP1-PDL1),然后以前期制备的CLL-1 CAR-T细胞为效应细胞,以THP-1、THP1-PDL1单克隆细胞株作为靶细胞,分别通过LDH检测、CBA法、CFSE法评价PD-L1过表达对CLL-1 CAR-T细胞裂解功能、炎性因子释放、细胞增殖等功能的影响。结果①成功制备了PD-L1慢病毒,并筛选获得了稳定表达PD-L1的THP1-PDL1单克隆细胞株,流式细胞术及PCR验证成功。②PD-L1过表达抑制了CLL-1 CAR-T细胞裂解THP-1细胞的能力;效靶比为10∶1时,CLL-1 CAR-T细胞对THP1-PDL1细胞的杀伤效率明显低于对THP-1细胞的杀伤效率[(15.70±9.90)%对(51.95±2.52)%,P<0.05]。③PD-L1过表达减弱了CLL-1 CAR-T细胞释放细胞因子的能力[与THP1-PDL1细胞共培养时对与THP-1细...     

血清CCL20与失代偿期肝硬化患者肝纤维化的相关性

目的 观察失代偿期肝硬化患者血清CC家族趋化因子配体(CCL)20(CCL20)水平及肝纤维化比例面积,并分析血清CCL20水平与肝纤维化程度的关系.方法 选取2018年1月-2019年12月期间我院接受治疗的69例失代偿期肝硬化患者作为观察组;并选取同期于我院接受治疗的67例代偿期肝硬化患者作为对照组,检测两组血清C...     

Flt3l与肿瘤关系的研究进展

酪氨酸激酶受体3配体(Fms-like tyrosine kinase 3 ligand,Flt3l)是新发现的一种细胞因子.该因子与fms样酪氨酸激酶受体3 (fms-like tyrosine kinase 3 receptor,Flt3R)特异性结合,可促进多种干细胞、血细胞及其前体细胞的生成与分化.     

多配体聚糖结合蛋白在乳腺癌及其他恶性肿瘤中作用的研究进展*

多配体聚糖结合蛋白（SDCBP ）是一种将多配体聚糖介导的信号与细胞骨架联系起来的分子,与多种恶性肿瘤的进展密切相关。乳腺癌是一种包含多种亚型的异质性疾病,具有不同的分子表型、临床特征以及对治疗的不同反应。为对那些缺乏有效个体化治疗手段的乳腺癌特别是三阴性乳腺癌和内分泌治疗耐药的乳腺癌,及其他恶性肿瘤的靶向性治疗提供新的思路,本文将就SDCBP 在乳腺癌及其他恶性肿瘤中参与的信号转导途径和发挥的作用进行综述。     

血清趋化因子CXC配体13及趋化因子CXC受体5与老年进展期胃癌患者淋巴结转移的相关性

目的 观察老年进展期胃癌患者血清趋化因子CXC配体(CXCchemokine ligand,CXCL)13、趋化因子CXC受体(CXC chemokine receptor,CXCR)5水平变化,探讨CXCL13、CXCR5与老年进展期胃癌患者淋巴结转移的关系.方法 老年进展期胃癌患者89例为进展期胃癌组,其中发生淋巴...     

IFN-γ增强TRAIL诱导人神经母细胞瘤细胞凋亡的研究

目的 探讨γ-干扰素（IFN-γ）对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）抑制神经母细胞瘤LAN-1细胞株生长作用的影响,为TRAIL的临床应用提供理论依据。方法 以神经母细胞瘤细胞株LAN-1为对象,采用MTT比色法和流式细胞术研究IFN-γ对TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡的影响。结果 IFN-γ组、TRAIL 组和IFN-γ72h＋TRAIL组的存活分数分别为（97.12&#177;3.03）%、（83.35&#177;2.95）%、（60.05&#177;4.05）%。IFN-γ组、TRAIL 组、IFN-γ24 h ＋TRAIL组、IFN-γ 48 h＋TRAIL组和IFN-γ 72 h＋TRAIL组的凋亡率分别为（2.26&#177;0.35）%、（3.03&#177;0.68）%、（6.87&#177;0.99）%、（9.80&#177;1.85）%、（15.11&#177;2.57）%。IFN-γ 24 h＋TRAIL组的凋亡率高于IFN-γ组与TRAIL组（P 〈0.05）。随着IFN-γ预处理时间的延长,TRAIL引起LAN-1的凋亡率也明显上升（P〈0.05）。结论 IFN-γ能有效加强TRAIL对LAN-1细胞株的凋亡诱导作用。