FasL基因表达对缺氧状态下直肠癌细胞增殖凋亡的影响

Objective To elucidate the effect of FasL gene expression on the proliferation and apoptosis of hypoxic rectal carcinoma cells. Methods The normoxic expression level of FasL in HR-8348 subtype cells (HR-8348B, HR-8348L, HR-8348F and HR-8348As) with different invasive power were verified by Western blot. Hypoxia models for HR-8348B, HR-8348L, HR-8348F and HR-8348As were constructed with chemical modeling, then the FasL levels in all groups at 12 h after hypoxia were quantitated by Western blot. Distribution of different cell life cycles was determined with flow cytometry. Cell reproductive activities were detected with MTT method, and cell apoptesis was assessed with TUNEL. Results FasL protein was pigmentized at the position of 40 000 by Western blot, and the expression level of FasL was significantly higher in HR-8348F cells than those in HR-8348B, HR-8348L and HR-8348As cells(F=361.149, P<0.01) in normoxia. At 12 h after hypoxia, the FasL level was also significantly higher in HR-8348F cells than those in other groups (F=278.766, P<0.01), but was not markedly different as compared to themselves in normoxia (t=1.762, P>0.05). The proliferation index was significantly higher in HR-8348F (60.43±3.72) than those in HR-8348B (40.01±3.30), HR-8348L (41.30±4.06) and HR-8348As cells (35.87±4.39), respectively (F=39.477, P<0.01). However, both inhibition rate of proliferation and apoptotic index were remarkably lower in HR-8348F (17.30±1.98 and 13.10±1.04) than those in HR-834B (33.70±4.33 and 21.60±1.31), HR-8348L (34.20±3.92 and 20.10±1.15), and HR-8348As (38.00±4.55 and 23.90±1.23), respectively (F=28.811 and 76.462, respectively, P<0.01). Conclusion The expression enhancement of intracellular FasL in rectal carcinoma in hypoxia can lead to accelerated proliferation and reduced apeptosis of cells, which will promote tumor cells to adapt microenvironmental hypoxia.     

支气管哮喘患者外周血白细胞中糖皮质激素受体的研究

采用３Ｈ－Ｄｅｘ放射配体结合分析法测定２２例正常人及２０例哮喘患者在糖皮质激素（ＧＣ）治疗前后外周血白细胞中糖皮质激素受体（ＧＣＲ）水平。结果：哮喘患者外周血白细胞ＧＣＲ（３９６６±１１０９位点／细胞）明显低于健康正常人（５２５４±１２８９位点／细胞）（Ｐ＜０．０５）；哮喘患者经ＧＣ治疗一周后，其白细胞中ＧＣＲ（２０９１±４９４）明显低于治疗前（Ｐ＜０．０５）；但哮喘患者ＧＣ敏感组白细胞中ＧＣＲ与ＧＣ耐受组之间无显著差异（Ｐ＞０．０５），并对其发生机制作了初步探讨     

T细胞活化期间细胞内钙信息传递的调节与其在T细胞活化中的意义(二)

2.2.2对细胞外钙离子浓度的依赖性当灌流液中的钙被去除以后,拮抗型APL的E58M引起的细胞内钙的增加几乎完全被阻断,但M12p54-68和部分激动型APL的E63V引起的细胞内钙反应则仅仅部分被减弱.这一结果说明,拮抗型APL的E58M引起的T细胞内钙离子浓度的增加主要来源于细胞外钙离子的内流.     

离子通道抗体与自身免疫性离子通道病

近年的研究发现,离子通道功能异常与多种疾病尤其是神经系统疾病密切相关[1,2].它既可由编码离子通道的基因发生先天性突变导致,也可由体内出现针对离子通道的抗体引起,广义上都可归为离子通道病(channelopathy),其中后者多为自身免疫介导,可累及中枢、外周神经系统及神经肌肉接头,被称为自身免疫性离子通道病(autoimmune ionic channelopathies,AICP).     

TRAIL胸外段基因克隆及其表达与纯化

目的；克隆TNF相关的诱导凋亡配体胞膜外段基因（the extracellular region of the human TRAIL cDNA,TPAILex），构建表达载体并在大肠杆菌DH5α中高效表达有生物学活性的TRAIL蛋白胞膜外段。方法：抗CD3McAb刺激正常人外周血淋巴细胞，用RT－PCR、巢式－PCR方法从活化的淋巴细胞中获得人TRAIL基因及其胞膜外段cDNA，并克隆到pGEM-T Easy载体中，DNA测序鉴定，将TRAIL的胞膜外段基因插入表达载体pGEX-2T，构建重组表达质粒pGEX/TRAILex，用IPTG诱导表达TRAIL蛋白的胞膜外段，GST－Agarose 4B层析柱纯化GST－TRAILex融合蛋白，Western-blot鉴定纯化产物。结果：抗CD3 McAb能诱导正常人外周血核细胞TRAIL的高表达，成功地克隆了TRAIL胞膜外段基因，构建了重组表达载体pGEX/TRAILex，IPTG诱导后得到高效表达的TRAIL蛋白胞膜外段，经12％SDS－PAGE分析，可观察到一分子量和理论值相符（约54kD）的诱导表达。Kodak软件分析表达GST－TRAIL胞膜外段融合蛋白的表达量占菌体蛋白总量的28％，进一步分析证实TRAIL蛋白的胞膜外段主要以可溶性的形式表达，用GST－Agarose 4B层析柱纯化超声破菌后的上清，每升细菌培养液可得到9.8mg纯度的95％以上的GST－Tex。Western-blot结果证实54kD的表达带可与鼠抗TRAIL McAb起特异性反应。结论：成功地克隆了人TRAIL基因，并应用基因工程技术在大肠杆菌中高效表达人TRAIL蛋白的胞膜外段，为进一步研究TRAIL的功能及其在肿瘤生物治疗中的应用奠定了基础。     

雌激素受体α和β在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义

雌激素受体（ER）是一类由配体激活的转录因子，雌激素的生理作用由ERα和ERβ两种亚型介导；两者在结构上有高度的同源性，但在编码基因、组织分布和表达明显不同，尤其是与配体结合后产生的生理学效应也不同。我们采用免疫组织化学染色方法观察ERα、ERβ表达，探讨其与膀胱癌生物学行为和预后的关系。[第一段]     

普伐他汀对急性冠状动脉综合征患者血浆sCD40L及MMP-9影响的观察

选择急性冠状动脉综合征（ACS）患者35例（ACS组），稳定型心绞痛（SAP）患者31例（SAP组），正常健康体检者28例（／E常对照组），前两组口服普伐他汀20mg／d，连用8周。采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定三组治疗前后血浆可溶性白细胞分化抗原40配体（sCD40L）及基质金属蛋白酶-9（MMP-9）浓度。结果治疗前ACS组血浆sCD40L及MMP-9显著高于SAP组及正常对照组（P〈0．05），SAP组MMP-9显著高于正常对照组（P〈0．05），SAP组sCD40L与正常对照组之间无差异（P〉0．05），普伐他汀治疗8周后ACS组血浆sCD40L及MMP-9水平显著下降（P〈0．05，P〈0．01），SAP组MMP-9显著下降（P〈0．05），sCD40L无明显改变（P〉0．05）。认为sCD40L及MMP-9升高可能与ACS发病机制密切相关，sCD40L及MMP-9可作为ACS诊断及病情判断的重要指标；普伐他汀能降低ACS患者sCD40L及MMP-9水平。     

原发性干燥综合征唇腺组织Fas、Fasl、Bcl-2表达的免疫组化研究

目的　探讨 Fas、Fas配体 (Fasl)及 Bcl- 2在原发性干燥综合征 (PSS)患者唇腺组织中的表达、定位及其与 PSS组织损伤的关系。方法　采用免疫组织化学方法对 30例 PSS患者及 10例正常人组织唇腺中 Fas、Fasl及 Bcl- 2的表达进行检测和组织细胞定位。结果　 PSS患者唇腺组织腺泡上皮细胞 (AEC)和导管上皮细胞(DEC)中 ,Fas/ Fasl表达阳性细胞百分比明显增加 ,与正常对照组比较有高度显著差异 (P <0 .0 1) ;Bcl- 2表达阳性细胞百分比明显减少 ,与正常对照组比较有显著差异 (P <0 .0 5 )。 PSS组 AEC、DEC及浸润单核细胞(IMC)中 ,Fas表达阳性细胞百分比三者间比较均无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;Fasl表达阳性细胞百分比 DEC与IMC均显著高于 AEC(P<0 .0 5 ) ;Bcl- 2阳性细胞表达百分比 :IMC显著高于 AEC和 DEC(P<0 .0 5 )。结论　PSS患者唇腺上皮细胞 Fas、Fasl表达增加及 Bcl- 2表达减少可能是 PSS患者唾液腺破坏的原因之一 ;Fas、Fasl和 Bcl- 2在 IMC中异常表达也为 PSS患者唾液腺破坏的一个重要机制     

十二指肠溃疡患儿胃窦组织胃泌素与生长抑素、增殖与凋亡免疫组化研究

目的:分析十二指肠溃疡(DU)患儿胃窦组织中胃泌素(GAS)、生长抑素(SS)、增殖细胞核抗原(PCNA)、凋亡Fas基因配体(Fas-L)的免疫组化表达,探讨它们在小儿DU发病机制中的意义。方法:收集我院44例DU患儿胃镜活检胃窦黏膜标本。设3组实验对象:A组,DU,HP+;B组,DU,HP-;C组,正常对照组,正常胃窦黏膜组织未见明显病变,HP-。应用免疫组化EnVision法,对每例组织分别进行GAS、SS、PCNA、Fas-L染色,数阳性细胞数,比较各组差异。结果:GAS、SS的表达A组、B组均高于C组,PCNA、Fas-L的表达A组高于C组,但统计学上比较差异无显著性。结论:GAS、SS表达增高在小儿DU发病机制中起一定作用;HP感染可能促进胃窦黏膜上皮细胞增殖和凋亡。     

TRAIL与前列腺癌

前列腺癌的发生除了与多种癌基因和抑癌基因的异常激活和表达有关以外，细胞凋亡过程的抑制也是其形成的重要机制。对凋它分子TRAIL（TNF related apoposis inducing ligand,肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体)诱导细胞凋亡的机制及其在前列腺癌方面的研究有望成为治疗前列腺癌的新一代药物。