原核细胞microRNA特性及其作用机制研究进展

microRNA为一类非编码小RNA,主要通过其种子序列(seed sequence,SS)与靶mRNA位于5′端的SS结合序列特异性结合后抑制靶mRNA转录或降解靶mRNA,从而在转录后水平负调控靶基因表达。microRNA首先发现于秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans),此后发现各种真核细胞均存在大量各种microRNA。真核细胞首先转录出microRNA前体,经剪切后成为21~23nt有功能的microRNA,大多与靶mRNA的3′端序列结合后引起靶mRNA翻译抑制或降解。近年不少细菌等原核细胞microRNA被发现,但原核细胞microRNA不需剪切即有活性,大小为50~400nt,其特性、作用位点和机制等也与真核细胞有一定差异。本文简要介绍真核和原核细胞基因表达调控主要机制、microRNA特点及其调控基因表达的机制,以期为深入研究原核细胞型病原微生物基因表达调控与致病机制奠定基础。     

儿童肺炎支原体感染的药物治疗

支原体是迄今能在无生命培养基中生长繁殖的最小的原核细胞微生物。其大小介于细菌与病毒之间,能通过细菌滤器,生长需要含胆固醇的特殊培养基,缺乏细胞壁,呈球形、杆状、丝状等多种形态,革兰染色阴性。已发现的人体支原体有16种,归属于柔膜体纲、支原体目、支原体科。支原体科又分成两个属（即支原体属和脲原体属）。对人类有致病作用的有3种：肺炎支原体（mycoplasma pneumoniae,MP）、人型支原体和解脲脲原体。本文重点讨论的是肺炎支原体。     

现代动物细胞培养反应器概述

<正>动物细胞在很多方面是不同于原核细胞和真菌的,例如较低的生长率、较高的剪切敏感性以及较低的气泡耐受性,这些特性会对动物细胞生物反应器的设计产生一定的影响。特别是搅拌与通气系统的构造需要满足细胞生长于尽可能     

人Smith D1抗原在原核细胞中的表达及纯化

系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）是一种自身免疫性疾病。患者血清中可检出多种自身抗体，抗Sm抗体是SLE的标志性抗体。并已成为美国风湿病协会（ARA）1997年修订的诊断标准之一。在Sm抗原中能与抗Sm抗体发生反应的是SmB／B’和SmD，而SmE、[第一段]     

截短型A组轮状病毒VP6在E.coli中的高效表达

目的：研究A组轮状病毒（RV）组特异性抗原（VP6）片段的表达，为RV免疫检测技术提供材料。方法：以pcDNA3.1 VP6为模板，通过PCR扩增得到VP6的截短突变体编码基因VP6 1，将其插入谷胱甘肽巯基转移酶（GST）融合表达载体pGEX 5X，在E.coli中用异丙基 β D 硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达。对表达产物进行SDS PAGE和Western blot分析。通过改变宿主菌、培养基、IPTG浓度和培养温度等条件，提高目的蛋白的可溶性表达水平，使用GST Sepharose 4B亲合层析进行初步纯化。结果：选定VP6 氨基酸12～143片段为目的蛋白， PCR扩增其396?bp的编码基因片段，构建出pGEX 5X VP6 1。将该重组质粒转化E.coli后，SDS PAGE和Western blotting 分析均显示，含有截短VP6蛋白的重组融合蛋白GST::VP6 1在E.coli中获得高效表达，约占菌体总蛋白的30％。该蛋白主要以包涵体形式存在，经条件优化，最终通过低浓度IPTG、低温诱导提高重组蛋白的可溶性表达水平，GST亲和层析可对其进行初步纯化。结论：VP6 1蛋白在E.coli中可被高效表达和纯化，为下一步制备抗VP6的特异性单克隆抗体并用于免疫检测打下基础。     

神经元蛋白14-3-3βcDNA克隆及在原核细胞中的表达

目的　利用分子克隆技术在原核细胞中研究 14 3 3 β蛋白的表达。 方法　从神经母细胞瘤细胞系中提取细胞总RNA ,RT PCR扩增 14 3 3 βcDNA ,与克隆载体pGEM T连接后测序 ,再次亚克隆至pGEX 2T表达载体 ,转化大肠杆菌DH5α菌株 ,筛选阳性克隆 ,经异丙基硫代 β D 半乳糖苷(IPTG)诱导表达。结果　经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和蛋白质印迹 (Westernblot)分析 ,表达的融合蛋白相对分子质量为 5 3 0 0 0左右 ,能与 14 3 3 β蛋白特异性多克隆抗体发生免疫结合反应。结论　人 14 3 3 β蛋白可在原核细胞中表达 ,具有良好的免疫反应性 ,为建立克罗伊茨费尔特 雅各布病 (creutzfeld JacobDISEASE ,CJD)的辅助诊断方法及研究 14 3 3 β蛋白在CJD病分子致病机制中的作用打下了基础。     

2379例女性患者支原体感染情况与药敏分析

支原体（Mycoplasma）是一类无细胞壁、形态呈高度多形性。能通过除菌滤器,在无生命培养基中能生长繁殖的最小原核细胞微生物．由于它们能形成有分枝的长丝,故称之为支原体。感染人类的支原体有十余种,女性生殖道以人型支原体（Mh）及解脲脲原体（Uu）最常见。     

Construction and Expression of pacA and gtfB-cat of Streptococcus Mutans Fused with ctxB in Prokaryotic Cells

目的:构建含变形链球菌表面蛋白A区编码基因(pacA)、葡糖基转移酶催化区编码基因(gtfB-cat)及霍乱毒素B亚单位编码基因(ctxB)的嵌合表达质粒并表达目的蛋白.方法:将目的基因pacA、gtfB-cat、ctxB克隆至原核克隆载体pET32-a(+)构建嵌合质粒pET-pacA-cat-ctxB,将其转入表达宿主菌E.coliBL21(DE3),并测量其表达情况.结果:构建的重组质粒经酶切、PCR鉴定及测序,证实目的基因均正确插入到载体pET-32a(+)中,插入的相位正确,未改变目的基因的阅读框架,经诱导后表达目的蛋白,分子质量大小与预期一致.结论:成功构建了嵌合质粒pET-pa-cA-cat-ctxB,且它们均在原核细胞内获得正确表达.     

热休克蛋白与抗丝虫感染研究

热休克蛋白是原核细胞扣真核细胞在应激情况下舍成的一组结构扣功能高度保守的蛋白。有些热休克蛋白是持续舍成的，在分子折叠中起着管家基因的作用。作为显性的免疫原，热休克蛋白广泛分布于各种丝虫，在丝虫的发育过程及宿主抗感染免疫中发挥了重要的作用。热休克蛋白作为免疫反应中的靶抗原之一，有望成为抗丝虫疫苗的候选分子。     

hDaxx融合蛋白在原核细胞中表达与纯化

目的：GST－hDaxx融合蛋白在原核细胞中表达并纯化，以便进一步在体外探讨hDaxx的生物学活性。方法：构建GST－hDaxx融合蛋白原核细胞表达载体pGEX-4T/hDaxx，在大肠杆菌（E.coli）中用异丙基－β－D－硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达。表达产物用亲和层析柱加以纯化后，Western blot鉴定表达产物及其纯化物。结果：pGEX-4T/hDaxx能用IPTG在E.coli中诱导表达GST－hDaxx融合蛋白。结论：原核细胞表达了GST－hDaxx融合蛋白。