桦褐孔菌化学成分的研究

目的：对桦褐孔菌Fuscoporia obliqua Fr,Te.LaT的化学成分进行系统研究,方法：采用硅胶柱层析进行分离,通过理化常数测定和波 （MS、^1H,^13CNMR,IR)技术进行结构鉴定。结果：分析鉴定卫9个化合物,它们分别为：桦褐孔菌素（fuscoporine,1),lanosterol(II),3β－hydroxy-lanosta-8,24-diene-21-al(III),3β,21－dihydroxy-lanosta-8,24-diene(IV),3β－hydroxy-lanosta-8,24-diene-21-acid(V),3β,22R－dihydroxy-lanosta-8,24-diene(VI),ergosterol peroxide(VII),analog of sphingin(VIII) 和mannitol(IX),结论：化合物I为一新化合物,命名为桦褐孔菌素。     

早期糖尿病大鼠心肌NOS系统与胶原纤维演变的实验研究

目的:观察不同时期糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠血清、心肌组织中NO、NOS水平及心肌胶原纤维的变化,探讨NO与心肌胶原纤维的相关性.方法:应用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立SD大鼠糖尿病模型,设立正常对照组(1个月、2个月和3个月)和模型组(1个月、2个月和3个月).测定各组大鼠血清、心肌匀浆中的NO含量及NOS活性,利用Van Gieson氏胶原纤维染色法观察各组大鼠心肌胶原纤维的变化.结果:DM大鼠血清、心肌中的NO、NOS水平较正常组显著降低(P＜0.05)并随着糖尿病病程的延长不断降低,心肌胶原纤维在糖尿病组明显增生,而且也随着病程的延长不断加重.结论:DM大鼠心肌胶原纤维的增生与细胞中NO及NOS水平的减少有关.     

β-榄香烯对STZ致糖尿病性视网膜病变大鼠增殖期SIRT1和VEGF表达的影响

目的研究β-榄香烯对链脲佐菌素(STZ)致糖尿病性视网膜病变大鼠增殖期沉默信息调节因子(SIRT1)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法选取80只Wistar大鼠作为研究对象,将其分为正常对照组、DR模型组、无菌柠檬酸组以及β-榄香烯组各20只。其中DR模型组、无菌柠檬酸组以及β-榄香烯组大鼠均经适应性喂养后通过腹腔一次性注射STZ制作糖尿病视网膜病变增殖期模型。无菌柠檬酸组大鼠造模成功后予以无菌柠檬酸腹腔注射干预,β-榄香烯组大鼠造模成功后则予以玻璃体腔内注射β-榄香烯干预。分别比较各组大鼠视网膜中SIRT1/β-actin相对灰度值、视网膜血管VEGF表达。结果 DR模型组、无菌柠檬酸组、β-榄香烯组以及正常对照组大鼠视网膜中SIRT1/β-actin相对灰度值分别为(1.218±0.033)、(1.305±0.052)、(1.411±0.088)、(1.502±0.103),呈逐渐升高趋势,且经单因素方差分析可得:组间比较差异均有统计学意义(P0.05)。DR模型组、无菌柠檬酸组、β-榄香烯组以及正常对照组大鼠视网膜血管VEGF表达水平分别为(89.084±1.881)pg/m L、(57.920±0.910)pg/m L、(50.144±0.721)pg/m L、(44.382±0.661)pg/m L,呈逐渐下降趋势,且经单因素方差分析可得:组间比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论β-榄香烯对STZ致糖尿病性视网膜病变大鼠增殖期SIRT1表达具有一定的促进作用,而对VEGF表达具有明显的抑制作用。     

链脲佐菌素糖尿病模型动物血糖及体征动态变化的研究

目的 探讨链脲佐菌素(streptozotocin)糖尿病模型动物血糖和体征动态变化的特点.方法 链脲佐菌素1次或多次腹腔注射,分别建立大鼠和小鼠糖尿病模型;检测血糖变化,以进食量(g)/体质量(g),饮水量(ml)/体质量(g)计算进食量系数和饮水量系数.结果 雄性大鼠链脲佐菌素60 mg/kg糖尿病成模率为65.0%,血糖在注射后15 d达到高峰,15～25 d保持在较高水平,25d后出现明显的下降.小鼠链脲佐菌素200 mg/kg分5次建立糖尿病成模率为90.0%,血糖的动态变化与大鼠类似,但血糖下降不明显.在这两个糖尿病模型中,动物的饮水量系数变化与血糖水平变化的相关性最高,相关系数r＞0.97.结论 链脲佐菌素糖尿病模型动物的血糖水平在造模开始后的15～25 d维持在较高水平,可作为观察降血糖药物疗效的适宜时段.饮水量系数是反映血糖的水平变化的适宜指标.     

硼替佐米联用组蛋白去乙酰化酶抑制剂诱导血液肿瘤细胞凋亡的效率

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase, HDAC)抑制剂曲古菌素A (trichostatin A, TSA)、Apicidin与Bortezomib单药及联合应用对恶性血液病肿瘤细胞凋亡的影响.方法 应用200～2 000 nmol/L TSA、 Apicidin, 5～80 μmol/L Bortezomib分别处理恶性血液病肿瘤细胞株K562、 SHI-1、 Jurkat 24 h, 用流式细胞仪检测细胞凋亡.根据流式细胞术结果选取TSA 800 nmol/L,Apicidin 400 nmol/L分别与5～80 μmol/L Bortezomib联合作用于K562细胞,TSA 1 000 nmol/L, Apicidin 400 nmol/L分别与Bortezomib联合作用于SHI-1细胞,TSA 600 nmol/L, Apicidin 600 nmol/L分别与Bortezomib联合作用于Jurkat细胞.以上药物作用24 h后应用流式细胞仪检测细胞凋亡并绘制浓度-凋亡曲线.分别以Apicidin 200 nmol/L,Bortezomib 20 μmol/L及Apicidin 200 nmol/L 与Bortezomib 5 μmol/L联用作用于K562细胞24 h, 用Western blot检测 Bcl-XL蛋白的表达差异.结果 TSA、Apicidin、Bortezomib均可促进K562、Jurkat、SHI-1细胞凋亡.TSA、Apicidin分别与Bortezomib联用,可导致K562、SHI-1细胞系凋亡率的明显提高,而对 Jurkat 细胞系没有明显影响.Bcl-XL蛋白在Apicidin与Bortezomib联用24 h组较对照组及单一药物处理组表达水平明显下调.结论 小剂量Bortezomib联合TSA或Apicidin应用于K562、SHI-1细胞系,可以明显提高细胞凋亡率,此时,TSA、Apicidin用量较用单药时显著减少.     

实验性大鼠2型糖尿病心肌病模型的建立

目的 建立能够模拟人2型糖尿病心肌病的大鼠模型.方法 24只SD大鼠,随机分为对照组12只,模型组12只.模型组大鼠高糖高脂饲料喂养10周,分别在第4、8周末腹腔注射链脲佐菌素20 mg/kg.对照组大鼠普通饲料喂养10周,分别在第4、8周末腹腔注射等量的生理盐水.于实验的第10周末检测各组大鼠的糖化血红蛋白(GHb),空腹血糖(FBG)和血脂等血液生化指标.剖杀大鼠,组织切片,H-E染色观察大鼠心肌的形态学改变.结果 模型组大鼠GHb和FBG明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组大鼠比较,模型组大鼠总胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白升高;而高密度脂蛋白降低,差异有统计学意义(P＜0.05).H-E染色,模型组大鼠心肌细胞紊乱排列,细胞肥大,水样变性,形态杂乱扭曲.结论 高糖高脂喂食,链脲佐菌素小剂量多次腹腔注射,能够建立类似于人类的高血糖、高血脂症状的糖尿病心肌病大鼠模型.     

ＴＳＡ诱导ＭＣＦ-７细胞毒性过程中转录调节的实验研究

目的:研究制滴菌素(trichostatin A,TSA)诱导乳腺癌细胞株MCF-7的细胞毒性作用及基于该效应可能的转录调节基础.方法:采用MTT法观察不同浓度TSA对MCF-7细胞的抑制作用,Annexin-V/PI双染观察该梯度下的细胞凋亡情况,细胞周期分析检测不同时间段的周期变化,RT-PCR分析TSA处理前后ERaα、myc-c、P21、cyclin-D及Bcl-2基因的转录表达情况.结果:TSA对MCF-7细胞的抑制作用具有时间和剂量的依赖性,Annexin-V/PI双染分析显示在TSA处理48 h后,随其浓度的增加,细胞的凋亡率依次升高,0.5 μmol/L TSA作用,细胞凋亡率为33.82%;细胞周期分析检测显示在0.5 μmol/L TSA的作用下,MCF-7细胞出现周期阻滞.但未检测出细胞凋亡.RT-PCR分析显示除P21基因上调外,ERα、myc-c、cyclin-D及Bcl-2均下调,同朝着增殖抑制、周期阻滞及凋亡的方向进展.结论:TSA能诱导MCF-7细胞的细胞毒性作用,其机制可能与转录调节有关.     

体重因素对链脲佐菌素所致糖尿病大鼠模型的影响

目的:探索体重因素对STZ腹腔注射所致糖尿病大鼠模型成模率及死亡率的影响.方法:将60只大鼠按体重分成6组,按53m/kg的剂量腹腔注射链脲佐菌素(STZ),72h后观察其造模成功率及一般状态,1周后统计其成模率、死亡率.结果:体重为220～260g大鼠成模率高且死亡率低;体重低于200g大鼠成模率高但死亡率也较高;体重高于260g大鼠死亡率低但成模率也较低.结论:体重对糖尿病大鼠模型造模影响较大,过大或过小均不利于成模,造模时应掌握大鼠的体重及适当的剂量以提高成模率、减少死亡率.     

链脲佐菌素诱导SD和Wistar大鼠糖尿病模型的影响因素

目的 通过注射链脲佐菌素(STZ)制作SD和Wistar大鼠糖尿病模型,观察大鼠品系、给药剂量、给药次数对大鼠成模率、死亡率的影响,同时研究利用口服葡萄糖耐量试验(OGTT)判断大鼠糖尿病成模率的意义.方法 设置共同的正常对照组,①Wistar大鼠随机分为中剂量组(55 mg/kg)和高剂量组(65 ms/kg);②SD大鼠一次性腹腔注射吼(55 mg/kg),与①中的Wistar大鼠作对比;③SD大鼠随机分为一次给药组和两次给药组,注射剂量均为55 mg/kg,观察期间进行OGTT.结果 ①Wistar大鼠成模率和死亡率均高于SD大鼠;②采用SD大鼠、中剂量给药和两次给药的方式可提高成模率,并降低死亡率;③在有明确胰岛病理改变的模型组大鼠,其OGTY异常阳性率显著高于空腹血糖异常阳性率.结论 用STZ诱导糖尿病模型是一种稳定可靠的方法.Wistar大鼠成模率和死亡率均高于SD大鼠;选用中剂量给药及两次给药的方式可提高SD大鼠成模率,并降低死亡率,维持时间较长.在动物实验中OGTT比空腹血糖监测更有诊断意义,不易造成漏诊.