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51.
目的:金银花nrDNA ITS区序列G C含量为68%,用常规的PCR方法扩增效果差.本研究通过改变扩增程序及使用改性剂的方法显著提高了金银花nrDNA ITS区的扩增效率.方法:分别从金银花叶及药材中提取总DNA,通过优化扩增条件,对nrDNA ITS区进行扩增,并比较了两种优化方法的差别及适应性.方法1:提高变性温度至97℃;方法2:添加混合改性剂(DMSO 4%-甘油10%).结果:与方法1相比,方法2可降低变性温度5 ℃,升高退火温度9 ℃,降低镁离子浓度至0.5 mmol/L,降低Taq DNA聚合酶用量至0.1 U(30 μl体系),PCR产物量显著提高,且可消除植物DNA粗提物中杂质的干扰.结论:通过提高退火温度及添加改性剂可克服高G C含量金银花nrDNA ITS区序列扩增的困难,该方法的建立有助于解决植物来源DNA模板的PCR扩增问题. 相似文献
52.
目的 建立一种可靠、简便的非同位素PCR方法检测脆性X综合征的突变基因。方法 采用生物素标记的CGG寡核苷酸探针,检测通过PCR扩增的FMR-1基因中CGG三核苷酸重复序列数目。从而判断所检样品中FMR—1基因是否正常。结果 该法可检测出正常人及携带者的CGG重复拷贝数。结论 该方法可以简便、安全、可靠地检测FMR—1基因中(CGG)n重复拷贝数,从而确定为正常人或携带者,可作为临床上筛查脆性X综合征的首选方法。 相似文献
53.
用十六烷基-二甲基-乙基-溴化铵(CTAB)法快速高效地从样品中提取了可供分析的基因组DNA,经PCR扩增,鉴定了含有35S启动子和NOS终止子的转基因样品.该方法的灵敏度可达0.1%,并且具有很好的稳定性. 相似文献
54.
采用连续延伸PCR方法克隆到粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)漆酶基因,并将其克隆到表达载体pPIC9k,重组质粒经线性化、电激转化Pichia pastoris KM71,部分阳性克隆的PCR结果表明:漆酶基因已整合到巴斯德毕赤酵母染色体上,重组菌经甲醇诱导后3~5d产漆酶量最高,为2-3U/mL。 相似文献
55.
作者曾经体外实验证明,均聚寡脱氧胞嘧啶核苷酸片段(dC14)有抗病毒活性,现继续研究其在体内的作用。不给dC14的对照组小鼠,接种腹水瘤细胞后:100%发病和死亡,潜伏期为6d,存活期11d;给每只小鼠dC14 1.3~3.2 mg,发病率和死亡率降低至20%,疾病潜伏期和存活期推迟。在未经dC14处理的种瘤细胞和淋巴组织与经处理的淋巴组织中,多聚酶链反应(PCR)法都检测到病毒核酸,而正常小鼠中则无此种病毒核酸顺序。研究结果提示,dC14对小鼠SRS腹水瘤的发病和生长有抑制作用。此种抑制作用可能是通过抑制病毒基因的表达来实现的。 相似文献
56.
聚合酶链反应和噬菌体裂解试验监测鼠疫菌的应用比较研究 总被引:2,自引:1,他引:1
应用聚合酶链反应 (PL-PCR)技术和噬菌体裂解试验同时对 80株鼠疫菌 ,1株假结核株、 1株大肠杆菌埃希氏菌进行检测并作比较。结果显示经噬菌体裂解试验 82株菌均在 18~ 2 0 h显示出噬菌斑 ,而其中 2株聚合酶链反应为阴性 ,另 80株全部为鼠疫菌特异性扩增带 ,比较清晰、典型、稳定 ,它有助于鼠疫菌快速特异诊断 相似文献
57.
Specific and sensitive diagnosis of syphilis using a real-time PCR for Treponema pallidum 总被引:1,自引:0,他引:1
A. G. Koek S. M. Bruisten M. Dierdorp A. P. van Dam K. Templeton 《Clinical microbiology and infection》2006,12(12):1233-1236
A real-time PCR assay with a Taqman probe was developed that targeted the polA gene of Treponema pallidum. The test was validated using an analytical panel (n = 140) and a clinical panel of genital samples (n = 112) from patients attending a sexually transmitted infections clinic. High sensitivities and specificities of 94-100% were achieved using two real-time PCR platforms, the Rotor-Gene and the iCycler. The assay can be completed within 2 h, enabling reporting in <8 h. This fast and robust assay is suitable for implementation in routine laboratories for diagnosing primary syphilis. 相似文献
58.
HBV前C/C基因与绿色荧光蛋白基因融合表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达 总被引:2,自引:1,他引:1
目的 :构建含HBV前C C基因与绿色荧光蛋白基因的融合表达载体 ,并在真核细胞中表达。方法 :用PCR法扩增含 1.3倍HBVayw型全基因组真核表达载体pHBV1.3的前C C基因片断 ,应用含绿色荧光蛋白基因的真核表达质粒构建融合表达载体 ,采用脂质体介导方法将其转染到HEK2 93细胞 ,并用荧光显微镜及ELISA法检测融合蛋白的表达。结果 :经PCR及酶切鉴定 ,证实成功构建了含HBV前C C基因的真核表达重组体pEGFP -HB VC ,显微镜下观察及ELISA法证实在HEK2 93细胞中表达了相应融合蛋白。结论 :构建的重组表达载体能在真核细胞中表达目的蛋白与GFP的双功能融合蛋白 ,适合于针对HBV前C C区的相关研究。 相似文献
59.
实验性蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛兔海马组织中Bcl-2和Bax mRNA的表达 总被引:6,自引:2,他引:4
目的:探讨蛛网膜下腔出血(SAH)后脑血管痉挛(CVS)造成脑损伤的机制.方法:用反转录聚合酶链式反应(RT—PCB)技术检测兔SAH后CVS时海马组织Bcl—2和BaxmRNA的表达变化.结果:Bcl—2mBNA的表达水平在SAH组1d时即开始下降,3d时降至最低,持续至7d.SAH组海马组织中BaxmRNA的表达呈上升趋势,3d时达最高,7d时仍显著高于正常组.在假手术组海马组织内的Bcl—2和BaxmRNA的表达水平保持相对恒定.结论:Bcl—2和Bax可能参与了SAH后CVS所造成的海马神经元损伤过程。 相似文献
60.
外阴尖锐湿疣人乳头瘤病毒感染的检测与分型 总被引:2,自引:0,他引:2
张秀华 《菏泽医学专科学校学报》2004,16(3):14-15
目的 了解患外阴尖锐湿疣人乳头瘤病毒(HPV)6型和11型的感染情况及PCR方法对尖锐湿疣诊断与分型的临床意义。方法 采用PCR方法测定160例尖锐湿疣患病题组织或分泌物中HPV6/11型及HPVl6/18型的感染率。结果 HPV6/11型感染率为95%(152/160),HPVl6/18型感染率为5%(8/160),HPV6/11型 HPVl6/18型混合感染率为1.3%(2/160)。结论 外阴尖锐湿疣患以HPV6型和11型感染为主。PCR方法是一种比较适合临床HPV检测与分型的极为敏感和特异的诊断方法。 相似文献