小鼠CD^3＋TCRαβ^＋CD^—CD8^—胸腺细胞特性分析

目的：分析CD^3 TCRαβ^ CD^-CD8^-胸腺细胞的特性，推断其在胸腺发育中表型和功能的成熟过程。方法：分离纯化小鼠胸腺DN细胞，用多重染色的方法分析CD^3 TCRαβ^ CD^-CD8^-细胞的表型和TCR库，并与外周淋巴结的相应细胞进行对比。结果：DNA胸腺细胞为异质性细胞，包括CD3^-DN细胞和CD3^ DN细胞，而CD3^ DN细胞又分为CD^3 TCRαβ^ 和CD3^ TCRγδ^ 2个亚群。其中，CD^3 TCRαβ^ DN细胞体积较小，绝大部分细胞对可的松耐受，细胞中能与自身反应的Vβ^3 和Vβ11^ 细胞比例极低，表型较为成熟，与髓质型SP（single positive) 细胞相似。结论：CD^3 TCRαβ^ DN细胞不同于CD^3 TCRαβ^－DN细胞，是一个独特的细胞亚群，只有在经历表型和功能的进一步成熟才能迁出胸腺，移至外周。     

人腹主动脉瘤平滑肌细胞表型变化

目的:研究腹主动脉瘤(AAA)中血管平滑肌细胞(VSMC)表型改变,探讨其在AAA发病中的作用。方法:选取人体AAA、动脉闭塞性疾病(AOD)和正常腹主动脉(NA)组织,采用α-肌动蛋白(α-SMA)、结蛋白(desmin)及肌球蛋白重链3种表型(SM1、SM2和SMemb)单克隆抗体,利用免疫组化及电镜技术,检测VSMC收缩型与合成型。结果:AOD及NA中VSMC以收缩表型α-SMA、desmin、SM1和SM2表达为主,SMemb在AOD的表达较低,而在NA无表达。AAA中VSMC以合成表型SMemb为主,α-SMA、SM1和SM2明显低于AOD及NA,desmin不表达;其中破裂者的SMemb和SM2低于非破裂者。结论:VSMC表型变化参与腹主动脉壁损伤重构,促进AAA形成和发展。     

低氧对心脏成纤维细胞增殖细胞核抗原表达与表型的影响

目的:观察不同程度低氧对乳鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖细胞核抗原(PCNA)表达与表型的影响。方法:分离、纯化、培养乳鼠CFs, 随机分为3组:对照组、中度低氧组和重度低氧组, 以四唑盐(MTT)比色法检测细胞的增殖情况, 采用免疫组织化学的方法检测PCNA的表达情况, 电镜观察细胞的超微结构, 并采用激光共聚焦显微镜检测各组细胞内α-actin的表达情况。结果:中度低氧组MTT的490nm吸光度值(A_490nm)较对照组增加(18.4±25.0)%(P＜0.05), 而重度低氧组A490nm值较对照组降低(15.8±25.0)%(P＜0.05)。免疫组化结果显示:对照组CFs的PCNA有一定的基础表达, 核内阳性反应颗粒较少, 染色强度为(92.2±9.1)%AU, 中度低氧组CFs的PCNA染色强阳性, 可见密集的阳性反应颗粒, 染色强度为(128.0±11.4)%AU(P＜0.05vs对照组), 重度低氧组CFs核内无明显的阳性反应颗粒, 染色强度为(89.9±8.4)%AU。透射电镜下, 正常组CFs呈梭形, 胞浆内有丰富的粗面内质网和高尔基复合体, 线粒体和微丝的含量较少, 无基膜存在, 呈典型的成纤维细胞表型。中度低氧刺激72h, CFs粗面内质网明显减少, 胞浆内出现大量的微丝, 以质膜下分布最多, 呈现肌成纤维细胞表型。重度低氧组CFs内仅有少量的微丝。激光共聚焦显微镜显示, 对照组CFs内无明显的α-actin表达, 平均荧光值为1119.31±112.24。中度低氧组细胞内出现大量规则排列的成束的微丝, α-actin表达显著增加, 平均荧光值为1638.37±173.42(P＜0.05vs对照组)。重度低氧组细胞内α-actin表达较少, 平均荧光值为1227.52±228.33, 与对照组无显著差异。结论:中度低氧可使乳鼠CFsPCNA表达增加, 并且出现肌成纤维细胞的表型特点, 而重度低氧无此作用, 其具体机制尚待进一步研究。     

探讨儿童过敏性哮喘的若干问题

全球儿童哮喘发病率为8%~28%,中国儿童哮喘流行病学研究发现,有近1/3哮喘患儿未得到及时和准确诊断。早期预防、长期转归、风险因素,以及生物治疗方法等问题都是儿童哮喘研究关注的问题。     

幽门螺杆菌表型与胃粘膜炎性细胞浸润的关系

目的探讨幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）各表型与慢性胃炎的严重程度和慢性活动性胃炎的关系。方法经胃镜及组织学检查确诊为慢性胃炎115例。按中华医学会制定的标准确定Hp感染阳性85例,阴性30例。用免疫印迹法检测Hp细胞毒素相关蛋白（CagA）、空泡毒素（VacA）、尿素酶（Urease）及其亚型。用Updated Sydney System评价Hp相关性慢性胃炎中慢性炎症（CI）、多形核活动性（PA）组织学等级。结果①中重度CI组HP感染及128KDCagA、116KDCagA、95KDVacA、91KDVacA、30KDUreA表达比例显著高于轻度CI组（P〈0．05）;②无PA组HP感染及95KDVacA、91KDVacA和30KDUreA表达比例明显低于有PA组僻〈0．05）。结论①HP128KDCagA,116KDCagA,95KDVacA,91KDVacA、30KDUreA是引起和加重慢性胃炎的重要因子;（2）HP95KDVacA、91KDVacA、30KDUreA可能是胃粘膜炎症急性活动及炎性细胞侵润的诱导因子。     

不同剂量60Co γ射线对小鼠淋巴细胞及其调节性T细胞亚群的影响

目的 分析不同剂量照射对小鼠淋巴细胞及其调节性T细胞亚群数量和表型的影响。方法 用不同剂量⁶⁰Co γ射线全身照射小鼠,分离胸腺和脾脏中的淋巴细胞,计数各样本细胞数后利用流式细胞仪分析CD4+T细胞和CD4+FOXP3+CD25+Treg细胞亚群的比例。结果 小鼠受照后胸腺细胞和脾脏细胞呈剂量依赖性减少,在照后4 d降至最低(F=118.08、144.01,P<0.05)。较高剂量照射后,胸腺中Treg细胞数随时间逐渐减少,而脾脏中该细胞亚群逐渐恢复;较低剂量照射后,胸腺中Treg细胞数有所增加。与0 Gy组相比较,Treg细胞比例随剂量增加而增加(胸腺中F=5.16、89.44、3.01,P<0.05;脾脏中F=52.02、32.13、27.45,P<0.05)。结论 不同剂量引起淋巴细胞及其Treg细胞亚群的辐射响应不同,其中Treg细胞亚群对较高剂量照射具有显著的辐射抗性,而低剂量照射可能诱导Treg细胞成熟分化或迁移。此外,淋巴细胞及其亚群的不同时间效应,也表明淋巴细胞成熟分化规律的差异。     

缺氧增加肝癌细胞胚胎干细胞基因表达促进恶性转化

目的 研究缺氧对原发性肝癌恶性表型的影响及相关机制.方法 建立体内、外缺氧模型,比较缺氧对MHCC97H肝癌细胞成瘤和侵袭转移能力的影响,并通过检测细胞增殖周期,CD90、CD133标记的肝癌干细胞数量以及胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES)样基因Oct4,Nanog,Sox2等的表达分析缺氧对肝癌细胞生物学特性的影响.结果 缺氧促进MHCC97H肝癌细胞运动(t=2.792,P=0.023)、侵袭(t=7.624,P＜0.0001)、转移(x~2=5.507,P=0.031)潜能,并增加软琼脂集落形成(t=3.292,P=0.011)和裸鼠皮下成瘤率(x~2=8.571,P=0.015).在缺氧环境中,MHCC97H肝癌细胞增殖能力受到抑制,G1期细胞比例显著增加,Oct4,Nanog,Sox2等基因表达明显上调.结论 缺氧促进MHCC97H肝癌细胞成瘤和转移等恶件表型与获得胚胎干细胞样特征有关.     

网/腹膜乳斑的巨噬细胞表型与结直肠癌分期的关系

【摘要】 目的 探讨不同分期结直肠癌网/腹膜乳斑巨噬细胞的表型及作用。 方法 收集番禺中心医院普外科2011年1月至2012年12月不同分期结直肠癌患者网/腹膜乳斑标本60例及正常人网/腹膜乳斑标本10例。分离培养巨噬细胞,通过CD68免疫荧光染色、流式细胞术(FCM)鉴定网/腹膜乳斑巨噬细胞表型,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测网/腹膜乳斑巨噬细胞IL-10、IL-12的分泌情况。结果 对照组、T1-3期组网/腹膜乳斑M1型巨噬细胞数量明显高于T4期组(P均<0.01);T4期组M2型巨噬细胞数量则明显高于对照组及T1-3期组(P均<0.01)。网/腹膜M1型巨噬细胞与结直肠癌T分期呈负相关(P<0.01),而M2型巨噬细胞的表达则与结直肠癌T分期呈正相关(P<0.01)。各组不同时点网/腹膜乳斑巨噬细胞IL-10、IL-12的分泌有显著差异:对照组及T1-3期组IL-10均低于T4期组,而L-12则均高于T4期组(P均<0.05);乳斑巨噬细胞IL-12的分泌与结直肠癌T分期呈负相关(P均<0.01),而IL-10的分泌则与结直肠癌T分期呈正相关(P<0.01)。结直肠癌网/腹膜乳斑巨噬细胞表型与临床分期特别是浆膜是否受到肿瘤侵犯、淋巴结有否转移有关(P<0.05),而与肿瘤直径及分化程度无关(P>0.05)。 结论 网/腹膜乳斑巨噬细胞表型表达主要受浆膜是否受到肿瘤侵犯和淋巴结有否转移两方面因素影响;T1-3期结直肠癌患者,网/腹膜乳斑巨噬细胞以M1型为主,对肿瘤细胞起捕获和杀灭作用;T4期结直肠癌患者,网/腹膜乳斑巨噬细胞以M2型为主,对肿瘤生长起促进作用。     

中国家族性肌萎缩侧索硬化患者超氧化物歧化酶1基因突变与临床表型

目的 通过对43个中国家族性肌萎缩侧索硬化(FALS)家系先证者进行铜、锌超氧化物歧化酶(SOD)1基因突变检测,分析其与临床表型的关系,探讨中国FAIS患者SOD1基因的突变分布谱及其与临床表型之间的关联性.方法 采集2008-2011年确诊的43个FALS家系的临床资料.利用PCR技术和直接测序方法,检测先证者SOD1基因突变,进一步与临床表型做关联分析.结果 43个FALS家系均呈常染色体显性遗传,先证者男女比例为1∶0.6,起病年龄(48.1±11.8)岁,上肢起病23例,占53.5％,下肢起病18例,占41.9％,延髓部起病2例,占4.6％.在10例先证者中共发现9种SOD1突变类型,其中2种为未报道的新突变.9种突变类型中8种为错义突变,1种为缺失突变.SOD1基因突变总检出率为23.3％.结论 中国FALS患者SOD1基因突变类型由原来的11种增加到19种.具有SOD1突变的FALS患者以下运动神经元损害为主.大多数SOD1突变的临床表型在不同的家系甚至同一家系中变异均较大.