作为抗肿瘤药物靶向载体LDE的可行性研究

目的：观察LDE－ACM复合物对裸鼠胃癌SGC－7901,NKM－45细胞株皮下移植肿瘤的抑制作用,了解LDE作为抗肿瘤药物靶向载体的可行性。方法：采用密度梯度离心和SephadexG-50层析以主超声法制备LDE和LDE－ACM复合物,建立裸鼠胃癌皮下移植肿瘤模型,观察LDE－ACM对移植肿瘤的抑制作用。结果：LDE－ACM复合物可明显抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,与其他实验对照组比较,LDE－ACM组的瘤重明显减轻,抑瘤率产高,而外周白细胞计数无明显降低,结论：LDE－ACM复合物有较强的抑制肿瘤效应用副作用明显减轻;LDE作为抗肿瘤药物靶向载体是可行的。     

人巨细胞病毒先天性感染胎鼠大脑皮质钙调素基因mRNA表达的研究

目的 研究先天性人巨细胞病毒（HCMV）感染致脑损害后钙调素（calmodulin,CaM)基因mRNA表达的改变,以探讨先天性HCMV感染所致脑损害的机制。方法 选用10周龄Balb/c小鼠,雌雄小鼠腹腔内分别注射1.0ml、0.5ml、0.25ml HCMV后合笼交配以建立先天性HCMV中枢神经系统（CNS）感染小鼠模型,并以腹腔注射1.0ml 1640液鼠为对照。剖腹取21天胎龄小鼠大脑皮质,以自行设计的CaM cDNA编码区的一对引物与一条CaM特异性探针,分别用逆转录聚合酶链反应（RP－PCR）技术CaM mRNA相对含量,用原位杂交检测大脑皮质细胞内相应mRNA的表达及定位。结果 母鼠腹腔内接种HCMV量为1.0ml与0.5ml的临产胎鼠大脑皮质分离出相应病毒,病理学检查等确诊发现了侵袭性脑膜脑炎性病理改变,证实HCMV可以小鼠宫内传播至CNS。1.0ml组与0.5ml组胎鼠RT－PCR产物浓度明显高于0.25ml组及对照组,而1.0ml组与0.5ml组间亦有明显差异。电泳结果显示对照组与0.25ml组胎鼠未见阳性条带,而1.0ml组胎鼠特异性条带信号强于0.5ml胎鼠,仅略低于同组母鼠。原位杂交显示CaM mRNA不但出现在1.0ml组胎鼠大脑皮质大神经元胞核及胞浆内,在中小神经元及胶质细胞的胞核及胞浆亦有高密度表达,阳性细胞的突起中亦有弱信号存在。结论 本研究结果揭示先天性感染HCMV胎鼠大脑皮质内CaM mRNA表达量明显增加,且神经元及胶质细胞均有表达,并与感染剂量有依赖关系。提示CaM mRNA表达增高可直能直接参与了HCMV先天性感染脑损害的过程。     

人急性白血病淋巴细胞HSP70及 HSP70 mRNA的表达研究

目的：检测急性白血病病人血淋巴细胞热休克蛋白70（HSP70）及其mRNA的表达。方法：ELISA法检测HSP70,RT－PCR法检测HSP70 mRNA。结果：化疗前急性白血病病人淋巴细胞HSP70及mRNA明显低于正常人;而化疗后,急性白血病病人淋巴细胞HSP70及mRNA明显高于正常人（P＜0．01）,结论：HSP70与急性白血病癌细胞关系密切,对癌细胞起保护作用。     

胃癌中p16、Rb基因蛋白的表达及意义

目的 探讨p16、Rb基因蛋白的表达与胃癌的发生及临床病理参数的关系。方法 采用S－P免疫组化方法检测了80例胃癌及28例癌旁正常胃粘膜组织中p16和Rb蛋白的表达。结果 胃癌中p16、Rb蛋白表达阳性率（分别为58．8％和55．0％）显著低于癌旁正常胃粘膜（100％）（P＜0．01）,Rb蛋白中度阳性或强阳性胃癌p16蛋白中度阳性或强阳性表达率明显低于Rb蛋白阴性或弱阳性胃癌（P＜0．01）。p16蛋白在胃癌中的表达与肿瘤细胞分化程度、Lauren分型和淋巴结转移密切相关。结论 16、Rb蛋白表达的缺失与胃癌的发生密切相关,p16蛋白的表达可用于判断胃癌患者的预后,p16和Rb蛋白的表达相互抑制,呈明显的负相关。     

早期肝癌中端粒酶活化与细胞增殖相关性研究

目的：研究早期肝癌中端粒酶基因蛋白(hTRT)与细胞增殖核抗原（PCNA）表达及其相关性。方法：在20例早期肝癌中用原位杂交检测hTRT基因,免疫组化方法检测PCNA的表达。结果：hTRT阳性信号检出率80．0％,PCNA强阳性率为55．0％;癌中hTRT阳性信号、PCNA表达强度显著高于癌旁非癌组织（P＜0．05）;癌不则分化组中PCNA表达有显著差异（P＜0．05）;癌中hTRT阳性信号分布有模型和浆型两种形式,其分布形式、 信号强度均与PCNA阳性强度密切相关（P＜0．01）。结论;肝癌发生与细胞增殖密切相关。端粒酶活化是肝癌发生的早期事件,是肝细胞增生和恶性转化所必需,其检出结果对鉴别肿瘤恶变有重要意义。     

儿童抗生素的应用与尿微量蛋白的分析

对 2 0 7例支气管肺炎患儿排除肾脏疾病 ,并单独使用一种抗生素者随其用药情况分成青霉素类、头孢菌素类、氨基苷类和大环内酯类 4组。分别观察用药前及用药 7天后尿微量蛋白的变化。结果头孢菌素类抗生素使用后尿 THP值较使用前高 (分别为 36 .0 6 30± 2 8.70 78m g/ 2 4h及 32 .0 0 93± 2 3.145 3mg/ 2 4h) ,虽无统计学意义 ,仍应引起重视。氨基苷类抗生素使用后尿 β2 - MG(β2 微球蛋白 )、THP均高于使用前 ,有显著差异 (P<0 .0 5 )。用尿微量蛋白测定可以早期发现肾损害 ,可予以及时停药 ,及早治疗防止肾损伤的进展     

细胞周期凋节因子在原发和复发鼻咽癌的表达

[目的]探讨细胞周期调节因子在鼻咽癌复发中的作用。[方法]采用LsAB法同时检测69例患者原发和复发鼻咽癌组织中p53、MDM2、p21^ras和p21^WAF1蛋白的表达。[结果]复发癌与原发癌相比：阳性表达率方面,p53蛋白（78％和80％）或MDM2蛋白（84％或83％）很相近,p21^ras蛋白（73％和93％）或p21^WAF1蛋白（52％和84％）明显下降;高表达率方面,p53蛋白（42％和51％）很相近,MDM2蛋白（57％和32％）明显升高,p21^ras蛋白（16％和65％）或p21^WAF1蛋白（17％和46％）明显下降。其中,MDM2蛋白表达在复发癌明显升高主要见于复发间期＜34个月患者组（P＜0.05）,p21^ras蛋白和p21^WAF1蛋白表达水平在复发癌明显下降见于复发间期＜34个月和≥34个月患者组（均＜0.02以下）。[结论]原发鼻咽癌临床治愈后,p53蛋白和MDM2蛋白过度表达以及p21^WAF1蛋白低表达或不表达可能仍然对鼻咽癌的复发起重要作用;MDM2蛋白表达水平显著升高和p21^WAF1蛋白表达水平显著下降可能进一步加促鼻咽癌的复发过程。     

乙醇诱导的肝癌细胞HCC-9204凋亡及其与Bax和Bcl-2蛋白的关系

［杨连君,王文亮,司晓辉. 细胞与分子免疫学杂志,2001;17（4）：315-317］ 目的探讨乙醇对肝癌细胞凋亡的诱导作用及其与凋亡相关基因bax和bcl-2表达的关系. 方法用噻唑蓝(MTT)法检测浓度分别为20～100 mL·L-1的乙醇对肝癌细胞系HCC-9204的杀伤作用. 然后,用60 mL·L-1乙醇作用6 h诱导HCC-9204细胞凋亡. 以May-Grunwald-Giemsa (MGG)染色法、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法和流式细胞术分别分析凋亡细胞的形态学变化、DNA断裂情况和不同细胞周期的DNA含量变化. 用免疫细胞化学染色图像分析法,检测诱导凋亡前、后Bax和Bcl-2蛋白表达水平的变化. 结果随着乙醇浓度的增加,其对HCC-9204细胞的杀伤作用逐渐增强. 60 mL·L-1乙醇可使HCC-9204细胞发生明显的细胞凋亡的形态学变化,并且大部分细胞为TUNEL阳性着色.流式细胞术分析可见明显的亚二倍体凋亡峰. 诱导凋亡后的HCC-9204细胞Bax蛋白的表达水平明显增高,而Bcl-2在诱导凋亡前、后的HCC-9204细胞中均未见表达. 结论低浓度乙醇对肝癌细胞HCC-9204具有明显的凋亡诱导作用,其凋亡的发生与Bax蛋白表达水平的增高有关. (何扬举)     

脂质体介导下重组pcDNA3-hBMP3转染兔关节软骨细胞的条件

目的　探讨基因转移效率与 pc DNA3- h BMP3质粒及阳离子脂质体的浓度、转染时机以及细胞的种殖密度等因素的关系 ,以寻求最佳的基因转染条件 .方法　细胞密度按 2× 10 4· cm- 2 接种后 ,对细胞接种后即时、孵化 2 ,5和 7d进行转染效率研究 ;G418浓度每 m L DMEM分别含有 2 0 0 ,30 0 ,40 0 ,5 0 0和 6 0 0μg,探讨 G418对软骨细胞的杀伤作用 ;选择不同细胞接种密度、不同脂质体浓度和 pc DNA3- BMP3浓度 ,在细胞对数生长期且细胞融合至 70 %～ 80 %时开始做转染 ,各组软骨细胞爬片的原位杂交结果通过计算机图像分析 ,以其灰度值判定基因转染的效率 .结果　最佳期的转染时机为软骨细胞接种后在孵箱内放置 2 d转染 ,即在软骨细胞对数生长期内做转染 .G418对软骨细胞的最佳筛选浓度为 40 0 mg· L- 1 .最佳的细胞种植密度、pc DNA3- BMP3浓度和脂质体的量应分别为 2× 10 4· cm- 2 ,5 μL 和 10 μL.结论　通过本研究探索出脂质体介导下 pc DNA 3- BMP3转染兔关节软骨细胞的最佳条件 .