白三烯受体基因mRNA在慢性阻塞性肺疾病患者中的不同表达

目的:评价慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者的白三烯受体(LTs-R)基因的表达;对比LTs-R基因mRNA在COPD组和健康对照组之间表达水平的差异;研究COPD缓解期患者与急性发作期患者的LTs-R基因mRNA表达水平是否存在差异。方法:通过LT1-R和LT2-R特异性引物对59份试验者的血液标本,应用逆转录聚合酶链式反应(RT—PCR)技术检测LT1-R和LT2-R的表达。引入内参β-actin,应用电泳凝胶定位分析仪,1D凝胶分析软件,对比并定量分析LT1-R和LT2-R基因mRNA在COPD患者和对照健康者之间的表达差异,对所得数据进行统计学分析、处理和评价。结果:所有COPD患者的标本均检测到编码LT1-R和LT2-R基因的mRNA表达,且与正常组对比差异有显著性(P<0.05),但缓解期组与急性加重期组之间差异无显著性(P>0.05)。结论:LT1-R和LT2-R基因mRNA在COPD者外周血白细胞中表达水平显著增高;但缓解期组与急性加重期组患者的表达水平之间无明显差别。     

趋化因子受体CXCR4小分子干扰RNA表达载体的构建及表达

目的： 构建趋化因子受体CXCR4小分子干扰RNA（siRNA）表达载体，研究其对CXCR4基因表达的沉默效果，探索抗人免疫缺陷病毒-1 （HIV-1）治疗的新途径。方法： 根据软件设计针对CXCR4基因的siRNA序列，经退火成互补双链，克隆到Psilencer^M3.1-H1 neo载体中，经测序鉴定插入序列的正确性。转染MT₄细胞后，采用RT-PCR及流式细胞仪方法检测转染siRNA质粒的实验组、转染空载体的阴性对照组和空白细胞对照组间抑制基因表达情况。结果： PCR及琼脂糖凝胶电泳检测重组质粒Psilencer^M 3.1-H1- siRNA neo，有正确的特异性片段，DNA测序也证明具有正确序列；该载体转染MT₄细胞48 h后，能明显抑制CXCR4基因表达，其表达抑制率为70%，与空白对照组和阴性组比较差异有显著性（P<0.05）。结论： 成功构建趋化因子受体CXCR4的siRNA表达载体。     

Toll样受体-9在肾小球肾炎进展中的作用

目的：通过观察CpG-ODN对肾小球肾炎刺激后Toll样受体-9（TLR9）的变化,探讨TLR9在肾小球肾炎发生、发展中的变化及作用。方法：Wistar雄性大鼠,随机分为正常组（N组）、抗-thy1.1肾炎模型组（M组）、模型+CpG-ODN注射组（CpG组）、模型+GpC-ODN注射组（GpC组）。各组大鼠分别于用药后2、4、6和8周留取24 h尿;实验第8周留取24 h尿, 心脏采血、留取肾脏后处死。用考马斯亮蓝法检测24 h尿蛋白定量;血清学方法检测血清白蛋白和肾功能;肾脏组织用于肾脏病理检查、NF-κB p65免疫组化染色,RT-PCR法检测肾脏组织内TLR9、INF-γ及IL-6 mRNA的表达。结果：TLR9在M组轻度表达,在给予CpG-ODN刺激后,TLR9、IL-6和IFN-γ mRNA在肾脏表达率与M组比较均明显增加,24 h尿蛋白漏出量增多,血清白蛋白显著降低;光镜下可见病理改变明显加重,MCs弥漫性中、重度增生,部分肾小球有细胞性新月体形成,多处粘连,毛细血管襻开放受限,系膜区可见单核巨噬细胞浸润。结论：TLR9介导的趋化因子和趋化因子受体表达加重肾小球肾炎的生化及病理改变,TLR9介导的免疫反应是引起肾小球肾炎不断进展的机制之一。     

X线照射对大肠癌细胞株Lovo细胞TNFR-p55表达及释放的影响

目的 研究X线照射在体外培养人大肠癌细胞株LoVo后．其膜TNFR-p55表达及释放sTNFR-p55情况。方法免疫细胞化学检测细胞膜TNFR-p55蛋白的表达．EUSA法检测培养上清中sTNFR-p55水平,流式细胞仪分析细胞凋亡率,光镜观察细胞形态变化。结果x线照射后的细胞膜TNFR-p55蛋白表达显著增强（P〈0．01）;照射后大肠癌Lovo细胞上清sTNFRR-p55水平显著低于照射前sTNFRR-p55水平（P〈0．01）;光镜发现细胞体积缩小、变圆、胞浆浓缩、核固缩深染;流式细胞仪分析细胞凋亡率显著增高（P〈0．05）。结论x线可通过上调细胞膜TNFR-p55蛋白的表达,抑制其脱落释放sTNFRR-p55到上清中,诱导细胞凋亡增强照射肿瘤的杀伤作用。     

人GITR基因的克隆和序列分析

目的:克隆人GITR基因全长编码区的cDNA,同时对其序列进行分析.方法:采用RT-PCR方法,从正常人外周血单个核细胞获得GITR基因的cDNA,克隆至pGEM-T载体,选择阳性克隆并进行序列测定.结果:扩增得到的人GITR基因编码区cDNA的全长726 bp,编码241个氨基酸残基,与GeneBank注册的序列完全一致.结论:获得人类GITR基因的克隆,为进一步研究其生物学功能奠定了基础.     

芩珠凉血合剂对豚鼠银屑病模型管内皮生长因子及其受体表达的影响

目的：研究芩珠凉血合剂对豚鼠银屑病模型血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（VEGFR2）的影响,探讨其治疗寻常型银屑病的相关作用机制。方法：选择豚鼠32只,随机取8只为正常组;其余以5％心得安乳剂外涂耳部皮肤造模,使其产生银屑病样病理改变,并随机分为模型组、芩珠凉血合剂治疗组（治疗组）、复方氨肽素片对照组（对照组）,分别予蒸馏水或相应药物干预4周。检测治疗前后银屑病样皮损豚鼠血清VEGF水平、皮损组织中VEGF与VECFR2水平的变化,观察该变化与皮损表现的关系。结果：模型组豚鼠血清VEGF显著高于正常组。经药物干预治疗后,治疗组血清VEGF低于模型组和对照组,与正常组无统计学差异（P〉O．05）;而对照组与模型组无统计学意义（P〉0．05）,仍高于正常组（P〈0．05）。免疫组化切片经图像分析显示,模型组VEGF及其受体VEGFR2表达均高于其余3组。经治疗,两药物干预组豚鼠皮损处的VEGF表达仍高于正常组,且与模型组无统计学差异（P〉0．05）;但治疗组VEGFR2表达却有显著降低,与对照组和模型组有统计学差异（P〈0．05）。结论：芩珠凉血合剂能明显改善豚鼠银屑病样皮损,其作用机制可能与降低血清中VEGF水平和皮损处VEGFR2表达有关。     

人参总皂苷对造血细胞红细胞生成素受体表达的影响

目的研究人参总皂苷（TSPG）对脐血造血细胞（UCB）红细胞生成素受体（EPOR）表达的影响。方法以25、50、75和100mg／L TSPG刺激脐血单个核细胞24h，采用流式细胞仪检测细胞膜EPOR表达的变化；细胞Elisa实验检测细胞膜EPOR表达量的改变；免疫细胞化学观察细胞EPOR阳性率的变化。结果流式细胞仪检测显示50mg／L TSPG均能提高脐血细胞膜表面EPOR的表达；细胞Elisa实验结果显示50mg／L TSPG能够提高脐血造血细胞膜表面EPOR的表达量；免疫细胞化学观察显示TSPG 50mg／L组单个核细胞的EPOR表达阳性率较对照组显著增高（P〈O．01）。结论适当剂量（50mg／L）的TSPG可增强脐血单个核细胞膜表面EPOR的表达。     

2型糖尿病患者血清esRAGE水平及相关因素研究

目的 研究2型糖尿病(T2DM)患者血清内源性分泌型糖基化终产物受体(esRAGE)水平及其与相关因素的关系.方法 用酶联免疫法测定60例T2DM患者(其中30例并发颈动脉粥样硬化)和28名正常对照者血清esRAGE浓度,并检测其他临床指标.结果 T2DM并发颈动脉粥样硬化组血清esRAGE浓度较无颈动脉粥样硬化组及正常对照组显著降低,差异有高度统计学意义(P<0.01);T2DM无颈动脉粥样硬化组较正常对照组亦显著降低,差异有统计学意义(P<0.05).Pearson相关分析显示,esRAGE与年龄及代谢综合征的组成因素包括糖化血红蛋白、总胆固醇、低密度脂蛋白、收缩压、体质量指数成负相关(P<0.01).多元线性逐步回归分析显示,年龄、总胆固醇、糖化血红蛋白、体质量指数与esRAGE成独立负相关(P<0.05).结论 esRAGE可能是糖尿病动脉粥样硬化及代谢综合征的潜在保护因素.     

运动对高脂血症大鼠肝脏胰岛素受体底物-2表达的影响

目的观察高脂血症大鼠运动后肝脏胰岛素受体底物-2(IRS-2)的变化,探讨IRS-2在运动改善大鼠糖脂代谢中的作用。方法将26只Wistar大鼠分为正常对照组(9只)、高脂膳食组(9只)和高脂膳食 60 min运动组(运动组,8只)。测定各组大鼠肝脏IRS-2 mRNA及蛋白表达的变化。结果①高脂膳食组的三酰甘油(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)显著高于正常对照组和运动组(P值均<0.05),运动组的高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)显著高于高脂膳食组(P<0.05)。②高脂膳食组大鼠肝脏IRS-2 mRNA及蛋白表达水平显著低于正常对照组和运动组(P值分别<0.01、0.05)。结论高脂饮食在导致大鼠血糖、血脂代谢异常的同时,能降低大鼠肝脏IRS-2的表达,而运动能够增加大鼠肝脏IRS-2的表达,运动对血糖和血脂的改善作用可能与IRS-2的表达增加有关。     

吗啡对体外培养人子宫平滑肌细胞ER mRNA表达的影响

目的 研究吗啡对体外培养的人正常子宫平滑肌细胞雌激素受体信使核糖核酸(estrogen receptor mRNA,ERmRNA)表达的影响. 方法 体外培养人正常子宫平滑肌细胞,免疫细胞化学的方法进行鉴定,然后将培养细胞随机分为5组:空白对照组,1×10-7mol/L吗啡组,1×10-6mol/L吗啡组,1×10-5mol/L吗啡组,1×10-4mol/L吗啡组.通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定各实验组子宫平滑肌细胞ER mRNA的表达水平. 结果 不同浓度的吗啡组与对照组平滑肌细胞ER mRNA表达相比差异有统计学意义(P<0.05);在吗啡组平滑肌细胞ER mRNA的表达呈剂量依赖性降低,细胞mRNA表达量与吗啡浓度之间存在负相关. 结论 外源性阿片类药物吗啡可抑制平滑肌细胞雌激素受体ER mRNA的表达.