（＋）－布雷菲德菌素A的中间体合成研究Ⅲ．α、β－不饱和酯的合成

（＋）－布雷菲德菌素Ａ的重要中间体——α、β－不饱和酯（８）可以（１Ｒ，２Ｒ，２′Ｒ）－１－（１′－二甲叔丁硅氧基－２′－羟基乙基）－２－氰基环戊烷（７）为原料，经氧化和Ｗａｄｗｏｒｔｈ－Ｅｍｍｏｎｓ反应制得。     

早期应用某些抗菌素对照后小鼠小肠Ach和5-HT含量的影响

多年来在急性放射病实验治疗动物中观察到治疗组动物肠套叠发生率高于同剂量单纯照射动物。本实验观察了这种现象与应用抗菌素之间的关系。结果表明:照后早期腹腔注射青链霉素后小肠组织中Ach和5-HT含量改变与单纯照射组差别不大。早期口服新链霉素后小肠Ach含量变化也不大,但5-HT却有明显的再增高现象,这就有可能加重照后肠运动紊乱。因此,照后最好适当控制口服某些抗菌素并注意其临床表现。     

2型糖尿病大鼠心肌葡萄糖转运体4的变化及其对葡萄糖和脂肪酸代谢的影响

目的探讨2型糖尿病大鼠心肌葡萄糖转运体4(GLUT4)的表达与葡萄糖及其脂肪酸氧化代谢的关系,同时观察罗格列酮使用后上述指标的变化。方法24只SD雄性大鼠随机分为实验治疗组(6只)、实验对照组(6只)、正常治疗组(6只)和正常对照组(6只)。采用高脂喂养(40%脂肪、42%碳水化合物和18%蛋白质)4周及小剂量链脲佐菌素(35mg/kg)一次性腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型。实验治疗组和正常治疗组给予罗格列酮3mg·kg-1·d-1灌胃2周;各组大鼠进行30min等容离体心脏Langendorff灌注,灌注液含100μU胰岛素、5mmol/L葡萄糖、0.4mmol/L3H软脂酸,测定样本葡萄糖含量及3H2O计数,评估心肌葡萄糖和脂肪酸氧化率;Western印迹法检测心肌细胞膜GLUT4表达水平。结果与正常对照组比较,实验对照组大鼠心肌葡萄糖总氧化量明显较少[(55±6)μmol/g干重vs(69±6)μmol/g干重,P<0.01],葡萄糖氧化比例较少(18%vs25%),脂肪酸氧化率较高(82%vs75%);同时心肌细胞膜上GLUT4的表达量减少53%。与实验对照组比较,给予RSG的实验治疗组,心肌葡萄糖的氧化量较高为(64±6)μmol/g干重(P<0.05),葡萄糖和脂肪酸的氧化比例分别为24%和76%,GLUT4表达量也明显较大(92%vs47%,P<0.01)。结论心肌细胞膜上GLUT4表达减少可能是2型糖尿病心肌葡萄糖和脂肪酸氧化代谢改变的重要原因,罗格列酮通过增加GLUT4的表达,可以提高心肌葡萄糖氧化、降低脂肪酸氧化,这将有助于减轻糖尿病心肌细胞损伤,增强抗缺血的能力。     

抗伏马菌素B1单克隆抗体的制备和特性

目的建立敏感、特异和快速的针对伏马菌素B1(fumonisin B1, FB1)的酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay ,ELISA)检测方法,形成具有我国自主知识产权的快速检测试剂盒.方法利用B细胞杂交瘤技术,建立能分泌抗伏马菌素B1单克隆抗体的杂交瘤细胞株.结果用伏马菌素B1-牛血清白蛋白(FB1-BSA)偶联物免疫8～10周龄雌性BALB/c小鼠后,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0融合,经过3～4次亚克隆建立了1个稳定分泌抗伏马菌素B1毒素抗体的杂交瘤细胞株,命名为5A9.将杂交瘤细胞打入BALB/c小鼠腹腔,获得含抗伏马菌素B1毒素单克隆抗体的腹水,并将腹水用饱和硫酸铵法进行纯化,得到单克隆抗体.该单克隆抗体的Ig亚类为IgG1,腹水中抗体的滴度分别为2.56×106,参考工作浓度为3.2×105.纯化后抗体的IgG含量为10.4 g/L,亲和常数为8.3×10-8 mol/L.该抗体与其他结构类似物无交叉反应,具有较高的特异性.结论制备了具有高特异性和亲和力的抗伏马菌素B1单克隆抗体,初步形成了针对伏马菌素B1的ELISA检测试剂盒.     

Altered subcellular distribution of nucleolar protein fibrillarin by actinomycin D in HEp-2 cells

AIM: To study the effects of actinomycin D on subcellular distribution of nucleolar protein fibrillarin in HEp-2 (human esophageal epithelial type 2) cells, and molecular mechanisms for maintenance of fibrillarin in nucleolus.METHODS: Indirect immunofluorescence assay was employed to investigate subcellular distribution of nucleolarprotein fibrillarin and immunoblotting analysis was used to detect the total cellular amount of fibrillarin. RESULTS:Control cells with no drug treatment showed bright clumpy nucleolar staining, which indicated that fibrillarin decorated the nucleolus only. Treatment with actinomycin D caused dislocation of fibrillarin from nucleoli to nucleoplasm with numerous stained small nucleoplasmic entities. Immunoblotting showed that neither total cellular amount of fibrillarin nor the integrity of fibrillarin was changed upon the treatment. The dislocation of fibrillarin incells treated at a lower concentration (0.05 mg/L) of actinomycin D, was totally reversible after removal of the drug from the medium. However, this reversion was not observed at a high drug concentration (1 mg/L). CONCLUSION:Actinomycin D induced dislocation of fibrillarin from nucleoli to nucleoplasm in HEp-2 cells. The retention of fibrillarin within the nucleolus was related to active RNA synthesis.     

星形孢菌素诱导NG108—15细胞凋亡

目的：研究星形孢菌素是否能引起NG108—15细胞的凋亡及它对数种与凋亡相关基因蛋白表达水平的影响．方法：用相差显微镜、荧光显微镜和透射电镜观察形态学变化;琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯带;免疫印迹法检测凋亡相关基因蛋白的表达水平．结果：经星形孢菌素0．1μmol／L处理后NG108—15细胞呈典型的凋亡形态学变化．星形孢菌素处理后6h即出现DNA凋亡梯带,可持续至24h．Bax蛋白表达在星形孢菌素处理后6h开始上升,12h至最高峰,24h后下降．Bcl-2蛋白表达在星形孢菌素处理后3h明显上升,随后逐渐下降．星形孢菌素处理后6h可见caspase-3切割产物出现,但Cdk5蛋白的表达水平未见明显变化．p53蛋白表达在星形孢菌素处理12h后下降．结论：星形孢菌素诱导了NG108—15细胞的凋亡,可能与Bax蛋白表达的增加及caspase-3切割有关,而与p53和Cdk5无明显相关性．     

海洋小单孢菌来源的轻快菌素BFW523-3的体外抗肿瘤活性

目的考察轻快菌素B FW523-3的体外抗肿瘤活性。方法采用MTT比色分析法、流式细胞法和高内涵药物筛选的方法检测FW523-3对肿瘤细胞株细胞生长、细胞周期、肿瘤细胞骨架蛋白、线粒体膜电位的影响。结果FW523-3对肿瘤细胞株K562、L929的生长有明显抑制作用,IC50分别为500和400ng/ml。FW523-3处理后的K562肿瘤细胞阻滞在G0/G1期。FW523-3使L929肿瘤细胞的细胞核大小、细胞骨架纤维状肌动蛋白F-Actin量、线粒体膜电位明显减少。结论FW523-3有显著抗肿瘤活性。     

铜绿假单胞菌L型的诱导及其产绿脓菌素能力的研究

目的采用哌拉西林诱导铜绿假单胞菌变异为L型,并研究其L型产绿脓菌素的能力。方法采用平板纸片法和液体浓度梯度法,利用哌拉西林药物纸片诱导铜绿假单胞菌标准菌株变异为L型;通过绿脓菌素试验测定铜绿假单胞菌L型的绿脓菌素产生能力。结果铜绿假单胞菌L型可被哌拉西林诱导为L型,铜绿假单胞菌L型仍具有产生绿脓菌素的能力,但产生的速度较原菌慢且量少。结论铜绿假单胞菌L型为该菌存在的重要形式,其仍能产生绿脓菌素为其致病因素之一。     

2型糖尿病肾损伤大鼠模型的建立和肾脏CD34表达

目的观察高脂喂养联合低剂量链脲佐菌素(STZ)注射的SD大鼠2型糖尿病肾损伤模型的代谢特征及CD34的变化。方法4周龄雄性SD大鼠60只随机分为2组。正常对照组10只,普通饲料喂养;糖尿病模型组50只,高脂饲料喂养,即普通饲料中加入1O%猪油、10%葡萄糖、1%胆固醇、2%蛋黄粉、1%胆酸钠。喂养4周后尾静脉注射STZ(35mg/kg)。所有大鼠在STZ注射10d与30d时做灌胃葡萄糖耐量试验(OGTT)。放免法测定血清胰岛素,免疫组化染色观察肾脏CD34的阳性表达。结果糖尿病肾损伤大鼠空腹血糖(FBG)显著高于正常对照组(P<0.01),血糖值在注射完STZ后1～3个月比较稳定;24h尿蛋白从1个月后一直持续上升;空腹血清三酰甘油(TG)和游离脂肪酸(FFA)水平显著高于正常对照组(P<0.05);尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)显著高于正常对照组(P<0.01);在糖尿病肾损伤大鼠的肾脏中CD34出现高表达。结论高脂喂养联合低剂量STZ注射的糖尿病大鼠模型拟2型糖尿病肾病发生的主要病理生理过程,具有高血糖以及血脂异常和肾功能损伤等基本特征;肾损伤可能与CD34有关。