胃肠道间质瘤相关PDGFRA基因突变体功能的研究

目的 探讨胃肠道间质瘤中一个新的PDGFRA基因突变位点L839P在肿瘤发生发展中的恶性转化作用.方法 采用脂质体法,将重组质粒稳定转染中国仓鼠卵巢上皮细胞(CHO).应用Western blot法,检测PDGFRA蛋白的表达情况.应用细胞计数法,描绘细胞生长曲线;应用流式细胞仪榆测细胞周期及细胞凋亡,并观察稳转突变型重组质粒CHO细胞在裸鼠体内的成瘤性.将PDGFRA突变型与kit野生型重组质粒共同瞬时转染CHO细胞,用Western blot法检测kit蛋白的表达及其磷酸化状态.结果 阴性对照组、实验组及阳性对照组细胞中均有PDGFRA蛋白表达.实验组和阳性对照组较阴性对照组和空白对照组细胞生长速度加快;空白对照组、阴性对照组、实验组和阳性对照组处于增殖期的细胞比例分别为28.4%、24.5%、43.8%和40.9%,凋亡率分别为1.8%、1.9%、1.5%和1.6%.接种阳性对照组及实验组稳转细胞的裸鼠,3周后均见肿瘤生长.PDGFRA突变型质粒与kit野生型质粒共转染CHO细胞后,磷酸化kit蛋白表达明显增强.结论 PDGFRA基因L839P点突变为功能获得性突变,对正常细胞有较强的恶性转化作用,并口丁激活kit蛋白,导致肿瘤发生.     

生理学教学核心理念变革的探讨

医学教育改革更多的是热衷于授课形式和方法的改革,而忽视了真正能够渗透到教学各方面的教学理念的改革。结合对生理学教学目标的反思和“岗位胜任力”培养的需求,将生理学教学的核心理念总结为四个方面：“三观”要正,帮助学生树立平衡观、辩证观和整体观;“三基”要牢,培养学生掌握基本的知识架构体系、基本的知识获取能力、基本的操作技能;重视学以致用和强化人文素养。上述核心理念在教学实践中得到学生的广泛认可,临床医学专业学生对核心理念的评价明显高于护理专业。下一步教学改革的方向是在教学理念的指导下如何细化授课内容,以适应专业设置越来越细化的现状。     

肾盂癌的超声诊断及漏诊原因分析

目的 评估超声对肾盂癌的诊断价值,探讨漏诊原因。方法 回顾性分析经病理证实的肾盂移行细胞癌80例,比较超声和增强CT诊断的准确性,并分析漏诊病灶大小,是否合并其他肾脏疾病,是否同时患膀胱癌。结果 超声与增强CT对肾盂癌诊断的敏感性分别为67．5％（54180）与89．5％（60167）,增强CT诊断的敏感性明显高于超声,差异有统计学意义（P〈0．05）。超声提示肾盂占位的54例病灶长径平均为（4．63±3．80）cm,超声漏诊的26例病灶长径平均（2．67±1．46）cm,二者差异有统计学意义（P〈0．05）。漏诊病例中合并慢性肾功能不全、膀胱癌及肾盂积水者分别为6例、4例及6例,诊断为肾结石者7例。结论 超声对肾盂癌诊断的敏感性较增强CT低,但超声能够提示大部分肾盂占位,可作为筛查肾盂癌的方法。当病灶小或合并肾结石,慢性肾功能不全及膀胱癌时容易漏诊,因此对无痛性肉眼血尿患者,超声检查如未探及肾脏肿块应建议其他影像学检查,以除外肾盂占位。     

PMI基因作为选择标记的植物表达载体构建及转化白花丹参体系的建立

目的：构建含有大肠杆菌6- 磷酸甘露糖异构酶（6-phosphomannose isomerase,PMI）基因并替换潮霉素抗性（hygromycin,hyg）基因的植物表达载体pCAMBIA1305-PMI,同时建立以PMI/甘露糖为筛选标记的白花丹参转基因体系。方法：首先从大肠杆菌Escherichia coli DH5α中克隆PMI基因,然后以PMI基因替换植物表达载体 pCAMBIA1305 中的hyg基因,构建了以PMI 基因为选择标记基因的植物表达载体pCAMBIA1305-PMI,并用电击转化方法导入根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens LBA4404 中,用叶片浸染法转化白花丹参。结果：在白花丹参MS+6-BA 1.5 mg·L^-1+NAA 0.1 mg·L^-1固体分化培养基中附加20 g·L^-1甘露糖和10 g·L^-1蔗糖为碳源的选择压力下,pCAMBIA1305-PMI 的转化率为23.7%,对再生植株用PCR检测证实了PMI基因的导入。结论：建立了以PMI-甘露糖为选择系统的白花丹参转基因体系,可应用于后续目的基因的转化奠定了基础。     

四叶参多糖对糖尿病大鼠血糖及免疫功能的影响

目的:研究四叶参多糖对糖尿病大鼠血糖及免疫功能的影响.方法:采用腹腔注射四氧嘧啶制备糖尿病大鼠模型.灌胃给予四叶参多糖(0.1,0.5 g·kg-1),于治疗0,7,14,21 d取大鼠尾血,用酶化学方法检测空腹血糖;分离胸腺、脾脏,计算胸腺指数和脾指数;MTT法检测淋巴细胞增殖能力,计算刺激指数(SI).结果:与正常对照组大鼠比较,模型组大鼠空腹血糖显著升高,3周后,胸腺极度萎缩(P＜0.01),脾淋巴细胞转化能力明显下降(P＜0.01).四叶参多糖治疗2周后,与模型组比较,大鼠空腹血糖显著降低(P＜0.05),连续治疗3周,胸腺指数显著提高(P<0.05,P＜0.01);高剂量组大鼠脾淋巴细胞转化能力增强,刺激指数明显升高(P＜0.05).结论:四叶参多糖可降低糖尿病大鼠空腹血糖,并能改善其细胞免疫功能.     

治未病调理脾胃干预亚健康状态

随着单纯生物医学模式发展为生物-心理-社会医学模式,"亚健康"状态得到更多关注。干预亚健康状态,减少慢性病发病率,提高健康水平,减轻医疗负担有着极其重要而深远的意义。"治未病"思想和"亚健康"联系紧密,符合从疾病医学到健康医学的模式转化,即从"治已病"到"治未病"的转化。"治未病"包含未病先防、扶正祛邪,见微知著、及早诊治,既病防变、防邪深入,病后调理、防止复发四个方面。脾胃与五脏六腑关系密切,且中土之气为人体"一气周流"的枢轴,从调理脾胃入手(生活方式调整、药物干预、环境改善)干预亚健康,可达到健康促进最终目标。     

酒萸肉提取物中莫诺苷、马钱苷含量变化的影响因素研究

目的 研究酒萸肉提取物中影响莫诺苷、马钱苷变化的因素.方法 以莫诺苷、马钱苷为指标,考察溶液pH、加热温度、加热时间、溶液中甲醇量对酒萸肉提取物中莫诺苷、马钱苷变化的影响.结果 溶液pH为1～4、加热温度大于80℃的条件下,加热时间越长莫诺苷增加越多,莫诺苷最多增加45%,溶液中甲醇质量分数小于20%时,莫诺苷的量随甲醇的减少而增多,马钱苷在上述条件下无明显变化.结论 酒萸肉中含有可转化成莫诺苷的物质,溶液pH、加热温度、加热时间为促进此转化的主要影响因素,经过一定的条件转化后可使莫诺苷增加.     

灰树花提取物对脾虚小鼠腹腔巨噬细胞和脾细胞的影响

目的:探讨灰树花提取物对脾虚小鼠的免疫调节机制。方法:健康雄性清洁级昆明小鼠30只随机分为6组,即空白对照组、脾虚组、阳性对照组(香菇多糖,2 mg·kg-1)、灰树花提取物低剂量组(5 mg·kg-1),灰树花提取物中剂量组(10 mg·kg-1)、灰树花提取物高剂量组(20 mg·kg-1),每组5只,滤菌后ip 10 d,第11天处死动物。检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红、产生一氧化氮(NO)能力(Griess法),以及MTT法检测淋巴细胞转化率、自然杀伤细胞(NK细胞)杀伤活性。结果:高剂量灰树花提取物可明显提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红能力(P<0.05)和产生NO能力(P<0.01);高剂量灰树花提取物能明显提高小鼠脾脏B细胞增殖能力(P<0.01);中、高剂量灰树花提取物能明显提高小鼠脾脏T细胞增殖能力(P<0.05和P<0.01)灰树花提取物中、高剂量组小鼠脾脏NK细胞杀伤能力均明显高于脾虚组(P<0.01)。结论:灰树花提取物可以通过提高巨噬细胞吞噬能力和产生NO能力、以及淋巴细胞转化率、NK细胞杀伤活性的途径提高脾虚小鼠的免疫功能。     

根癌农杆菌对云南红豆杉原生质体的转化

本文介绍了根癌农杆菌T—DNA对云南红豆杉原生质体的转化，分析了转化系的紫杉醇合成能力。实验以生长20d的云南红豆杉幼茎诱导的淡黄色愈伤组织为材料，经酶解可分离出大量有活力的原生质体。在由B5无机盐、KM有机成分、3．0mg／L2，4-D、0．1mg／LKT和0．45mol／L果糖组成的培养基中培养1周后，原生质体再生细胞持续分裂形成细胞团。根癌农杆菌对原生质体的转化能力与原生质体生长状态及菌株相关。虽然刚分离的或已再生细胞壁的原生质体不能被根癌农杆菌转化，但由10个以上细胞组成的原生质体克隆和根癌农杆菌B6S3菌株共培养后可实现T—DNA转化，高压纸电泳检测转化系具有冠瘿碱的合成，转化率约为5％。HPLC证实转化系具有合成紫杉醇的能力，但不同转化系中紫杉醇含量变异很大，最高含量为0．076％，是对照愈伤组织的6倍，表明T—DNA的插入改变了培养细胞对紫杉醇的合成。获得的高产转化系细胞生长比对照低，但继代培养中其生长和紫杉醇积累基本保持稳定。尽管转化系合成紫杉醇能力远未达到商业化生产的要求，但研究通过T—DNA对原生质体的转化而实现插入诱变，可以为分离高产紫杉醇优良细胞系提供单细胞筛选系统。     

LC-TOF/MS快速鉴定女贞子4种环烯醚萜苷类化合物模拟清蒸品的化学成分

目的:通过LC-TOF/MS快速鉴定女贞子4种环烯醚萜苷类化合物(特女贞苷、新女贞苷、橄榄苦苷、女贞苷)模拟清蒸品的化学成分,探讨女贞子蒸制过程中环烯醚萜苷类成分的转化机制。方法:色谱条件为流动相乙腈(A)-0.1%甲酸溶液(B)梯度洗脱(0~5 min,7%~12%A;5~20 min,12%~25%A;20~30 min,25%~40%A;30~35 min,40%~100%A),流速0.2 m L·min-1,柱温25℃,进样量3μL,检测波长240 nm;质谱使用Agilent 6230型LC-TOF/MS联用系统,在ESI/MS正离子模式下采集数据。通过对照品定位、质谱数据及文献参照分析4种环烯醚萜苷类化合物模拟清蒸品的化学成分。结果:4种环烯醚萜苷类化合物模拟清蒸品中均检出了橄榄酸;特女贞苷模拟清蒸品中还检出红景天苷和2种特女贞苷异构体;新女贞苷模拟清蒸品中鉴定出了3,4-二羟基苯乙基-β-D-葡萄糖苷;橄榄苦苷和女贞苷模拟清蒸品中分别检出其各自的苷元羟基酪醇和酪醇。结论:女贞子中环烯醚萜苷类成分性质不稳定,加水、加热可使其水解生成次级苷或者苷元,特女贞苷在模拟炮制过程中可转化为其异构体。女贞子酒蒸后补肝肾药效增强与其环烯醚萜苷类成分水解密切相关。