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81.
根据编码人IgG1Fc(Fcγ1 )的基因序列 ,设计合成 1对与之相匹配的引物。采用RT PCR法 ,从正常人白细胞mRNA中扩增获得预期目的基因Fcγ1 70 0bp基因片段 ,成功构建PUC1 8 Fcγ1 70 0 重组克隆载体 ,酶切、酶谱分析与预期结果相符 ;DNA测序结果与GenBank报道一致。 相似文献
82.
目的 克隆人软骨来源形态发生蛋白-1(CDMP-1)成熟肽编码区的基因片段。方法 用异流氰酸胍一步法从人软骨组织和酶消化法原代培养的软骨细胞中分别抽提总RNA,利用RT-PCR方法扩增出人CDMP-1成熟区的基因片段(约1.0kbp),将所得基因片段插入pBluescript)质粒载体,重组质粒DNA,通过酶切分析和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果 从罗骨组织直接取到总RNA,其质量与从等重量软骨 相似文献
83.
84.
间歇性气囊挤压大鼠腿部对挤压部位和远端骨骼肌一氧化氮合酶mRNA表达的影响 总被引:6,自引:1,他引:5
目的:为了进一步了解间歇性气囊挤压法(Intermittent pneumatic compression, IPC)挤压大鼠腿部与一氧化氮(NO)的关系.方法:检测了大鼠骨骼肌中3种一氧化氮合酶(NOS)同工酶:神经型NOS(nNOS);诱导型NOS(iNOS)和内皮细胞型NOS(eNOS)mRNA在IPC作用后的表达变化.25只SD大鼠被随机分为3个模拟实验组和4个IPC实验组.每只鼠取右侧胫前肌(AT)和提睾肌(CM)作为正常对照.IPC组挤压0.5,1,和5h,及挤压5h加等待4h,模拟实验组除不挤压外,其他操作均与实验组相同,然后分离左侧AT和CM作为处理后样品.所有样品应用RT-PCR进行NOS mRNA测定.以样品中看家基因2,3-二羟基丙醛-3-磷酸脱氢酶(GAPHD)cDNA为内参,与NOS cDNA 共同扩增.PCR产物电泳条带密度用NIH图像分析软件定量,并以与正常对照的对比值作为变化比率.结果:在IPC作用0.5、1和5h后,eNOS mRNA显著上升,在AT中分别达到正常对照的1.2,1.8和2.6倍;在CM中分别达到1.2,1.8和2.7倍,而其他NOS,除5hIPC组的nNOS外,总体表现下调.在IPC作用1h加等待4h组中,eNOS mRNA回复至正常对照水平.结论:该结果证实了IPC产生的机械压力至少部分增加了血管壁的剪切压,使内皮细胞增加了NO产物的释放量,导致了挤压部位及远端肌肉的血管扩张和改善了微循环. 相似文献
85.
MUC1 粘蛋白基因表达在诊断乳腺癌隐性淋巴结转移中的临床运用 总被引:2,自引:0,他引:2
采用特异、敏感的RT-PCR技术,检测来自20例乳腺癌病人的108个HE染色阴性的腋窝淋巴结MUC1 mRNA的表达,结果MUC11 mRNA在108个HE染色阴性淋巴结中阳性检出率为66%。提示:这些淋巴结中存在肿瘤隐蔽淋巴结转移,这种转移可能是一个或数个肿瘤细胞的转移,以此来提高微转移诊断率,可指导术后治疗,延长患者生存期,结果表明:MUC11 mRNA的RT-PCR分析法可用于乳癌淋巴结微转 相似文献
86.
87.
88.
本项技术选取丁型肝炎病毒(HDV)RNA的非抗原编码区的相对保守区为靶序列,设计两对引物,进行巢式聚合酶链反应(PCR)扩增HDVRNA。血清及肝组织采用蛋白酶消化法提取RNA。结果发现98例各型病毒性肝炎血清中,HDV—M阳性组HDVRNA检出率为566%(30/53),HDV—M阴性组为89%(4/45)(P<001);HDAg或/及抗HDIgM阳性血清测定HDVRNA的阳性率为571%(28/49),抗HD阳性血清的阳性率为500%(2/4);9例HDV—M阳性肝组织测定HDVRNA阳性者6例,2例HDV—M阴性肝组织均阴性。本项技术是在分子水平上检测病毒核酸、操作简便、稳定、可靠、特异性高、重复性好,可以作为HDV血清学指标的佐证和补充,肝组织HDVRNA的测定可应用于回顾性研究,在临床病原诊断、抗病毒疗效判定、病毒复制、重叠感染等研究方面提供重要实验依据。 相似文献
89.
采用RTPCR 技术对CML 患者骨髓细胞14 d 的细胞集落群和部分14 d 或28 d 的单个细胞集落bcr/abl m RNA 表达进行分析。结果显示:所检测的骨髓细胞集落bcr/abl 基因的表达均呈阳性,即为CML 集落,与细胞遗传学分析结果一致。该方法为研究CML 造血前体细胞基因表达及其诊断、治疗监测提供了灵敏、有效的分析手段;并可作为研究CML 发病、治疗及筛选抗CML 药物较为理想的方法。 相似文献
90.
Zhou XF Deng YS Chie E Xue Q Zhong JH McLachlan EM Rush RA Xian CJ 《The European journal of neuroscience》1999,11(5):1711-1722
Injury to a peripheral nerve induces in the dorsal root ganglia (DRG) sprouting of sympathetic and peptidergic terminals around large-diameter sensory neurons that project in the damaged nerve. This pathological change may be implicated in the chronic pain syndromes seen in some patients with peripheral nerve injury. The mechanisms underlying the sprouting are not known. Using in situ hybridization and immunohistochemical techniques, we have now found that nerve growth factor (NGF) and neurotrophin-3 (NT3) synthesis is upregulated in satellite cells surrounding neurons in lesioned DRG as early as 48 h after nerve injury. This response lasts for at least 2 months. Quantitative analysis showed that the levels of mRNAs for NT3 and NGF increased in ipsilateral but not contralateral DRG after nerve injury. Noradrenergic sprouting around the axotomized neurons was associated with p75-immunoreactive satellite cells. Further, antibodies specific to NGF or NT3, delivered by an osmotic mini-pump to the DRG via the lesioned L5 spinal nerve, significantly reduced noradrenergic sprouting. These results implicate satellite cell-derived neurotrophins in the induction of sympathetic sprouting following peripheral nerve injury. 相似文献