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目的 根据parC基因序列差异建立一种解脲支原体基因分型方法,以实现其两个生物型Uu(Ureaplasma urealyticum)和Up(Ureaplasma parvum)的快速鉴定,便于临床常规应用.方法 依据解脲支原体14个血清型标准株parC基因序列,设计可区分Uu和Up的特异性引物与和探针;通过检测serovarl和serovat4标准株、50份解脲支原体临床分离株(Uu 12株,Up38株),7种阴道常见分离菌以鉴定该方法的特异性;留取70例性病门诊非淋球菌性泌尿生殖道炎症患者和71例妇科正常体检者的标本,分别进行解脲支原体培养和基因分型鉴定,以比较两种方法的敏感性,并应用统计学分析Uu、Up在性病和正常人群中分布的差异.结果 应用parC基因分型法成功将serovar1标准株、serovat4标准株、Uu和Up临床分离株鉴别,Uu、Up两生物群之间以及7种阴道常见菌均未出现非特异性扩增;基因分型方法的敏感性显著高于培养法(P<0.05);在70例性病门诊患者中,Uu和Up的检出率分别为8.57%和61.40%,两者混合感染为24.30%;在71例妇科体检人群中Uu和Up检出率分别为7.04%和67.60%,两者混合感染为8.45%,性病门诊病人中解脲支原体感染率显著高于体检人群(P<0.05),Uu和Up单纯感染在两群体中的分布差异无统计学意义(P>0.05),而混合感染在性病门诊病人中显著增加(P<0.05).结论 解脲支原体在性病患者中的感染率显著高于健康体检者,且混合感染在性病患者中明显增加,而Uu和Up单纯感染在两人群中分布差异无统计学意义,因此解脲支原体的致病可能与其不同基因型的混合感染有关. 相似文献
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目的分析宁波地区淋病奈瑟菌临床菌株gyrA和parC基因喹诺酮耐药决定区(QRDR)突变类型及与喹诺酮类药物耐药的相关性。方法采用琼脂稀释法检测137株淋病奈瑟菌临床菌株对6种抗生素的最小抑菌浓度(MIC),PCR法扩增50株环丙沙星耐药的淋病奈瑟菌临床菌株gyrA和parC基因喹诺酮耐药决定区,并进行测序分析。结果 137株淋病奈瑟菌临床菌株对大观霉素、头孢曲松、四环素、青霉素、氧氟沙星和环丙沙星的耐药率分别为0、0、75.2%、76.6%、97.1%和100%。50株临床菌株测序发现,gyrA基因存在3种核苷酸序列发生错义突变,其中S91F突变发生在所有检测菌株,49株D95位发生突变;parC基因突变位点较多且相对比较分散,其中28株parC基因85、86、87、88和91位发生单位点突变,9株parC基因发生双重突变。结论青霉素、四环素、氧氟沙星和环丙沙星已不能作为治疗淋病的常规用药,大观霉素和头孢曲松仍可推荐用药。gyrA和parC基因突变在淋病奈瑟菌对喹诺酮类药物耐药中起重要作用。 相似文献
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目的对临床耐环丙沙星的鲍曼不动杆菌进行gyrA和parC基因突变模式的分子流行病学调查。方法采用E-test法测定环丙沙星对94株临床分离鲍曼不动杆菌的最低抑菌浓度(MIC);对鲍曼不动杆菌的gyrA和parC基因进行聚合酶链反应(PCR)-限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)分析及DNA测序。结果在94株鲍曼不动杆菌中,只有38株(40.43%)对环丙沙星敏感(MIC≤1mg/L),而对环丙沙星的耐药率接近60%;PCR-RFLP分析结果表明,对环丙沙星耐药的56株菌都发生了gyrA和parC基因突变,且parC基因的突变率(87.50%)略高于gyrA基因(82.14%)。结论鲍曼不动杆菌对环丙沙星的耐药与gyrA和parC基因突变相关,其中parC基因突变的明显增长值得重视。 相似文献
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目的 对多重耐药克雷伯菌属中喹诺酮类耐药相关基因的分布和变异情况进行分析.方法 连续收集2010年2月至2012年3月南京医科大学附属淮安第一医院住院患者中分离的多重耐药克雷伯菌共20株,用分子鉴定法鉴定菌种,再用聚合酶链反应(PCR)法分析喹诺酮类药物作用靶位基因gyrA与parC,以及可移动遗传元件介导的喹诺酮类耐药基因(qnrA、qnrB、qnrS、qepA、aac (6 ′)-Ⅰ b-cr).结果 本组20株克雷伯菌中,19株为肺炎克雷伯菌,1株为变栖克雷伯菌.20株克雷伯菌均检测到gyrA和parC基因,其中gyrA基因突变率为55.0% (11/20),parC基因突变率为55.0%(11/20);aac(6′)-Ⅰ b-cr基因阳性率为50.0%(10/20),qnrA基因阳性率为5.0%(1/20),qnrB基因阳性率为15.0%(3/20).其中6号株与10号株的gyrA与parC基因均为新的变异型(美国GenBank 登录号分别为:JX123016、JX123017与JX144393、JX144394).结论 肺炎克雷伯菌中gyrA和parC基因同时为新的变异型属国内首次报道,该菌对喹诺酮类药物的耐药主要与喹诺酮类耐药决定区突变相关. 相似文献
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Development of a rapid assay for screening point mutations associated with quinolone resistance in the Pseudomonas aeruginosa parC gene 总被引:1,自引:0,他引:1
Takashi Deguchi Masayoshi Yamaha Masahiro Nakano Mitsuru Yasuda Yoshinori Nishino Satoshi Ishihara Yukimichi Kawada 《Journal of infection and chemotherapy》2000,6(1):26-29
To detect quinolone resistance-associated mutations within the Ser-80 and Glu-84 codons of the Pseudomonas aeruginosa parC gene, we developed a rapid and simple assay based on polymerase chain reaction (PCR) amplification of the region of the parC gene containing the mutation sites and digestion of the PCR products with a restriction enzyme. The mutations generating
alterations at Ser-80 and Glu-84 were detected as restriction fragment length polymorphisms of the PCR products digested with
HinfI. Among 22 clinical isolates tested by this assay, mutations at the Ser-80 and Glu-84 codons were detected in all 10 isolates
in which the presence of the mutations had been confirmed previously by DNA sequencing. This rapid and simple assay could
be a useful screening device for genetic alterations associated with resistance to quinolones in the P. aeruginosa parC gene.
Received: June 10, 1999 / Accepted: October 8, 1999 相似文献
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目的探讨嗜麦芽窄食单胞菌的DNA解旋酶和拓扑异构酶Ⅳ与氟喹诺酮类抗菌药物的耐药关系。方法选择氟喹诺酮类抗菌药物耐药且主动外排表型机制阴性的临床分离菌株19株和氟喹诺酮类抗菌药物敏感株10株,对其gyrA和parC的喹诺酮决定区域的基因进行PCR扩增,扩增产物进行测序,BLAST比对分析其氨基酸序列。采用SPSS软件进行统计学分析。结果 19株耐药菌的gyrA和parC基因各有7株菌核苷酸发生了碱基替换改变但均为同义突变,有2株菌在gyrA基因中124位氨基酸发生了突变由谷氨酸变为天冬氨酸(GAA→GAC),在氟喹诺酮类抗菌药物敏感组中也同样有1株发生同样的突变,两组比较差异无统计学意义(P〉0.05)。结论嗜麦芽窄食单胞菌对氟喹诺酮类抗菌药物耐药与主动外排泵、外膜的通透性降低有关,但与解旋酶和拓谱异构酶Ⅳ的靶位点改变无显著关系。 相似文献
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耐环丙沙星鲍氏不动杆菌的gyrA基因及parC基因突变分析 总被引:3,自引:2,他引:3
目的 研究本地区临床分离鲍氏不动杆菌环丙沙星耐药表型与DNA旋转酶A亚单位gyrA基因及拓扑异构酶Ⅳ parC基因突变的关系。方法收集28株耐药株及2株敏感株,通过PCR扩增其gyrA基因及parC基因,并对扩增产物进行限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)及DNA序列分析。结果敏感株的gyrA基因产物经HinfⅠ酶切后可产生两个片段,耐药株则产生1个片段;而parC基因产物经Hinf Ⅰ酶切后,敏感株及耐药株均产生两个片段;DNA测序显示,5株耐药株gyrA基因存在Ser83→Leu及Ala88→Thr突变,其中Ser83→Leu的突变是导致Hinf Ⅰ酶切位点消失的原因,而1株敏感株无突变;1株敏感株与1株耐药株的pcrC基因存在Ser108→Ile突变,另外14株耐药株存在多位点同义突变。结论与parC基因相比,gyrA基因突变是鲍氏不动杆菌对环丙沙星耐药的主要分子基础,环丙沙星的高水平耐药可能需要多种不同的突变。 相似文献
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目的 探讨大肠埃希菌靶位基因突变对喹诺酮类药物耐药的影响。方法 本研究分别用琼脂稀释法和K -B纸片扩散法药敏试验检测了 80株致泌尿系感染的大肠埃希菌环丙沙星MIC的分布和对四种喹诺酮类药物的敏感性 ;PCR扩增大肠埃希菌的gyrA和 parC基因的QRDR区 ,分别对其进行限制性内切酶酶切分析和SSCP分析 ,以检测药物靶位基因可能存在的突变。结果 80株致泌尿系感染的大肠埃希菌中有 4 7株对环丙沙星耐药 ,耐药率达 5 8.75 % ,2 0株对环丙沙星敏感的菌株 gyrA基因QRDR区未发生改变 ,而 13株敏感株和 4 7株耐药株gyrA 2 4 7bp位点处均存在突变 ,且这 13株对环丙沙星敏感的菌株均对萘啶酸耐药。 33株对环丙沙星敏感的菌株parCSSCP分析 ,均未存在突变。 结论 ① 80株致泌尿系感染的大肠埃希菌对环丙沙星的敏感性和对萘啶酸的敏感性存在明显差异 ;②gyrA基因是大肠埃希菌喹诺酮类药物的主要作用靶位。在某些菌株中 ,其 2 4 7位核苷酸位点的改变仅使细菌对环丙沙星的敏感性下降 ,parCQRDR区的突变使细菌的耐药程度增加。 相似文献
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目的 研究临床分离的耐氟喹诺酮类铜绿假单胞菌gyrA及parC基因突变情况。方法 测定临床分离的 5 5株铜绿假单胞菌MIC值 ,从中筛选出 1株敏感菌和 8株耐药菌 ,以标准敏感菌株ATCC2 785 3作为质控菌株。用聚合酶链反应 (PCR)扩增gyrA及parC基因的喹诺酮耐药决定区 (QR DR) ,扩增产物片段长度分别为 35 1bp、397bp。用限制性内切酶SacⅡ消化gyrAPCR产物 ,同时对上述 10株菌的gyrA及parC基因的喹诺酮决定区 (QRDR)进行PCR DNA直接测序分析。结果 有 8株耐菌株的gyrA基因在 83位 (ACC→ATC)有突变 ,导致氨基酸Thr→Ile的改变 ;有 3株高度耐药菌gyrA基因同时在 87位 (GAC→GGC)有突变 ,导致氨基酸Asp→Gly的改变 ;有 4株耐药菌株的parC基因在 87位有TCG→TTG突变 ,导致氨基酸由Ser→Leu的改变。同时具gy rA和parC突变MIC值是仅具gyrA突变菌株MIC值的 2~ 16倍。未发现parC突变单独存在。另外 ,有 6株耐药菌gyrA的 132位有CAC→CAT的突变 ;所有耐药菌株parC基因 115位有GCT→GCG的突变 ,该突变未引起氨基酸的改变。结论 gyrA83、87位突变及parC基因 87位突变都可引起铜绿假单胞菌对氟喹诺酮类药物产生耐药 ,但以gyrA基因 83位突变为主 ,合并gyrA基因 87位及parC基因 87位突变可增加耐药程度。 相似文献
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KATSUMI SHIGEMURA TOSHIRO SHIRAKAWA KAZUSHI TANAKA SOICHI ARAKAWA AKINOBU GOTOH MASATO FUJISAWA 《International journal of urology》2006,13(3):277-281
BACKGROUNDS: In fluoroquinolone-resistant Neisseria gonorrhoeae, the amino acid mutations in the fluoroquinolone-resistant determining region (QRDR) of the parC gene are an important factor. The aim of the present study was to develop a rapid detection method of a serine 88 to proline substitution in parC which we previously showed as having significantly higher fluoroquinolone minimal inhibitory concentrations (MIC) using the TaqMan discrimination system. METHODS: We extracted DNA from 90 urine or urethral swab samples obtained from male patients with urethritis caused by N. gonorrhoeae. After DNA extraction, they were subjected to real-time polymerase chain reaction (PCR) using a TaqMan discrimination system and compared with the results of conventional DNA sequencing. RESULTS: Of the 90 samples, the TaqMan technique result showed 13 samples that were classified as having a serine 88 to proline mutation in parC, and 77 samples that did not have a serine 88 to proline mutation in parC. The classifications of all samples completely corresponded to those determined by conventional DNA sequencing. We also found that N. gonorrhoeae with a serine 88 to proline mutation in parC have a significantly higher MIC to ciprofloxacin than that without a serine 88 to proline mutant in parC. CONCLUSIONS: The present genotyping method of real-time PCR using a TaqMan discrimination system could be applied to the rapid detection of a serine 88 to proline amino acid mutation in parC of N. gonorrhoeae. This point mutation is significant for the determination of fluoruquinolone resistance. This rapid detection system may lead to the prevention of use of noneffective antimicrobial agents and a decrease of resistant strains. 相似文献