酶免法检测乙肝表面抗原实验精密度研究

目的探讨酶免法检测HBsAg实验精密度的影响因素及实验精密度对检验结果的影响。方法检测卫生部临检中心0.5ng/ml质控血清,计算精密度;比较手工操作与全自动酶免分析仪法检测的精密度;检测不同效价的阳性血清,比较精密度,并作统计学分析。结果临界值附近的标本可能引起误判,手工操作与全自动酶免分析仪法检测实验精密度差异有统计学意义（t=4.72,P〈0.01）。结论实验精密度的高低对酶免法检测HBsAg实验存在影响,检验结果的判定应设置灰区并进行复检或进一步检测。     

乙肝病毒外膜大蛋白检测及在病毒复制诊断中的临床应用

目的探讨乙肝外膜大蛋白(HBV-LP)检测用于乙肝患者的临床诊断意义。方法采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测HBV-LP、电化学发光发检测病毒血清标志物,荧光定量聚合酶链式反应(PCR)方法对患者HBV DNA进行检测。结果乙肝病毒血清标志物相同模式患者血清中HBV-LP与HBV DNA检出率无显著差异(P>0.05);110例小三阳乙肝患者血清中HBV-LP HBeAg阳性检出率与HBV DNA阳性率差异无统计学意义,二者的检出一致率为78.18%;HBV-LP吸光度(OD值)与HBV DNA呈正相关关系(r=0.986)。结论在HBeAg阴性的乙肝患者中HBV-LP与HBV DNA有较高检出一致率,与HBV DNA有良好的正相关关系,HBV-LP可反映乙肝病毒复制水平。     

乙肝血清学两种常见模式与相应乙肝核酸定量及两种模式的危险性分析

目的 探讨乙肝血清学两种常见模式与相应乙肝核酸定量及两种模式的危险性.方法 分别采用酶联免疫吸附法（ELISA法）与实时荧光定量PCR法对60例乙肝患者的血清标志物与相应乙肝核酸定量检测,分别记为模式1与模式2.结果 ①两种模式阳性率与相应乙肝核酸阳性率差异均具有统计学意义（P＜0.05）,且模式1乙肝核酸阳性率与乙肝核酸载量对数值均明显大于模式2（P＜0.01）,但二者阳性检测率无统计学差异（P＞0.05）;②两种模式下HBsAg、HBeAg、HBcAb组合与HBsAb、HBeAb、HBcAb组合阳性检测率无统计学差异（P＞0.05）,但两种模式下HBsAg、HBeAb、HBcAb组合阳性检测率具有统计学差异（P＜0.05）;③模式1HBsAg、HBcAb组合与HBeAb阳性检测率均明显大于模式2（P＜0.05）,但两种模式下全阴性检测结果无统计学差异（P＞0.05）;④两种模式下HBsAg、HBeAb、HBcAb组合及HBsAb、HBeAb、HBcAb组合HBV DNA阳性率、HBV DNA含量与HBsAg、HBeAg、HBcAb组合相比,差异均具有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）.结论 实时荧光定量PCR法具有高敏感度与高特异度等特点,在乙肝早期诊断、传染性水平及病毒复制水平等方面具有十分重要的价值;HBV M阳性率与HBV DNA含量具有较好的相关性.     

动物血清替代人血清制备乙肝标志物室间质评物的初步研究

目的尝试制备以胎牛血清(FCS)替代人血清为基质的乙型肝炎病毒(HBV)标志物室间质评样本。方法以FCS作为基质稀释人血清HBV标志物高值样本制备室间质评样本,并对制备样本进行基质效应和互换性实验、均匀性和稳定性评估及初步临床应用。结果使用两种检测方法验证制备样本的可互换性,检测值分布于95%可信区间内,相关性很好。雅培i1000全自动免疫分析仪检测HBV 5个项目[乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)、乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)]制备物结果的F值均F界值(F界值=3.02),保存于-20℃和4℃时可稳定1个月以上。20家使用化学发光法[ABBOTT i2000全自动免疫分析仪(简称ABBOTT i2000)]和20家使用酶免法(科华试剂)的实验室HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb的变异系数(CV)分别为ABBOTT i2000仪器组7.60%、7.79%、6.37%、13.30%、3.61%,科华试剂组11.67%、14.72%、9.11%、12.30%、9.75%。结论通过试验验证以FCS为基质制备的质评样本的互换性、稳定性和均匀性满足室间质评样本要求,初步认为FCS在一定程度上可以作为基质用于HBV标志物室间质评样本的制备。     

血清HBsAg和HBV DNA对慢性乙型肝炎肝组织病理状态的判别评价

目的构建基于血清HBsAg水平、HBV DNA载量、HBsAg/HBV DNA比值判别慢性乙型肝炎肝组织不同病理学分级和分期的Fisher判别函数,评价Fisher判别函数判别肝组织不同病理学分级和分期的效能。方法 472例经肝组织活检的慢性乙型肝炎患者入选本研究,其中HBeAg阳性279例,HBeAg阴性193例。血清HBsAg采用Abbott Architect I2000及其配套试剂检测,血清HBV DNA采用实时荧光定量PCR检测。统计分析采用SPSS 13.0软件。结果 HBeAg阳性患者血清HBsAg、HBV DNA与病理学分级和分期呈显著负相关（P〈0.05）;血清HBsAg/HBV DNA与病理学分级呈显著负相关（P〈0.01）,与病理学分期无显著相关性（P〉0.05）。HBeAg阴性患者血清HBsAg与病理学分级和分期均无显著相关性（P〉0.05）,血清HBV DNA、HBsAg/HBV DNA分别与病理学分级和分期呈显著正相关和负相关（P〈0.01）。根据Bayes逐步判别分析,HBeAg阳性和阴性患者符合判别不同病理学分级的模型纳入自变量标准的指标分别只有血清HBsAg和HBsAg/HBV DNA,符合判别不同病理学分期的模型纳入自变量标准的指标分别有血清HBsAg、HBV DNA和HBV DNA。判别HBeAg阳性患者不同病理学分级的Fisher判别函数判别G1、G2、G3的一致率分别为5.8%、51.1%、59.1%,判别HBeAg阴性患者不同病理学分级的Fisher判别函数判别G1、G2、G3的一致率分别为95.5%、0.0%、5.7%;判别HBeAg阳性患者不同病理学分期的Fisher判别函数判别S1、S2、S3、S4的一致率分别为36.4%、34.9%、21.6%、57.9%,判别HBeAg阴性患者不同病理学分期的Fisher判别函数判别S1、S2、S3、S4的一致率分别为86.7%、29.4%、0.0%、0.0%。结论基于血清HBsAg和基于血清HBsAg、HBV DNA的Fisher判别函数分别对HBeAg阳性患者肝组织病理学分级G3和分期S4有重要的判别价值;基于HBsAg/HBV DNA比值和基于血清HBV DNA的Fisher判别函数对HBeAg阴性患者肝组织病理学分级G1和分期S1有重要的判别价值。     

慢性乙型肝炎患者血清e抗原及病毒载量和肝损伤的相关性研究

目的观察慢性乙型肝炎(CHB)患者不同乙型肝炎e抗原(HBeAg)状态与HBV-DNA载量及肝脏损伤的关系。方法分别采用实时荧光定量PCR法及速率法对258例慢性乙型肝炎进行血清HBV-DNA定量和丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测。以ALT水平对肝脏损伤程度进行分型,对不同HBeAg状态、病毒载量、肝损伤程度进行分析。结果 HBeAg阴性组年龄大于HBeAg阳性组,其血清HBV-DNA载量低于HBeAg阳性组(P0.01),肝损伤程度两组比较差异无统计学意义(P0.05)。HBeAg阴性组随血清HBV-DNA载量增加,肝损伤程度明显升高(P0.05),HBeAg阳性组则无相关性。结论 HBeAg阳性是判断HBV复制的良好指标,HBeAg阳性CHB患者体内DNA载量与肝内炎症损伤无关。而HBeAg阴性CHB患者体内HBVDNA与肝脏损伤相关,应重视对HBeAg阴性患者的随访和治疗。     

慢性丙型肝炎患者中CD4+ CD25+ CD127-调节性 T 细胞的表达及意义

目的：探讨 CD4+ CD25+ CD127-调节性 T 细胞在慢性丙型肝炎（HCV）患者中的表达及其临床意义。方法收集 HCV 患者67例,并根据是否吸毒分为吸毒丙肝组35例和非吸毒丙肝组32例;健康体检人员32例作为对照。采用流式细胞仪检测患者外周血中 CD4+ CD25+ CD127-调节性 T 细胞的表达;应用实时荧光定量 PCR 的方法检测其HCV RNA 含量。结果慢性 HCV 患者中的吸毒感染组与非吸毒感染组的外周血中 CD4+ CD25+ CD127-调节性 T 细胞在 CD4+ T 细胞中所占比率分别为：3.84±1.95%、4.44±1.67%,明显低于对照组6.10±1.65%（ P <0.01）;而吸毒组与非吸毒组慢性 HCV 患者血液 CD4+ CD25+ CD127-调节性 T 细胞的表达值相比差异无统计学意义;HCV 患者抗病毒治疗前血液 CD4+ CD25+ CD127-调节性 T 细胞的表达值明显低于治疗后和正常对照组（ P <0.01）。结论 HCV 患者治疗前患者外周血 CD4+ CD25+ CD127-调节性 T 细胞的表达值较正常对照组明显降低,而在治疗有效后升高,说明CD4+ CD25+ CD127-调节性 T 细胞参与了 HCV 患者的机体免疫过程,而 CD4+ CD25+ CD127-调节性 T 细胞在外周血中的表达水平可能成为监测 HCV 患者体内细胞免疫状态和机体抗病毒免疫应答的指标。     

以合成肽作抗原的酶联免疫吸附法诊断戊型肝炎病毒感染

建立了用合成多肽抗原测定戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）抗体的酶联免疫吸附法。合成多肽Ｅ３３（ｃ）（２μｇ／ｍｌ）、Ｅ１５（Ｍ）（１μｇ／ｍｌ）混合包被，测定了４８份ＨＥＶ抗体阳性血清，阳性符合率为９５．８％。４１份阴性血清均为阴性。此方法灵敏度高、特异性强、简便快速，适合临床应用。     

TthDNA聚合酶在丙型肝炎病毒RNA检测中的应用

用ＴｔｈＤＮＡ聚合酶行逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增丙型肝炎病毒（ＨＶＣ）５’端非编码序列，对２６２例肝炎患者血清进行ＨＣＶＲＮＡ测定，结果ＨＣＶＲＮＡ阳性者５３例，阳性率２０．２％。凡阳性者用酶联免疫吸附法测其抗ＨＣＶＩｇＧ，其中３０例测到抗ＨＣＶ，阳性重叠率５６％（３０／５３）；ＨＣＶＲＮＡ阳性中的１５例同时用成髓细胞瘤病毒酶行传统逆转录。套式聚合酶链反应检测对照，１４例阳性，符合率达９３．３％（１４／１５）。ＴｔｈＤＮＡ聚合酶用于ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ５’端非编码序列片段具有敏感性高、特异性强、稳定性好的优点。     

人肝肾微粒体1抗原的提取及其抗体的检测

目的　进一步了解自身免疫性肝炎的致病机理。方法　测定肝功能异常患者的肝肾微粒体（ Ｌ Ｋ Ｍ）１ 的自身抗体阳性情况。在重组质粒表达的基础上,用亲和柱层析进一步纯化,采用免疫印迹法检测抗 Ｌ Ｋ Ｍ１ 抗体。结果　在６０５ 例丙氨酸氨基转移酶（ Ａ Ｌ Ｔ） 升高的成人患者组内,检出 Ｌ Ｋ Ｍ１ 自身抗体阳性２４ 例,阳性率为３９７ ％ ,５０ 例 Ａ Ｌ Ｔ升高的小儿患者中检出阳性６ 例,占１２ ％ 。两组比较,差异有非常显著意义（ Ｐ＜ ００１） 。而５０ 名正常人及４０ 例丙型肝炎病毒（ Ｈ Ｃ Ｖ） Ｒ Ｎ Ａ 阳性的丙型肝炎患者中,无一发现 Ｌ Ｋ Ｍ１ 自身抗体阳性。结论　 Ｌ Ｋ Ｍ１ 自身抗体可作为自身免疫性肝炎（ Ａ Ｉ Ｈ）的一项重要检测指标。