骨髓间充质干细胞治疗慢性移植物抗宿主病后患者外周血T细胞受体Vβ亚家族谱系变化研究

 目的　研究输注骨髓间充质干细胞（MSC）治疗慢性移植物抗宿主病（cGVHD）后患者外周血T细胞受体（TCR）Vβ基因谱系变化及克隆性增殖情况。方法　1例经异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后发生cGVHD的患者接受MSC治疗,分别于第1次输注MSC后第1、5天及第2次输注MSC后第1、10、20天采集外周血,同时将输注的MSC作为对照,利用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法扩增单个核细胞中24个TCR Vβ基因的互补决定区3（CDR3）,PCR 产物经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度,从而确定T细胞的克隆性。结果　患者输注的MSC不表达全部TCR Vβ亚家族,第1次输注MSC后第1天也未发现TCR Vβ亚家族的表达,随后的时间点分别出现了3、10、14、10个Vβ亚家族的克隆增殖T细胞,增殖形式以寡克隆、多克隆为主;临床判断cGVHD表现减轻。结论　MSC对allo-HSCT后患者免疫功能的恢复有一定作用,并能减轻cGVHD效应;TCR Vβ亚家族谱系分析提示有部分优势表达。     

Sp1在 NK／T 细胞淋巴瘤细胞株中的表达及其对细胞侵袭的影响

目的：观察转录因子 Sp1在 NK／T 细胞淋巴瘤（NK／TCL）细胞株中的表达及其对细胞侵袭的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）、免疫荧光和 Western blot 法测定 NK／TCL 细胞株 SNK-1、SNK-6和健康人 NK 细胞中 Sp1的表达;采用 Sp1抑制剂光神霉素 A（MIT）作用于 NK／TCL细胞株后,用实时荧光定量 PCR 和 Western blot 法检测 Sp1、胰岛素样生长因子1受体（IGF-1R）和基质金属蛋白酶2（MMP-2）的表达;采用 Transwell 实验观察 MIT 对细胞侵袭力的影响。结果 NK／TCL 细胞株SNK-1、SNK-6中 Sp1基因和蛋白高表达。其中基因的表达水平分别是健康人 NK 细胞的（9.4±0.3）倍和（10.6±0.3）倍（P＝0.0052,P＝0.0037）,蛋白的表达水平分别是健康人 NK 细胞的（5.4±0.3）倍和（8.6±0.5）倍（P＝0.0083,P＝0.0069）。100 nmol／L MIT 抑制 Sp1后,与二甲基亚砜处理的对照组相比,细胞株中 IGF-1R 的基因表达量分别下降了（83.9±3.7）%和（65.8±4.2）%（P＝0.0082,P＝0.0097）,蛋白表达量分别下降了（51.5±7.1）%和（49.6±9.1）%（P＝0.0178,P＝0.0155）。100 nmol／L MIT 处理细胞后 SNK-1、SNK-6细胞的侵袭率分别下降了（29.6±6.4）%和（37.2±7.6）%（P＝0.0418,P＝0.0372）,MMP-2蛋白表达量分别是对照组蛋白表达量的（52.7±4.7）%、（29.7±5.6）%（P＝0.0286,P＝0.0202）。结论 NK／TCL细胞株高表达 Sp1,其可能通过正调控 IGF-1R 增强 MMP-2的表达,进而提高 NK／TCL 细胞的侵袭力。     

卵巢早衰60例临床特征及自身免疫变化分析

目的了解卵巢早衰（Premature ovarian failure POF）患者的临床特征及自身免疫状况。探讨自身免疫异常在POF发生发展中的作用,为早期预测及临床治疗POF提供新途径。方法分析60例POF患者的临床特征。对POF患者（POF组）与70例健康育龄妇女（对照组）的临床数据进行比较。用酶联吸附实验测定两组性激素促卵泡生成素（FSH）,雌激素（E2）及血清中InIrA,InIrB水平。用流式细胞仪检测两组外周血CD4＋、CD8＋及CD4＋/CD8＋变化。结果POF组BIM大于对照组（P〈0.05）,POF组子宫及卵巢体积明显减小（P〈0.01）,POF组初潮年龄与对照组差别无统计学意义（P〉0.05）。POF组CD4＋低于对照组（P〈0.05）,CD8＋明显高于对照组（P〈0.01）,CD4＋/CD8＋明显降低（P〈0.01）,POF组血清抑制素A、BCInhA、B下降（P〈0.05）。通过线性相关性分析显示：CD4＋、CD4＋/CD8＋分别与E2呈正相关,CD8＋与E2呈负相关。结论遗传因素和自身免疫因素与POF的发病有关系,E2有免疫抑制作用,可抑制T细胞免疫应答,血清Ihn水平下降和外周血T淋巴细胞亚群的变化可做为早期预测POF的参考指标。     

脑肿瘤患者手术前后T细胞亚群及NK细胞活性的变化

目的 探讨脑肿瘤患者手术前后细胞免疫功能的变化及其临床意义。方法 采用单克隆抗体酶标法对22例脑肿瘤和12例脑内血肿患者手术前后不同时期的T细胞亚群及NK细胞活性进行动态监测。结果 脑肿瘤CD3^ 、CD4^ ,CD10^16 56和CD4^ /CD8^ 比值较对照组均有不同程度降低。而胶质瘤组较其余两组明显下降。34例患者术后4期CD3^ ,CD4^ ,CD16 56^ 比值均发生变化。胶质瘤组在术后1至2周明显低于其余两组。术后3至4周才逐渐恢复至正常水平。结论 脑肿瘤患者细胞免疫功能被抑制。且恶性胶质瘤较良性肿瘤更为明显，手术应激能导致T细胞亚群及NK细胞活性变化。脑肿瘤切除术后细胞免疫功能呈现暂时抑制至逐渐恢复的过程。     

四君子汤联合肠内营养对胃癌手术患者T细胞亚群及营养状况影响的随机对照研究

目的：观察胃癌患者围手术期使用中药四君子汤联合肠内营养对T细胞亚群及营养状况的影响。方法：采用前瞻性、随机、单盲、对照研究，将59例胃癌手术患者随机分为对照组（n=20）、研究A组（n=21）和研究B组（n=18）。研究B组术后2～9d经鼻饲管给予中药四君子汤100ml，研究A、B组患者手术后第2天开始给予等热量、等氮肠内营养支持8d，对照组术后给予等热量、等氮肠外营养支持9d。术前1d，术后第1天和第10天分别检测T细胞亚群及血清白蛋白、前白蛋白、转铁蛋白等营养指标。结果：3组患者血清白蛋白、前白蛋白、转铁蛋白和CD3^＋、CD4^＋、CD4^-／CD8^-水平术后均较术前显著降低。术后第10天，应用肠内营养的A、B两研究组T细胞亚群及营养指标水平较使用肠外营养支持的对照组有不同程度的提高，且四君子汤辅助肠内营养的研究B组血清白蛋白、转铁蛋白和T细胞亚群水平均较单纯肠内营养的研究A组显著提高（P〈0.05）。结论：健脾益气中药四君子汤辅助的肠内营养能进一步改善和优化胃癌术后机体的细胞免疫功能及营养状况。     

Intestinal Mucosal Barrier Improvement with Prebiotics: Histological Evaluation of Longish Glucomannan Hydrolysates-Induced Innate T Lymphocyte Activities in Mice

Use of prebiotics is a growing topic in healthcare. A lightweight molecule and water-soluble fiber ingredient, longish glucomannan hydrolysates (LGH), has been developed to improve the intestinal mucosal barrier and confer gut health benefits. This study aims to investigate the implications of continuous LGH intervening in intestinal epithelium integrity and protective immunity against chemical dextran sodium sulfate (DSS)-induced colitis. Twelve male BALB/c mice were randomly arranged into four groups. The LGH/DSS group had results in bodyweight variance, epithelial cell density, and aberrancy score as good as the LGH group, and both were equivalent to the control group. LGH consumption effectively protects the distal intestinal epithelium by activating innate T lymphocytes. Meanwhile, T-cell subsets in subepithelial interspersion take a bystander role in these microenvironmental alterations. Under this stress, the cluster of differentiation 3 (CD3)⁺ T cells infiltrate the epithelium, while CD4⁺ T cells inversely appear in submucosal large lymphoid aggregates/isolated lymphoid follicles (ILFs) in which significant CD3⁺, CD4⁺, and CD8⁺ T-cell populations agglomerate. Moreover, forkhead box P3 (Foxp3) and interleukin 17 (IL-17) are observed in these ILFs. Agglomerated CD4⁺ T-cell lineages may have roles with proinflammatory T helper 17 cells and anti-inflammatory regulatory T cells in balancing responses to intraluminal antigens. Collectively, LGH administration may function in immune modulation to protect against DSS-induced inflammation.     

Cyr61基因在非特指外周T细胞淋巴瘤中的表达及意义

目的探讨富含半胱氨酸61(Cyr61)在非特指外周T细胞淋巴瘤中的表达及意义。方法应用实时荧光定量PCR和免疫组织化学技术分别检测非特指外周T细胞淋巴瘤中Cyr61mRNA及其蛋白水平的表达情况,用细胞核增殖相关抗原(Ki-67)单克隆抗体标记肿瘤细胞并计算细胞增殖指数,用SPSS10.0软件分析Cyr61表达与该肿瘤细胞增殖指数、临床特征及预后的关系。结果①20例非特指外周T细胞淋巴瘤中有17例(85.0%)Cyr61mRNA表达上调,15例(75.0%)肿瘤细胞CYR61蛋白表达阳性;②Cyr61表达与该肿瘤细胞增殖指数呈正相关(r=0.8,P=0.008);③Cyr61表达与该肿瘤的临床分期、B症状及血清乳酸脱氢酶(LDH)有关(P=0.026,P=0.006,P=0.010);④Cox多因素相关分析显示,年龄>60岁和Cyr61表达上调为预后不良因素(P=0.020和P=0.021)。结论Cyr61在非特指外周T细胞淋巴瘤中广泛表达,可能与该肿瘤的临床特征和预后有关。     

T细胞内抗原1在乳腺癌中的甲基化状态及与乳腺癌多层螺旋CT征象相关性研究

目的:探究T细胞内抗原1（T-cell intracellular antigen 1,TIA1）在乳腺癌组织中的表达和TIA1启动子区甲基化状态,并分析乳腺癌多层螺旋CT征象与TIA1甲基化状态之间的关系。方法:选取2019年2月至2020年3月浙江省台州市第一人民医院收治的50例乳腺癌患者,荧光定量PCR法检测所有...     

Expansion of CD3+CD8+PD1+ T lymphocytes and TCR repertoire diversity predict clinical responses to adoptive cell therapy in advanced gastric cancer

The adoptive cell therapy (ACT) and delivery of ex vivo activated cellular products, such as dendritic cells (DCs), NK cells, and T cells, have shown promise for the treatment of gastric cancer (GC). However, it is unknown which cells can improve patient survival. This study was focused on the antitumour activity of a subset of these cellular products and their relationships with clinical outcomes. Nineteen patients were enrolled at the Capital Medical University Cancer Center, Beijing Shijitan Hospital, from June 1, 2013, to May 30, 2016. CD8⁺PD1⁺ T-cell sorting was carried out using flow cytometry, and the T-cell receptor (TCR) repertoire during ex vivo expansion for 15 days was analyzed by next-generation sequencing. After 15 days of culture, the number of CD8⁺ T cells had increased significantly, and the number of CD4⁺ T cells had increased correspondingly. After ex vivo expansion, CD8⁺ T cells exhibited significantly enhanced expression of PD-1, LAG-3, and TIM-3 but not 4-1BB. Survival analysis showed that patients with a pro/pre value of CD8⁺PD-1⁺ T cells >2.4 had significantly favorable overall survival (OS) (median OS time, 248 days versus 96 days, P=0.02) and progression-free survival (PFS) (median PFS time, 183 days vs. 77 days, P=0.002). The sorted CD8⁺PD-1⁺ T cells displayed enhanced antitumor activity and increased IFN-γ secretion after coculture with autologous tumor cell lines. TCR repertoire diversity was decreased after ex vivo expansion, which decreased the Shannon index and increased the clonality value. The prognosis of patients was significantly improved and was associated with the extent of CD8⁺PD-1⁺ T-cell expansion. In summary, this study showed that after ex vivo expansion for 15 days, CD8⁺PD-1⁺ T cells could be identified as tumor-reactive cells in patients treated for GC. Changing TCR species can predict the extent of CD3⁺CD8⁺PD1⁺ T-cell growth and the effect of ACT treatment.     

水晶兰苷对破骨细胞生成的抑制作用

目的探讨巴戟天提取物水晶兰苷对破骨细胞生成的抑制作用。方法将RAW264.7细胞系接种于含有10%胎牛血清的杜贝克改良伊格尔培养基(DMEM)中,分为A组、B组、C组、D组,均加入核因子κB受体活化因子配体(RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF),B组、C组、D组分别加入水晶兰苷药液(浓度分别为10,20,50μmol/L),连续培养3 d。采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法测定不同浓度水晶兰苷药液对破骨细胞生成的毒性影响,采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法测定不同浓度水晶兰苷药液对破骨细胞生成的影响,采用实时荧光定量(RT-qPCR)法、蛋白质印迹(WB)法测定破骨细胞关键转录因子活化T细胞核因子1(NFATc1)的mRNA和蛋白表达水平。结果MTT结果显示,各组光密度值(OD值)均在1.25~1.28之间,组间无明显差异(P>0.05);B组、C组、D组TRAP染色细胞数分别为(87.88±8.52)个、(50.38±11.78)个、(25.88±7.81)个,均明显低于A组的(132.10±11.28)个(P<0.05),且在限定浓度范围内与剂量呈正相关;B组、C组、D组NFATc1的mRNA表达水平随水晶兰苷浓度的升高而降低,与A组比较,C组和D组有显著差异(P<0.05);WB试验结果与mRNA表达水平相符。结论水晶兰苷在体外试验中可能是通过降低NFATc1的表达水平来抑制破骨细胞的生成。