天蚕素 B-黄体生成素释放激素结合部位重组基因的构建及其抑癌功能的研究

目的构建天蚕素B-黄体生成素释放激素结合部位（CB-LHRH’）重组基因,探讨CB-LHRH’蛋白成为新型抗肿瘤靶向药物的可能性。方法设计并人工合成CB-LHRH’重组基因序列,应用昆虫细胞．杆状病毒表达系统表达目的蛋白并通过蛋白斑点印迹法鉴定,采用二甲氧唑黄（XTT）比色法检测不同剂量的目的蛋白对卵巢上皮性癌细胞株SKOV3（LHRH受体阴性）和子宫内膜癌细胞株HEC-1B（LHRH受体阳性）细胞的生长抑制率,并进行镜下形态观察。结果蛋白斑点印迹法检测结果显示,重组杆状病毒感染的Si9细胞裂解液呈现棕色,证实CB-LHRH’蛋白已表达。重组杆状病毒感染的昆虫细胞系Sf9细胞裂解液对SKOV3及HEC-1B细胞的生长抑制率,随作用时间的延长和剂量的增加而增加,SKOV3细胞的生长抑制率从（5.03±0.08）％增加至（53.24±1.22）％,HEC-1B细胞的生长抑制率从（5.13±0.37）％增加至（56.16±1.08）％。相同剂量的重组杆状病毒感染的St9细胞裂解液,作用相同时间,其对HEC-1B细胞的生长抑制率高于SKOV3细胞,差异有统计学意义（P〈0.01）。经重组杆状病毒感染的St9细胞裂解液作用后,镜下可见癌细胞出现明显改变甚至成片坏死崩解为无定形的颗粒状物质。结论CB-LHRH’蛋白可有效杀伤LHRH受体阳性的HEC-1B细胞,有望成为治疗表达LHRH受体的肿瘤的抗肿瘤靶向药物。     

Identification of a third evolutionarily conserved gene within the RAG locus and its RAG1-dependent and -independent regulation

Recombination-activating gene (RAG)1 and RAG2 encode T and B lymphocyte-specific endonucleases indispensable for rearrangements of antigen-receptor gene segments but also capable of causing deleterious chromosome rearrangements. The mechanisms regulating RAG expression and repression are not clear. Here we identify NWC, a third evolutionarily conserved gene within the RAG locus, and show that it is ubiquitously expressed, with the notable exception of RAG-nonexpressing immature and mature T and B lymphocytes because in lymphocytes it is regulated by the RAG1 promoter and transcribed as RAG1-NWC hybrid mRNA molecules. We also show that in all other cells NWC is controlled by the RAG2 intragenic promoter, which in immature and mature T and B lymphocytes is silent. The possible implications of these findings for understanding the activation and inactivation of RAG genes in lymphocytes and their repression in other cells are discussed.     

西南地区基因重组微生物研究生物安全管理的现状调查及对策研究

目的了解西南地区基因重组病原微生物的安全管理现状，并提出相对应的管理办法与措施。方法采用问卷调查的方式对西南地区内从事基因重组微生物研究的实验室从课题承担情况、实验室生物防护和管理情况、人员培训和教育情况等方面进行了抽样调查，对调查结果进行了分析。结果在各实验室，基因重组技术研究和应用范围广泛；有关生物安全的基础设施有待改善，实验室防护级别不够；生物安全规章制度执行力度还有待加强；人员培训有待规范化、制度化。结论应加强有关法规制度和管理体系的建设，注重对人员的宣传、培训和管理以及加强生物防护设施建设等。     

pcDNA3.1-HPV18E7重组基因的克隆

目的 从HPV18感染细胞中提取HPV18E7 DNA,构建pcDNA3．1-HPV18E7重组质粒。方法 应用PCR方法从HPV18感染细胞中扩增HPV18E7 DNA,并应用基因重组技术构建pcDNA3．1-HPV18E7重组质粒。结果 PCR扩增产物经电泳检测及测序鉴定证实为HPV18E7;基因重组产物经PCR鉴定及测序证实为pcDNA3．1-HPV18E7,成功构建了pcDNA3．1-HPV18E7重组质粒。结论 从受感染人体细胞中成功扩增出HPV18E7,并成功构建pcDNA3．1-HPV18E7重组质粒,为HPV基因疫苗的构建和治疗HPV感染相关肿瘤奠定了基础。     

细粒棘球蚴延伸因子-1重组蛋白对小鼠的免疫保护性研究

目的:探讨细粒棘球蚴(Eg)延伸因子(Eg.EF-1)重组蛋白对小鼠的免疫保护性及其作为候选疫苗的潜在价值。方法:ICR小鼠随机分为免疫组和佐剂对照组,每隔2周皮下免疫1次,在第3次免疫后2周,用Eg原头节进行攻击感染,感染后20周剖杀小鼠,检获Eg包囊,计算免疫保护力,并用酶联免疫吸附法测定血清中免疫球蛋白(Ig)G及其亚型和IgE水平。结果:与佐剂对照组比较,免疫组小鼠的免疫保护力为85.6%,血清IgG、IgG1、IgG2a水平显著性升高(P<0.05),IgG2b水平轻微降低(P>0.05),IgG3和IgE水平无明显变化。结论:rEg.EF-1重组蛋白能诱导小鼠产生一定的免疫保护力,是潜在的疫苗候选抗原分子。     

芽孢杆菌外毒素保护性抗原与上游强启动子穿梭载体的构建

目的 构建携带炭疽芽孢杆菌保护性抗原（PA）的两种穿梭载体与上游强启动子。方法 将解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶启动子克隆到载体pblueseript—sk（＋）上，构建载体pBLKSP；以A16R疫苗株（Tox＋，Cap-，弱毒株）DNA为模板，设计合成内外侧引物巢式PCR扩增获得保护性抗原（PA）的全基因，先克隆到载体pBLKSP，再将其和质粒PUB110重组构建成两种穿梭载体。结果 酶切鉴定显示所切下的片段大小均与预计相符。测序结果与文献报道序列及预计结果一致。结论 成功构建了带有强启动子的两种穿梭载体。为在无毒炭疽疫苗株中的高效表达和炭疽芽孢杆菌的分子疫苗研究奠定了基础。     

表达人JNK基因重组腺病毒的构建和鉴定

目的 制备表达人c-jun氨基末端激酶(JNK)复制缺陷型重组腺病毒.方法 将重组穿梭载体pAdTrack-CMV-WT-JNK线性化后,与pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5138,进行同源重组得到重组腺病毒载体.将重组腺病毒载体转染入包装细胞HEK293内制备复制缺陷型重组腺病毒,并经PCR及DNA测序鉴定.结果 JNK重组腺病毒载体能有效转染HEK293细胞并在细胞内成功包装,5 d后可以观察到绿色荧光蛋白(GFP)明显表达,搜集的病毒经过PCR扩增得到特定JNK基因片段并测序鉴定.动物实验证实构建的Ad-WT-JNK能有效在肝组织表达.结论 该研究成功构建了JNK重组腺病毒载体及相应重组腺病毒颗粒,为进一步研究JNK的作用及应用JNK进行相关疾病的基因治疗奠定了基础.     

Formation and stability of linear plasmids in a recombination deficient strain of yeast

Summary Natural termini from macronuclear DNA of the ciliated protozoans Tetrahymena thermophila and Oxytricha fallax can support telomere formation in yeast. However, plasmids carrying these ciliate termini are modified by the addition of DNA which hybridizes to the synthetic oligonucleotide poly [d(C-A)], a sequence which also hybridizes to terminal restriction fragments from yeast chromosomes but not to Tetrahymena or Oxytricha macronuclear DNAs. Thus, in yeast, the creation of new telomeres on ciliate termini involves the acquisition of yeast-specific terminal sequences presumably by either recombination or non-templated DNA synthesis. The RAD52 gene is required for the majority of yeast mitotic and meiotic recombination events. Moreover, the absence of an active RAD52 gene product results in high rates of chromosome loss. Here we demonstrate that terminal restriction fragments from Tetrahymena macronuclear ribosomal DNA (rDNA) support the formation of modified telomeres in a yeast strain carrying a defect in the RAD52 gene. Moreover, linear plasmids bearing these modified ciliate termini are stably propagated in rad52 ^– cells.     

非何杰金淋巴瘤免疫表型和基因型分析

用单克隆抗体免疫酶法和体外基因扩增聚合酶链反应(PCR)技术,研究了25例非何杰金淋巴瘤(NHL)免疫表型及其中8例免疫球蛋白和T细胞受体(TCR)基因重排的基因型。结果表明,表达B系细胞分化抗原者14例中,5例起源于前B细胞,9例起源于晚期成熟B细胞;表达T系细胞分化抗原者9例中,起源于幼稚或成熟胸腺细胞者各4例、普通胸腺细胞者1例。另有2例同时表达了T,B系细胞分化抗原。8例基因分析者中,4例表达B系和3例表达T系细胞分化抗原者分别检测到IgH和TCRγ基因克隆性重排,各有1例发生TCRγ和IgH基因系间交叉重排。1例表达T,B系细胞分化抗原者出现IgH基因重排和TCRδ基因缺失。讨论了非何杰金淋巴瘤免疫表型和基因重排分析的临床应用价值。