Detection of Ochratoxin a Using Molecular Beacons and Real-Time PCR Thermal Cycler

We developed a simple and cheap assay for quantitatively detecting ochratoxin A (OTA) in wine. A DNA aptamer available in literature was used as recognition probe in its molecular beacon form, i.e., with a fluorescence-quenching pair at the stem ends. Our aptabeacon could adopt a conformation allowing OTA binding, causing a fluorescence rise due to the increased distance between fluorophore and quencher. We used real-time PCR equipment for capturing the signal. With this assay, under optimized conditions, the entire process can be completed within 1 h. In addition, the proposed system exhibited a good selectivity for OTA against other mycotoxins (ochratoxin B and aflatoxin M1) and limited interference from aflatoxin B1 and patulin. A wide linear detection range (0.2–2000 µM) was achieved, with LOD = 13 nM, r = 0.9952, and R² = 0.9904. The aptabeacon was also applied to detect OTA in red wine spiked with the same dilution series. A linear correlation with a LOD = 19 nM, r = 0.9843, and R² = 0.9708 was observed, with recoveries in the range 63%–105%. Intra- and inter-day assays confirmed its reproducibility. The proposed biosensor, although still being finalized, might significantly facilitate the quantitative detection of OTA in wine samples, thus improving their quality control from a food safety perspective.     

经胸实时三维超声心动图评价不同程度缺血性二尖瓣反流患者的二尖瓣构型

目的应用经胸实时三维超声心动图定量评价不同反流程度的缺血性二尖瓣构型改变情况,并分析各参数与反流量的相关性,为临床治疗提供参考。方法收集缺血性二尖瓣反流的患者92例为病例组,根据反流程度分为轻度组(34例)、中度组(31例)、重度组(27例)3个亚组,同时选取40例健康者为对照组。各组均行常规超声心动图检查与经胸实时三维超声检查。二维超声参数包括:左室射血分数(LVEF)、左室舒张末期容积(LVEDV)、左室收缩末期容积(LVESV)、前后乳头肌分别到二尖瓣前瓣环之间的距离(APM-AMA、LPM-AMA)、乳头肌间距离(IPMD)。三维超声参数包括:瓣环前后径(DAP)、瓣环前外侧至后内侧直径(AL-PM)、非平面角度(NPA)、幕状区高度(HTent)、瓣环三维面积(A3D)、瓣环周长(AC)、前叶面积(A Ant)、后叶面积(A Post)、幕状区体积(VTent)。比较各组各参数之间的差异及相关性。结果轻度组LVEDV、LVESV、NPA均大于对照组,中、重度组IPMD、PPM-AMA、DAP、ALPM、AC、A3D、A Ant、A Post、HTent、VTent大于对照组,中、重度组LVEF小于对照组,重度组APM-AMA均大于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。VTent与EROA相关性最强(r=0.64,P<0.05),IPMD与VTent有较强的相关性(r=0.58,P<0.05)。结论经胸实时三维超声心动图可以评估不同反流程度的缺血性二尖瓣反流构型,中度及以上反流二尖瓣构型会发生明显改变,VTent与EROA相关性最强,IPMD与VTent有较强的相关性,该结果有益于外科对于IMR治疗策略的制定。     

检测蚊虫感染黄病毒属病毒Real-time PCR方法的建立

目的 建立SYBR Green Real-time PCR检测和筛选黄病毒属病毒方法. 方法 参照文献报道的通用引物,以JEV cDNA 和DEN cDNA为模板,建立RT-PCR和SYBR Green Real-time PCR,检测和筛选黄病毒属病毒,并比较两者的敏感性. 结果 此黄病毒属引物适合两种反应体系,SYBR Green Real-time PCR方法的敏感性是RT-PCR方法的100倍,最低检出病毒浓度为0.5×10-2 PFU/ml. 结论 建立的两种方法均可用于黄病毒属病毒检测,以SYBR Green Real-time PCR方法具有更高的敏感性,对于黄病毒属病毒初筛检测具有应用价值.     

实时定量PCR检测B细胞非霍奇金淋巴瘤患者外周血和骨髓IgH基因重排及临床意义

目的:检测B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)患者外周血和骨髓中IgH基因重排并探讨其在临床诊治中的应用。方法:利用SYBR GreenⅠ荧光染料,采用实时定量PCR方法,以IgH基因为标志,对B-NHL患者治疗后采集的15例外周血及10例骨髓的IgH基因重排进行定量分析。结果:15例外周血及10例骨髓均检测到IgH基因拷贝数,外周血和骨髓差异无统计学意义(P>0.05)。结论:实时定量PCR方法对外周血和骨髓中IgH基因重排定量分析,可以作为B-NHL鉴别诊断和随访微小残留病的辅助手段,并对判断疗效、预测复发有一定的临床意义。外周血和骨髓IgH基因拷贝数差异无统计学意义。     

人冠状病毒HCoV-HKU1和HCoV-NL63双重实时荧光RT-PCR检测方法的研究

目的建立一种快速、灵敏、高效的人冠状病毒HKU1(HCoV-HKU1)和NL63(HCoV-NL63)双重实时荧光RTPCR检测方法。方法根据GENBANK数据库中HCoV-HKU1和HCoV-NL63的基因序列,利用BIOEDIT5.0软件进行序列比对分析,选择基因组的保守序列,并借助引物设计生物信息学软件,设计筛选出一套针对HCoV-HKU1和HCoV-NL63双重实时荧光PCR扩增的引物。从特异性、最低检测限、重复性等方面进行评估,建立了HCoV-HKU1和HCoV-NL63双重实时荧光PCR检测方法。结果分别以HCoV-HKU1和HCoV-NL63质粒为模板,HCoV-HKU1和HCoV-NL63双重实时荧光PCR方法的最低检测量分别为4.96×102 copies/ml和4.96×102 copies/ml。该方法针对其他病原微生物及人类基因组无反应信号,特异性好。4个梯度稀释质粒样本的4次重复检测Ct值变异系数均5%,重复性好。结论 HCoV-HKU1和HCoV-NL63双重实时荧光RT-PCR方法准确性好、灵敏度高、稳定性好,在临床鉴别诊断和口岸冠状病毒的监测中具有很好的应用前景。     

基于改进的差分阈值法心脏远程监测的实时与回顾性分析

目的：观察基于改进的差分阈值法心脏远程监测记录仪对心电信号特征参数提取以及自动分析的准确率。方法：通过对8957例患者采用改进的差分阈值法确定心电信号波形参数的“心安宝”XAB-M3AG型远程心电监测记录仪检测,分析接受到的心电实时条图。结果：共接收心电实时数据46967条,其中手动发送9564条,定时发送25830条,自动发送11573条,异常者占自动发送的49.5%,其余多为活动中干扰所致。结论：基于改进的差分阈值法的提取算法复杂性较低,精确度较高,有很好的实时性,能够有效地实现心电信号实时监测。     

透析液电导率对肾纤维化终末期透析患者电解质平衡的重要性

目的：分析透析液中各主要离子对肾纤维化终末期透析患者的影响作用,探讨透析机对透析液电导率进行实时监测的意义。方法：通过对透析液系统的不同混合比例稀释进行监测,对透析机温度补偿系统进行检测。分析透析液浓度监测部分的工作原理及计算方法。结果：透析液温度补偿及电导度传感器均对血透机透析液电导率的精准性起到至关重要的作用。结论：通过分析、论述透析液中各离子对肾病透析患者的作用与影响,阐明透析液质量的重要性,以及透析机对透析液浓度进行实时监测的必要性。     

基于ZigBee技术的医疗设备使用状态无线监测系统的设计

目的：设计一个基于ZigBee技术的医疗设备使用状态无线监测系统,实现医疗设备使用状态的在线监测,为使用率统计提供一种新的方法。方法：建立医疗设备功耗与其使用状态的数学模型,通过数据采集终端实现医疗设备功耗数据的实时采集,采集的数据由ZigBee无线网络发送至服务器进行存储并结合所建模型进行统计分析。结果：通过对医院健瑞监护仪M8000和飞利浦V60呼吸机功耗进行测试,所测数据能够通过ZigBee无线网络实时准确的传输到服务器端;实验结果显示,所建模型有较好的适用性,使用时长统计精确度较高。结论：系统实现了医疗设备使用状态的在线监测,同时能够准确统计医疗设备使用时长,为医疗设备使用率统计提供准确的数据来源,对推动医院数字化发展具有重要作用。     

北京地区腹泻病患者致泻性大肠埃希菌感染类型及其流行特征

目的：了解北京地区腹泻人群中致泻性大肠埃希菌（DEC）毒力基因的分布及流行特征。方法对2012-2013年监测医院的腹泻患者粪便样本进行分离培养,再采用实时荧光PCR检测毒力基因。结果6370份粪便标本有253份阳性,共分离到DEC 262株,阳性检出率为4.0%（253/6370）,9份标本发现两种不同型别的DEC混合感染。肠致病性大肠埃希菌（EPEC）为42.8%,其中非典型EPEC占42.0%,典型EPEC占0.8%;肠产毒性大肠埃希菌（ETEC）为38.9%,其中耐热肠毒素基因st阳性占24.8%,不耐热型肠毒素基因lt阳性占9.9%,st和lt均阳性占4.2%;肠聚集性大肠埃希菌（EAEC）为15.3%;肠侵袭性大肠埃希菌（EIEC）为2.7%;检出1株产志贺毒素大肠埃希菌（STEC）,血清型为O26∶K60。ETEC感染具有明显的年龄分布特征;各型DEC全年均有检出,且呈季节性变化。结论北京地区腹泻病患者DEC感染类型以EPEC和ETEC为主,且EPEC分离株多为非典型,并存在混合感染,不同型别DEC感染具有年龄和季节性分布特征。     

天津地区2013年百日咳感染状况及分子流行病学特征分析

目的 了解2013年天津地区百日咳感染状况及分子流行病学特点.方法 选取天津地区监测点181例百日咳疑似病例作为研究对象,采集鼻咽拭子和血清标本,应用Real-time PCR检测百日咳鲍特菌双目标基因,同时采用ELISA检测其特异性百日咳毒素IgG(PT-IgG).30份百日咳DNA阳性标本应用PCR扩增菌毛蛋白2(FIM2)、菌毛蛋白3(FIM3)基因,并对PCR产物进行DNA测序分析.结果 148例百日咳病例Real-time PCR检测阳性率为68.24%;108例PT-IgG检测阳性率为55.56%.101例核酸阳性病例的病程中位数为11 d;60例PT-IgG阳性病例的病程M为21 d.<1岁病例的Real-time PCR检测阳性率为84.28%,与其他年龄段阳性率比较差异有统计学意义.30份标本百日咳鲍特菌基因核苷酸同源性为99.6%～100.0%,与GenBank中国际标准株TohamaI、中国疫苗株同源性为99%.结论 2013年天津地区流行的百日咳鲍特菌与国际标准株及中国疫苗株亲缘关系较近,<1岁病例Real-time PCR检测阳性率高于其他年龄段.