PTEN基因表达与腮腺多形性腺瘤的发生发展的关系

目的 分析PTEN基因表达与腮腺多形性腺瘤的发生发展的关系。方法选取本院口腔科收治的腮腺多形性腺瘤25例,同时选取正常腮腺组织20例作为对照,分别采集腮腺多形性腺瘤患者的腺瘤组织、瘤旁0.5 cm～2 cm组织、舌下腺组织,以及正常对照的腮腺组织,比较不同组织中PTEN mRNA及蛋白的表达差异;比较复发组、未复发组和正常腮腺组织中PTEN mRNA及蛋白的表达差异。结果腺瘤组织、瘤旁0.5 cm组织、瘤旁1 cm组织、瘤旁1.5 cm组织中PTEN mRNA表达均低于正常腺体组织和舌下腺组织;腺瘤组织(56.0%)和瘤旁0.5 cm组织(64.0%)中PTEN蛋白表达阳性率均低于正常腺体组织(100.0%)和舌下腺组织(96.0%);复发组腺瘤组织中PTEN mRNA表达(0.413±0.052)均低于正常腺体组织(0.947±0.061)和未复发组腺瘤组织(0.639±0.058);复发组腺瘤组织中PTEN蛋白表达阳性率(27.3%)均低于正常腺体组织(100.0%)和未复发组腺瘤组织(71.4%)(P均<0.05)。结论腮腺多形性腺瘤组织中的PTEN表达低于正常腮腺和舌下腺组织,复发组腺瘤组织中的PTEN表达低于未复发组和正常组。     

发育中大鼠皮层神经元惊厥样放电中PSD-95 mRNA表达改变

目的探讨早期无镁细胞外液处理后惊厥样放电对发育中大鼠皮层神经元PSD-95 mRNA表达的影响。方法以原代培养的大鼠大脑皮层神经元无镁诱导的反复惊厥样放电为模型,根据对培养6d皮层神经元的不同处理分为三组：正常Neurobasal/B27培养液组（CONT组）、正常细胞外液组（PS组）和无镁细胞外液组（MGF组）。神经元分别在上述三种液体中孵育3h,然后换为正常Neurobasal/B27培养液继续培养,在处理后6,24,72h及处理后第6天时应用实时定量PCR测定PSD-95 mRNA的表达。结果与CONT组和PS组相比,MGF组PSD-95 mRNA表达在处理后24h明显增高（P〈0.05）。处理后6h,72h及第6天的皮层神经元PSD-95 mRNA表达三组中两两比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论发育中大鼠皮层神经元惊厥样放电可以导致神经元PSD-95 mRNA表达的改变。     

视网膜母细胞瘤Rb50细胞株VEGFR-3表达的研究

目的:研究视网膜母细胞瘤细胞株VEGFR-3的表达,探讨视网膜母细胞瘤自身增殖的机制.方法:选择Rb50细胞株,通过S-P免疫组化法、RT-PCR法及PCR产物琼脂糖凝胶电泳等方法,研究Rb50细胞株VEGFR-3的表达情况.结果:S-P免疫组化法呈阳性结果,表明Rb50细胞株有VEGFR-3的表达,RT-PCR产物琼脂糖凝胶电泳表明Rb50细胞株有较高水平VEGFR-3 mRNA的存在.结论:视网膜母细胞瘤细胞株有VEGFR-3的表达,表明VEGFR信息通路对视网膜母细胞瘤生长、浸润的影响,除了与促进肿瘤血管及淋巴管新生,改善肿瘤组织微环境相关外,还与促进肿瘤细胞自身增殖有关.     

CKl9 mRNA表达水平在乳腺癌微转移检测及治疗监测中的应用

目的探讨细胞角蛋白CKl9EnRNA表达水平在乳腺癌微转移检测及治疗监测中的应用。方法选择我院2004年2月-2011年8月健康体检者30例作为对照组,同时选择良性乳腺肿瘤30例,乳腺癌30例,对健康体检者、30例良性乳腺肿瘤和30例乳腺癌患者进行外周血中CKl9mRNA水平检查,统计比较组间的差异。结果CKl9mRNA在乳腺癌组表达明显高于良性乳腺疾病组．乳腺癌淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论FQ—PCR检测CKl9mRNA对乳腺癌诊断特异性较高,具有确切的预测价值,可有效监测乳腺癌微转移和疗效,临床值得推广。     

肝癌病人外周血及骨髓AFP mRNA的检测及意义

目的 通过检测AFP mRNA在肝细胞性肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC)病人外周血和骨髓中的表达，探讨AFP mRNA作为HCC微转移指标的可能性。方法 建立敏感的巢式逆转录聚合酶链反应体系（Nested-RT-PCR)，检测71例HCC、36例肝硬化、9例肝血管瘤、11例肝转移瘤、30例正常对照外周血AFP mRNA和19例HCC、15例血液病骨髓AFP mRNA。结果 71例HCC外周血中38例AFP mRNA表达阳性（53．5％），肝硬化、肝血管瘤、肝转移瘤和正常对照均为阴性。HCC外周血AFP mRNA检出率与血清AFP值无明显相关（P＞0．05），而与肿瘤大小、门静脉癌栓、肝内转移、肝外转移等临床参数有明显相关（P＜0．05）。19例HCC骨髓中9例AFP mRNA表达阳性（47．4％），15例血液病为阴性。骨髓AFP mRNA检出率与血清AFP值、肝内转移无明显相关（P＞0．05），与肿瘤大小、门静脉癌栓、肝外转移明显相关（P＜0．05）。外周血和骨髓AFP mRNA的表达呈一致性（P＜0．05）。结论 血循环AFP mRNA可作为CC微转移的早期检测指标。HCC病人外周血和骨髓AFP mRNA的表达与复发转移显著相关，且HCC病人外周血和骨髓AFP mRNA的表达呈一致性，联合检测有助于提高结论的可靠性。     

用SYBR Green I实时逆转录-聚合酶链反应定量检测人、小鼠精子中CatSper1 mRNA

目的:建立并优化SYBR GreenI实时RT-PCR体系,定量检测人、小鼠成熟精子中的CatSper1 mRNA。方法:用TRIzol分别提取人、小鼠成熟精子中的总RNA,逆转录后用SYBR GreenI实时PCR定量检测CatSper1 mRNA。SYBR GreenI实时PCR采用普通PCR试剂,加入SYBR GreenI染料,优化退火温度、Mg2+浓度及上、下游引物比例,并在PCR循环时采用四步法以消除引物二聚体的影响。优化完成后用不同浓度的精子cDNA为模板做标准曲线,以检测SYBR GreenI实时PCR的扩增效率。结果:定量检测CatSper1 mRNA的SYBR GreenI实时PCR体系适宜退火温度、Mg2+浓度及上、下游引物比例分别为63℃、3.0mmol/L和1∶1,四步法中采集荧光的温度为88℃。优化后用人和小鼠精子cDNA为模板做标准曲线分别为Y=-3.402log(X)+25.99和Y=-3.409log(X)+24.09,扩增效率分别为96.8%和96.5%,可定量检测人、小鼠成熟精子中的CatSper1 mRNA。结论:用普通的逆转录及PCR系统和试剂,建立了一种方便、廉价、可靠的SYBR GreenI实时荧光定量RT-PCR系统,可用于人、小鼠精子中CatSper1 mRNA定量检测。