人参皂苷Rb1拮抗达沙替尼抑制NK细胞杀伤卵巢癌的研究

目的研究抗癌药达沙替尼对自然杀伤细胞（NK细胞）杀伤卵巢癌细胞的抑制效应,并探讨人参皂苷Rb1拮抗这种免疫抑制效应的作用及其分子机制。方法分别用达沙替尼、人参皂苷Rb1以及达沙替尼联合人参皂苷Rb1预处理NK细胞,未经药物处理的NK细胞设为对照。采用CFSE／PI双染色法,经流式细胞仪检测与NK细胞混合培养的卵巢癌HO-8910细胞的死亡率来明确NK细胞的杀伤功能;采用Annexin V-FITC／PI双染色法测定NK细胞的凋亡率来明确其生存活力;采用real-timePCR法测定NK细胞颗粒酶B的mRNA表达量;采用免疫印迹法检测NK细胞ERK的蛋白水平。结果与对照组相比,达沙替尼处理组的NK细胞对卵巢癌HO-8910细胞的杀伤率显著下降（P〈0．01）,NK细胞的颗粒酶B的mRNA水平和磷酸化ERK（pERK）表达均下调;达沙替尼合并人参皂苷Rb1处理组的NK细胞对卵巢癌HO-8910细胞的杀伤率较达沙替尼组升高（P〈0．05）,而且颗粒酶B的mRNA水平、pERK表达均较达沙替尼组有所恢复;与对照组相比,人参皂苷Rb1单独处理组的NK细胞的生存活力、颗粒酶B水平、pERK表达量以及杀伤功能均无显著差异（P〈0．05）。结论达沙替尼对NK细胞杀伤卵巢癌细胞有抑制效应,可能与下调NK细胞的杀伤介质颗粒酶B和抑制ERK磷酸化有关。人参皂苷Rb1虽然不能直接活化NK细胞,但是能拮抗达沙替尼对NK细胞的上述抑制效应,提示联用人参皂苷Rb1能减少抗癌药物达沙替尼对免疫效应细胞的抑制作用。     

超高效液相色谱法测定参杞通脉胶囊中人参皂苷Rg1、Re和Rb1含量

目的建立测定参杞通脉胶囊中人参皂苷Rg1、Re和Rb1含量的超高效液相色谱(UPLC)法。方法色谱柱为Acquity UPLC HSS T3色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.8μm),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为0.4 mL/min,柱温为28℃,检测波长为203 nm,进样量为5μL。结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1进样量分别在0.0754~0.6032μg,0.0523~0.4184μg,0.0760~0.6084μg范围内与峰面积线性关系良好,平均回收率分别为97.90%,97.41%,98.02%,RSD分别为1.06%,1.73%,0.91%(n=6)。结论该方法操作简单,分离度高,回收率高,可用于参杞通脉胶囊的质量控制。     

人视网膜母细胞瘤细胞系SO—Rb50克隆株染色体畸变的观察

目的:研究SO-Rb_(50)细胞系三个克隆株MC_2、MC_3、MC_4染色体畸变的差异。方法:对MC_2、MC_3、MC_4的第11代进行G-显带核型分析。结果:三个克隆株细胞的染色体数目和结构均有异常,出现不同类型的染色体畸变。细胞染色体核型分析见假二倍体核型,13号染色体畸变仅见于个别核型且在三个克隆株中畸变情况不同。发现5个标记染色体,其中标记染色体M_1出现频率最高,几乎见于每个细胞,是由1号染色体长臂部分重复构成(t(1;1)qter-p35::q24-ter);另外还有几个异常标记染色体M_2,M_3,M_4和M_5分别见于各个克隆株细胞。标记染色体M_4和M_5为2号染色体的变化,是在该细胞系染色体变化动态研究中首次发现。结论:SO-Rb(50)在体外培养连续传代后仍存在不同的克隆株,结合以往对该细胞系染色体畸变的动态研究,不同代数的瘤细胞染色体结构畸变有差异,进一步证明体外培养连续传代过程中染色体结构畸变呈动态变化。我们认为13号染色体的畸变不是Rb发生的唯一原因;1号染色体的变化与本细胞系的永生关系密切,其与Rb发生、发展的关系值得深入研究;其它染色体变化为继发改变。眼科学报1998;14:220～223。     

HPLC-CAD法测定芪蛭通络胶囊中苷类成分的含量

目的 建立高效液相色谱-电喷雾检测器方法(HPLC-CAD)同时测定芪蛭通络胶囊中人参皂苷Rb₁和黄芪甲苷的含量。方法 采用色谱柱为Waters XSclectHss T3-C₁₈(4. 6 mm×250 mm,5 μm),水(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱(0 min,15% B;0～10 min,15%~25%B;10～15 min,25%B~31%B;20～50 min,31%B),流速1 mL·min^{- 1},柱温25 ℃,进样量为20 μL。电喷雾检测器(CAD)雾化器温度为35 ℃,功能参数(power function,PF)为1.0。结果 芪蛭通络胶囊中人参皂苷Rb₁和黄芪甲苷均具有良好的线性关系(r＞0.999 0),定量限(LOQ)分别为0.013和0.015 μg,精密度、重复性、24 h稳定性实验的相对标准偏差(RSD)值均小于3.0%,平均加样回收率分别为91.74%和100.09%。结论 本研究建立的HPLC-CAD法可同时对芪蛭通络胶囊中人参皂苷Rb₁和黄芪甲苷进行含量测定,为芪蛭通络胶囊的检测分析和质量控制提供了新的方法。     

Rb蛋白在结直肠癌中的表达及临床意义

目的 分析Rb蛋白表达与结直肠癌临床病理特征的关系。方法 应用免疫组化SABC法，检测44例结直肠癌癌中心、癌旁（距肿瘤边缘1cm)、切缘（距肿瘤边缘3cm以上）Rb蛋白表达情况，并分析Rb蛋白表达与结直肠癌临床病理特征的关系。结果 44例结直肠癌癌中心Rb蛋白表达为61.36%（27／44）,癌旁粘膜为90.91%(40/44)，切缘为97.73%（43／44）；Rb蛋白表达与年龄、性别、肿瘤部位、大小及分化程度无显著相关，而与肿瘤临床分期及淋巴结转移显著相关。结论 Rb蛋白的表达与结直肠癌的部分临床病理特征密切相关，可能是判断结直肠癌预后的一项重要指标。     

人乳腺癌细胞凋亡与去磷酸化Rb蛋白和PCNA的关系

目的:研究乳腺癌细胞凋亡与去磷酸化Rb蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)的关系。方法:应用MTT比色法检测多柔比星(又名阿霉素,ADR)对体外培养的MCF-7/S细胞增殖抑制作用,应用流式细胞术检测ADR诱导乳腺癌细胞凋亡,采用免疫组织化学法检测ADR作用前后去磷酸化Rb蛋白和PCNA的表达。结果:ADR抑制MCF-7/S细胞增殖,呈剂量依赖性;ADR作用组MCF-7/S细胞的凋亡率及去磷酸化Rb蛋白的表达量与对照组相比明显增高(P<0.01);PCNA阳性表达率与对照组相比明显降低(P<0.01)。结论:ADR作用组,MCF-7/S细胞的凋亡率(AR)与去磷酸化Rb蛋白的表达量呈正相关,与增殖细胞核抗原的阳性表达率呈负相关。     

阿霉素对人乳腺癌细胞凋亡和增殖的影响

[目的]检测阿霉素(ADR)对体外人乳腺癌化疗敏感细胞(MCF-7/S)凋亡和增殖的影响,并探讨其可能的作用机理.[方法]应用MTT比色法检测ADR对体外培养的MCF-7/S细胞增殖抑制作用,应用流式细胞术检测ADR诱导乳腺癌细胞凋亡,采用免疫细胞化学法检测ADR作用前后去磷酸化Rb蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.[结果]ADR抑制MCF-7/S细胞增殖,呈剂量依赖性;ADR组MCF-7/S细胞的凋亡率、磷酸化Rb蛋白的表达量与对照组相比明显增高(P＜0.01);PCNA阳性表达率与对照组的相比明显降低(P＜0.01).在ADR组,MCF-7/S细胞的凋亡率(AR)与去磷酸化Rb蛋白的表达量呈正相关,与增殖细胞核抗原的阳性表达率呈负相关.[结论]ADR诱导MCF-7/S细胞凋亡并抑制MCF-7/S细胞增殖可能与其上调去磷酸化Rb蛋白和下调细胞内增殖细胞核抗原表达水平有关.     

p16和Rb基因产物在非小细胞肺癌的表达

目的　研究非小细胞肺癌 (NSCLC)中p16、Rb蛋白表达及二者的关系。方法　应用免疫组织化学技术 (SP法 )检测 74例NSCLC和 10例正常肺组织中p16、Rb蛋白的表达情况。结果　p16蛋白在NSCLC的缺失率为 45 .95 % ,显著高于正常肺组织 (P <0 .0 1) ,并与淋巴结转移有密切关系 (P <0 .0 1)。Rb蛋白在NSCLC的缺失率为 2 8.3 8% ,与正常肺组织差异无显著性 (P >0 .0 5 )。p16蛋白与Rb蛋白表达呈负相关 (P <0 .0 5 )。结论　p16缺失与可能NSCLC的发生、转移有密切关系。p16与Rb可能通过负反馈机制相互调节。     

Overexpression of the p16 cell cycle inhibitor in breast cancer is associated with a more malignant phenotype

In order to study the role of the p16^INK4A(MTS1/CDKN2a) tumor suppressor in breast cancer, we analyzed p16 protein expression in 60 breast cancer samples which were also analyzed for expression of Rb, Ki67, HER2/neu, and estrogen and progesterone receptors (ER, PR). P16 expression was investigated by two methods: western blotting (WB) followed by densitometry, and immunohistochemistry (IHC). The Rb status was studied by western blotting, and expression of Ki67, HER2/neu, ER, and PR was analyzed immunohistochemically. P16-negative results were found in 18% of the carcinomas by WB, but in only one case by IHC and were not associated with established prognostic parameters. In contrast, p16 overexpression which was detected by WB and IHC in 15% and 25% of the tumors, respectively, was significantly associated with unfavorable prognostic indicators. High p16 expression as detected by both methods correlated significantly with high grading and a negative estrogen receptor status. In addition, a significant association of p16 staining with inverse progesterone receptor status and high Ki67 expression was found with IHC. No correlation of p16 expression with clinical stage, HER2/neu immunostaining, Rb expression or Rb phosphorylation was found. Comparison of western blot results and immunohistochemistry suggests that both nuclear and cytoplasmic immunoreactivity in tumor cells is specific and due to p16 expression. We conclude that high p16 reactivity (both nuclear and cytoplasmic) is indicative of a more undifferentiated, malignant phenotype in mammary carcinomas.