精神分裂症患者MBL基因ExonI 54位密码子点突变频率与血清水平的研究

目的探讨精神分裂症患者血清MBL水平与基因突变的相关性,了解MBL在患者免疫病理机制中的作用。方法应用ELISA法检测血清MBL水平;利用PCR产物直接测序的方法检测MBL基因外显子Ⅰ第54位密码子(MBL-54)的点突变频率。结果精神分裂症患者血清MBL水平(1367.218±1277.429ng/mL)明显低于对照组(1987.781±976.748ng/mL)(t=2.888,P=0.047)。MBL-54基因型GGC/GGC突变频率(55.77%)低于对照组(69.23%)(χ^2=2.010,P=0.224);GGC/GAC型突变频率(42.31%)高于对照组的(28.85%)(χ^2=2.298,P=0.315);GGC/GAC型的患者血清MBL水平(1034.52±529.72ng/mL)明显低于对照组(2195.81±1275.38ng/mL)(t=3.336,P=0.0039)。结论精神分裂症患者血清低水平的MBL可能与MBL-54基因型GGC/GGC突变率减低,GGC/GAC突变率升高的综合作用相关,MBL可能是患者体内CIC滞留或清除障碍的分子机制之一。     

遗忘型与血管型MCL患者尿AD7c-NTP水平检测及临床价值

目的:研究遗忘型轻度认知功能障碍(aMCI)与血管型轻度认知功能障碍(VaMCI)患者尿阿尔茨海默病相关神经丝蛋白(AD7c-NTP)水平及其临床价值.方法:选取轻度认知功能障碍(MCI)患者70例,其中aMCI组40例,VaMCI组30例,收集同期健康体检者27例为对照组,应用MoCA量表进行认知功能评估,测定并比较各组的尿AD7c-NTP水平,并与认知水平进行相关性分析,通过ROC曲线分析其诊断aMCI的敏感度和特异性.结果:aMCI组的尿AD7c-NTP水平较VaMCI组和对照组明显升高(P＜0.05);相关性分析显示尿AD7c-NTP水平与MoCA评分呈负相关(r=-0.362,P＜0.01);根据ROC曲线分析,确定2 507.10 ng/L为诊断aMCI的界定值,其对应的敏感性和特异性分别为80％和77.8％,ROC曲线下面积为0.828,95％CI:0.728～0.928.结论:尿AD7c-NTP水平变化对诊断MCI,尤其是aMCI具有一定的临床价值,并且与aMCI的严重程度的可能存在一定的相关性.     

Aβ损伤人脑微血管内皮细胞培养液对正常神经元凋亡的影响及通心络胶囊的干预作用

目的:通过β淀粉样蛋白(amyloidβ-protien,Aβ)损伤人脑微血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cells,HBMEC)培养液对正常神经元凋亡的影响及通心络胶囊的干预作用研究,探讨通心络对HBMEC及脑神经元的保护作用及其可能作用机制。方法:实验分为空白组,正常组,模型组,Aβ损伤组,通心络组,石杉碱甲组,空白组为正常神经元组,正常组为正常HBMEC培养液培养神经元组,其余4组采用20μmol·L~(-1)Aβ诱导HBMEC损伤,其中通心络组提前干预(400 mg·L~(-1)通心络预处理6 h),石杉碱甲组提前干预(100 mg·L~(-1)石杉碱甲预处理6 h),取其损伤后的细胞培养液加到正常脑神经元中进行培养,实验结束检测神经元的凋亡情况及凋亡蛋白、基因表达。结果:Aβ损伤HBMEC后的培养液可加速脑神经元的凋亡,且较Aβ直接导致脑神经元凋亡严重,提前通过通心络干预的HBMEC培养液诱导脑神经元凋亡细胞减少,凋亡蛋白、基因表达均有降低(P0.05,P0.01),且优于西药石杉碱甲组(P0.05)。结论:老年性痴呆(AD)中HBMEC损伤可以进一步加速神经元的凋亡,而通心络保护HBMEC同时可起到保护脑神经元的作用,通心络胶囊对AD脑神经元及HBMEC具有双重保护作用。     

归芪聪志汤对血管性痴呆模型大鼠行为学和海马组织基因表达谱的影响

目的研究归芪聪志汤对血管性痴呆(Vasculardementia,VD)大鼠模型海马基因表达谱的影响及部分筛选基因表达的影响。方法从120只SPF级Wistar雌性大鼠中随机选取10只作为假手术组,其余均采用改良后的两血管阻断法改良法制备血管性痴呆大鼠模型,经水迷宫筛选出合格造模大鼠35只,随机区组分为假手术组,模型组,阳性对照组,归芪聪志汤高、中、低剂量组。归芪聪志汤连续灌胃4周后处死大鼠取材海马组织。Morris水迷宫检测造模后及治疗后行为学变化。全基因组表达谱芯片检测归芪聪志汤中剂量组与模型组海马组织之间差异表达的基因;RT-qPCR检测紧密连接蛋白-1,2,3,14,22(claudin-1,claudin-2,claudin-3,claudin-14,claudin-22),细胞黏附分子(ICAM),血管紧张素转化酶(ACE)的mRNA表达量。结果Morris水迷宫检测显示:模型鼠逃避潜伏期明显延长,跨原平台次数明显减少(P0.01)。治疗28d后模型组逃避潜伏期明显延长,跨原平台次数明显减少(P0.05);与模型组相比,各治疗组大鼠逃逸潜伏期均缩短,跨原平台次数均增多(P0.01),其中归芪聪志汤中剂量组、阳性药物对照组大鼠学习记忆能力改善情况优于归芪聪志汤高、低剂量组(P0.05)。基因芯片和RT-qPCR检测结果显示:与假手术组比较,模型组claudin-1,claudin-2,claudin-3,claudin-22,ICAM,ACE基因表达量均升高(P0.05,P0.01),claudin-14、CDH3基因表达量均下降(P0.05,P0.01);与模型组比较,各治疗组claudin-1,claudin-2,claudin-3,claudin-22,ICAM,ACE基因表达量均下降,claudin-14,CDH3基因表达量均升高,其中,归芪聪志汤中剂量组、阳性药物对照组优于归芪聪志汤高、低剂量组(P0.05)。结论归芪聪志汤能下调VD模型大鼠海马组织claudin-1,claudin-2,claudin-3,claudin-22,ICAM,ACE的表达,并升高claudin-14,CDH3的表达,从而发挥抗VD作用。     

扶正抗癌方通过PTEN/PI3K/Bad通路调控肺癌A549细胞增殖与凋亡

目的:观察扶正抗癌(FZKA)方对肺癌细胞A549增殖的调控作用,探讨其作用的分子机制。方法:以非小细胞肺癌细胞A549为研究对象,以FAKA方0.8,1.2,1.6,2.0,2.4,2.8,3.2 g·L~(-1)干预,空白组,分别孵育24,48,72 h后,设立采用噻唑蓝(MTT)比色法检测FZKA方对A549细胞活力的影响;以FAKA方1.2,1.6,2.0 g·L~(-1)干预,设立空白组,培养24 h后,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测FZKA方对A549细胞人第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)mRNA水平的影响;孵育24 h后,采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)分析FZKA方对PTEN,磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K),磷酸化的促凋亡蛋白Bad(Phospho-Bad,p-Bad)表达的影响并探讨其相关性。结果:与空白组比较,FZKA方能明显抑制A549细胞增殖,处理24 h后,FZKA从0.8 g·L~(-1)开始,处理48,72 h后,FZKA方从0.4 g·L~(-1)开始,细胞存活率明显降低(P0.05,P0.01);与空白组比较,处理24 h后,FZKA方从0.8 g·L~(-1)开始以浓度依赖性上调PTEN mRNA和蛋白的表达(P0.05,P0.01),FZKA方从1.6 g·L~(-1)开始以浓度依赖性下调PI3K蛋白表达(P0.05,P0.01),从2 h开始以时间依赖性上调p-Bad蛋白的表达(P0.05,P0.01)。结论:FZKA方可通过上调PTEN来调控下游PI3K/Akt/Bad通路相关蛋白的表达进而抑制A549的增殖,促进肺癌细胞凋亡。     

纯钛表面牙周韧带细胞牙骨质附着蛋白的表达

目的以牙骨质附着蛋白为分化指标，分析牙周韧带细胞在纯钛表面的分化趋势，并探讨诱导矿化对牙周韧带细胞牙骨质附着蛋白表达的影响。方法第三代牙周韧带细胞在商用纯钛表面接种后，分别进行常规培养和矿化液诱导矿化培养，通过免疫荧光原位检测牙骨质附着蛋白的表达，并比较诱导矿化对牙骨质附着蛋白表达的影响。结果牙周韧带细胞在纯钛表面初期呈条纹状生长，常规培养和诱导矿化培养务件下均能表达牙骨质附着蛋白，诱导矿化对牙骨质蛋白的表达无明显影响。结论在常规培养务件和诱导矿化培养条件下，纯钛表面生长的牙周韧带细胞能高度表达牙骨质附着蛋白，提示纯钛表面体外培养的牙周韧带细胞具有形成牙骨质的分化趋势，从而可为种植体周构建牙周韧带结构提供在种植体侧的锚着点。     

小鼠釉质发育过程中成釉器中间层细胞增殖、凋亡以及组织非特异性碱性磷酸酶的表达

目的:观察小鼠釉质发育过程中成釉器中间层细胞的增殖、凋亡和其组织非特异性碱性磷酸酶(tissue nonspecific alkaline phosphatase,TNSALP)的表达,探讨中间层在釉质形成过程中的可能作用.方法:取出生后1、3、5、7、9、11、15d的BALB/c小鼠56只,解剖分离含下颌第一磨牙区的下颌骨,脱钙,制片,HE染色进行牙釉质发育情况的组织学观察,分别采用原位末端标记法(TUNEL法)、SP免疫组织化学技术、PV二步法观察中间层细胞的凋亡及检测Bcl-2、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA),并对TNSALP进行组织学定位.通过Image-pro plus 6.0图像分析软件.对图像进行半定量分析.采用SPSS13.0软件包进行t检验、单因素方差分析及SNK-q检验.结果:出生后1d.中间层细胞增殖细胞核抗原由比成釉细胞表达高的强阳性表达逐渐降低;至7d时,其表达为阴性,而且中间层细胞随釉质的发育逐渐凋亡.中间层细胞先于成釉细胞表达TNSALP,出生后5d时即呈现强阳性染色,而后其表达又逐步减弱;成釉细胞7d时开始出现阳性,且呈逐渐增强趋势.结论:中间层细胞的增殖和凋亡及其TNSALP的表达与成釉细胞具有相关性,提示中间层细胞有可能参与成釉细胞的分化及釉质形成.     

骨纤维异常增殖症发病机制的研究进展

骨纤维异常增殖症是一种口腔颌面部较常见的纤维骨病变,近年来对其发病机制研究较多。本文就激活型G蛋白α亚基基因(Gsα基因)突变在骨纤维异常增殖症发病中的作用和骨纤维异常增殖症患者的骨病变、内分泌功能亢进及皮肤色素斑的具体机制作一综述。     

mcpr1基因的真核表达载体的构建与鉴定

目的 :构建腭裂相关基因mcpr1与pcDNA3 .1/V5 HisB融合的高效真核表达载体 ,为研究mcpr1基因的功能奠定基础。方法 :根据mcpr1基因的核苷酸序列 ,设计并合成引物 ,通过PCR方法 ,从包含有mcpr1基因全长的克隆载体T easy/mcpr1中 ,扩增出该基因外显子片段 ,将扩增产物连接到真核表达载体pcDNA3 .1/V5 HisB中。对该重组体进行PCR和酶切鉴定 ,以及测序验证。结果 :以重组体为模板扩增出40 0bp左右的特异性基因片段 ,与mcpr1基因片段大小一致 ,酶切鉴定也显示有 40 0bp左右的基因片断。测序结果显示与已知基因序列一致。结论 :成功构建mcpr1基因的真核表达载体 ,为下一步研究mcpr1基因的功能奠定了基础。     

颌骨骨肉瘤中BMP-2mRNA的表达及其与淋巴结转移的关系

目的：观察颌骨骨肉瘤(osteosarcoma of the jaw，OSJ)中BMP-2 mRNA的表达，并探讨其与淋巴结转移的关系。方法：采用原位杂交方法．对21例OSJ标本进行BMP-2 mRNA检测。应用卡方检验．对OSJ中BMP-2 mRNA表达与淋巴结转移问的关系作统计分析。结果：21例OSJ中，17例BMP-2mRNA表达阳性(80.95％)，包括全部15例成骨细胞型和2例(2／4)成软骨细胞型OSJ。梭形或多边形的肿瘤细胞．细胞质中可见明显的阳性染色。12例出现淋巴结转移的OSJ标本，BMP-2mRNA表达均为阳性，而无BMP-2mRNA表达的OSJ标本中，无1例出现淋巴结转移。淋巴结阳性组，BMP-2mRNA的阳性表达率为100％；淋巴结阴性组，BMP-2mRNA的阳性表达率为55．56％．两者差异有统计学意义(P=0．021)。结论：BMP-2mRNA主要在成骨细胞型及部分成软骨细胞型OSJ中表达，其表达可能与OSJ的淋巴结转移存在一定关系。