全球历年人甲型流感病毒H3A1抗原的分子进化研究

目的应用生物信息学数据库和工具，对现有的H3N2亚型人甲型流感病毒全球分离株的H3A1抗原序列进化规律进行分析研究。方法下载NCBI Genbank和流感病毒数据库中全部的甲型流感病毒H3A1序列，首先用两步聚类法进行样本拆分，随后分类绘制出完整的进化树。结果人H3A1序列呈现出单一主干的进化趋势，随着时间的推移，进化树结构和进化模型相关参数均呈现出一定的变化规律，关键变异株的出现则无明显的地域分布特征。结论人流感病毒H3A1抗原的进化主要是病毒抗原漂移和人类免疫选择相互作用的结果，新变异株的出现并未出现明显的地域倾向性，中国华南地区不应当被认为是H3亚型新变异株的发源地。     

江苏省现阶段麻疹流行株H1基因型

目的监测现阶段在江苏省流行的麻疹野病毒及其基因型别.方法 2003年5月分别在医院门诊疑似麻疹病人和疑似麻疹爆发点的病人中采集了咽拭子,接种EB病毒转化的绒猴淋巴母细胞(B95a细胞),获得3株麻疹野病毒,同时进行了血球凝集(HA)试验、血球吸附试验.结果该3株病毒均无HA和血球吸附活性,逆转录-聚合酶链反应和其产物的基因序列分析提示,这3株病毒属于麻疹野病毒第8基因组H1基因型.结论此次为江苏省首次分离到麻疹野病毒,并证实在江苏省流行的麻疹野病毒基因型与国内流行优势基因型相同.     

Invariant aphthovirus consensus nucleotide sequence in the transition to error catastrophe

RNA viruses replicate as complex distributions of non-identical but closely related variant genomes termed viral quasispecies. When the error rate during genome replication exceeds a threshold value, the genetic information cannot be maintained and the system enters error catastrophe. This violation of the error threshold results in virus extinction and it is currently being investigated as a new antiviral strategy, based on antiviral activity of some mutagenic agents. Previous studies with the important animal pathogen foot-and-mouth disease virus (FMDV) have shown that FMDV entry into error catastrophe is associated with an increase of complexity (mutation frequency and Shannon entropy) of the mutant spectrum of the quasispecies and that mutated, pre-extinction RNA interferes with the infectivity of standard RNA. Here, we report that despite the increase of complexity, the genomic consensus nucleotide sequence of pre-extinction FMDV RNA remains invariant, and that the fitness of pre-extinction FMDV is at least six-fold lower than the fitness of the parental viral clone, prior to mutagenic treatments. Thus, a low fitness genome ensemble can suppress replication of high fitness virus. Furthermore, the results show that profound genetic modifications associated with fitness decrease of a virus population can take place without any manifestation in the consensus genomic sequence. Thus, increase in mutant spectrum complexity and invariance of the consensus sequence characterizes FMDV extinction through error catastrophe.     

益气清瘟解毒合剂对流感病毒FM1感染小鼠肺中IFN-γ,TNF-α,IL-10及IL-6蛋白动态表达的影响

目的:探讨治疗流行性感冒临床效方益气清瘟解毒合剂对炎性细胞因子的影响,从而确定益气清瘟解毒合剂抗流感免疫损伤方面的作用及其作用机制。方法:以流感病毒亚洲甲型鼠肺适应株(FM₁)感染小鼠为模型,采用双抗体夹心ABCELISA法动态观察益气清瘟解毒合剂干预治疗后肿瘤细胞因子α(TNF-α),白介素6(IL-6),γ干扰素(IFN-γ),白细胞介素10(IL10)的变化。结果与结论:流感病毒感染小鼠后,TNF-α,IL-6,IFN-γ,IL-10的蛋白表达感染模型组高于正常空白组,在第3天TNF-α,I-L6,IFN-γ均达峰值,感染模型组与正常空白组比较,差异显著。益气清瘟解毒合剂组TNF-α,IL-6,IFN-γ较感染模型组有所下降,第3天3个指标下降均差异显著。但益气清瘟解毒合剂组较感染模型组IL-10的水平则有所提高,二者比较,差异显著。说明益气清瘟解毒合剂可以抑制TNF-α,IL-6,IFN-γ细胞炎性因子的表达,提高抗炎因子IL-10的表达水平,从而达到减轻炎性损伤的作用,阐释了临床应用益气清瘟解毒合剂治疗流感,可以缩短病程,减轻炎症的机理所在。     

67例面中线非霍奇金淋巴瘤临床病理及其EBV感染关系

目的 探讨面中线非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin’s lymphma，NHL)的临床病理特点及其与EBV感染的关系。方法 应用免疫组化SP法检测多种抗体标记T淋巴细胞(CD45RO、CD56、TIA-1)和B淋巴细胞(CD20、CD45RA)，同时进行EBV原位杂交检测。结果 (1)67例病例中，男女之比为2．7：1，平均年龄43岁，发病部位多位于鼻腔；(2)按照WHO新分类法，67例中B细胞淋巴瘤有31例(47．4％)，NK／T细胞淋巴瘤有30例(46．2％)，外周T(非特殊类)细胞淋巴瘤有6例(9．1％)；(3)67例中有27例EBER1／2检测表达阳性(40．3％)，其中25例为NK／T细胞淋巴瘤，2例为外周T(非特殊类)细胞淋巴瘤，31例B细胞淋巴瘤均表达阴性。结论 面中线NHL以NK／T细胞淋巴瘤多发，EBV感染与淋巴瘤组织类型有关，与部位无关。     

微流芯片检测流感病毒多重逆转录聚合酶链反应产物的实验研究

[目的 ]　建立应用微流芯片检测甲 1型、甲 3型、乙型流感病毒多重逆转录聚合酶链反应 (mRT -PCR)产物的方法 ,在mRT -PCR扩增核酸的基础上自动化灵敏的定量检测扩增产物 ,快速检测甲亚型、乙型流感病毒 ,帮助临床快速诊断和鉴别诊断其他呼吸道病毒感染 ,以及明确流感病毒在人群中感染、流行情况。　 [方法 ]　采用经MDCK细胞分离培养的甲 1型、甲 3型、乙型流感病毒毒株病毒液 ,使用 3组特异引物经mRT -PCR扩增核酸 ,扩增产物分别采用毛细管电泳技术经Caliper10 0 0微流芯片分析仪自动化检测和经 2 %琼脂糖凝胶电泳法检测。　[结果 ]　设计三组引物对相应甲 1型、甲 3型、乙型流感病毒靶基因的mRT -PCR扩增产物片段分别为 43 0bp、2 10bp、3 91bp ,本实验mRT -PCR扩增产物经 2 %琼脂糖凝胶电泳 ,与Marker比照 ,DNA条带基本在此位点附近 ;产物采用毛细管电泳法经Caliper10 0 0微流芯片分析仪后 ,分别于 413bp、2 0 3bp、3 79bp处出现陡峭的峰 ,如图所示。　[结论 ]　应用微流芯片采用毛细管电泳法可对流感病毒mRT -PCR产物进行定位及相对定量 ,有助于快速诊断流感病毒感染 ,有助于对流感的监测。     

荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的临床意义

目的:探讨血清免疫标志物模式与 HBV DNA之间关系.方法:对 780例临床血清标本分别进行荧光定量聚合酶链 反应( FQ- PCR)和酶联免疫吸附试验( ELISA)对比检测.结果:在 780例临床标本中, HBsAg( )、HBeAg( )和 HBcAb( )模式 345例, HBV DNA阳性 335例,阳性率为 97.1%( 335/345),血清病毒载量对数值的均值为 7.84 ± 1.20; HBsAg( )、HBeAb( )和 HBcAb( )模式 294例, HBV DNA阳性 167例,阳性率为 56.8%( 167/294),载 量对数值的均值为 5.02± 1.19; HBsAg( )和 HBcAb( )模式 141例, HBV DNA阳性 49例,阳性率为 34.8%( 49/141), 载量对数值的均值为 4.89± 1.07.结论: HBeAg是反映 HBV DNA复制的重要指标,定量测定 HBV DNA能真实反映 HBV复制状况,为乙型肝炎的诊断、治疗及预后判断提供指导意义.     

四川省麻疹野病毒的分离和鉴定

目的　了解四川省麻疹病毒分子生物学特征 ,确定现阶段四川省流行的麻疹野病毒的基因型别。方法　用绒猴淋巴母细胞 (B95a )从一疑似麻疹散发患者的标本中分离麻疹病毒 ,通过逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR )和其序列测定方法鉴定是否为麻疹病毒。结果　四川省分离的这株毒株确定为麻疹野病毒H1基因型。结论　分离出麻疹野病毒属于H1基因型 ,和中国的本土优势流行株相同     

糖尿病小鼠对流感病毒灭活疫苗的免疫应答

目的用不同剂量的流感病毒灭活疫苗免疫糖尿病小鼠,检测糖尿病小鼠对流感疫苗的免疫应答.方法利用一次性大剂量注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)的方法,建成昆明小鼠糖尿病模型,用流感病毒灭活疫苗免疫正常小鼠和糖尿病小鼠,用3.0、1.5、1.0、0.5和0.1μg的剂量,免疫一次后间隔3周,再加强免疫一次,分别取血用ELISA法测免疫一次和免疫两次后的IgG抗体.结果用3.0、1.5、1.0、0.5和0.1μg的剂量免疫后,无论是免疫一次还是加强免疫后,糖尿病小鼠产生的抗体量均低于正常小鼠产生的抗体量.结论糖尿病小鼠由于自身免疫机制缺陷,对抗原免疫原性反应较正常小鼠差.