检测乙酰胆碱酯酶的双光子荧光探针的设计、合成及生物学评价

目的 设计并合成用于检测乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase，AChE）的双光子荧光探针，并考察探针对AChE的成像检测性能。方法 经酯化、取代等多步有机反应合成探针，并通过¹H-NMR、¹³C-NMR和ESI-MS确认结构。考察探针与AChE发生响应后的荧光信噪比、灵敏度、特异性、酶动力学和双关子吸收截面积数值等指标；研究探针可否用于AChE抑制剂的体外筛选；利用单-双光子成像试验考察探针在细胞和组织水平上对AChE活力变化的检测能力。结果 通过¹H-NMR、¹³C-NMR和ESI-MS确认了产物的结构。体外试验表明探针与AChE响应后的荧光信噪比为15倍，检测限达到0.23 U·mL^–1，并具有很强的特异性和优良的酶亲合能力，在波长820 nm有最优的双光子吸收；探针可用于AChE抑制剂的体外筛选；探针通过单-双光子成像技术可对细胞和组织水平上的AChE活力变化进行成像检测，并且组织成像检测深度可达110 μm。结论 本研究成功开发了可用于AChE检测的双光子荧光探针，有潜力成为可用于活体中检测AChE活力的双光子成像试剂。     

小鼠Brd2基因探针的制备及其在荧光原位杂交实验中的应用

目的:为观察溴结构域包含蛋白2(bromodomain containing protein 2,Brd2)基因在小鼠中枢神经系统的表达与分布,本研究制备了两条地高辛标记的Brd2 cRNA探针。方法:提取小鼠脑组织总RNA,设计两对Brd2引物,通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,扩增得到两个Brd2的DNA片段,并将它们分别克隆到pCRⅡ-TOPO载体中。利用体外转录方法合成地高辛标记的cRNA探针,最后通过荧光原位杂交实验分析所标记探针的特异性及杂交效果。结果:本实验成功构建了两个Brd2/pCRⅡ-TOPO质粒,获得了特异性的地高辛标记的Brd2cRNA探针,在荧光原位杂交实验中应用两条探针得到了较好的杂交信号。结论:本实验制备的地高辛标记的cRNA探针可特异地检测Brd2 mRNA,为进一步观察Brd2 mRNA在中枢神经系统的分布及功能研究提供了工具。     

多模态超声分子影像探针的研究进展

近年来,多模态超声分子影像技术发展迅速,其核心是构建以多功能超声造影剂为基础,并可同时用于光学、MRI、CT、PET等多种影像学技术成像的超声分子探针。目前,国内外学者利用不同材料对构建多模态超声造影剂进行了大量尝试,本文在上述研究的基础上,对构建材料的优缺点及其应用前景进行综述。     

海口地区新生儿G6PD基因突变分析

目的了解海口地区新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症的发生率及基因突变特点。方法用荧光斑点法对2016年1月1日至2016年2月24日出生于海口的5 295例新生儿进行G6PD活性筛查,对173例初筛阳性的标本用多色探针荧光PCR熔解曲线法(MMCA)进行基因分型。结果本次筛查发现海口地区新生儿群体的G6PD缺乏症发生率为3.87%(205/5 295),其中男女发生率分别为4.99%(142/2 848)和2.57%(63/2 447)。173例初筛阳性标本中检出142例(82.08%)有基因突变,基因携带率为3.18%(142/5 295/84.39%)。共检出6种基因突变类型,含74例(52.11%)c.1376 G>T,33例(23.24%)c.1388 G>A,13例(9.15%)c.95 A>G,8例(5.63%)c.1024 C>T,4例(2.82%)c.871 G>A,5例(3.52%)c.392 G>T,并检出3例(2.11%)c.1376 G>T复合c.1388 G>A突变、1例(0.71%)c.392 G>T复合c.517 T>C突变、1例(0.71%)c.95 A>G复合c.1388 G>A突变。结论海口地区是G6PD缺乏症高发地区,c.1376G>T、c.1388G>A和c.95 A>G是主要的3种基因突变型。     

PET特异性分子探针在肝纤维化早期诊断中的应用

肝纤维化是许多慢性肝病的标志性过程,临床上以肝穿刺活组织检查作为肝纤维化的诊断金标准,目前缺乏无创诊断早期肝纤维化的有效手段。肝纤维化进程伴随着复杂的分子水平的物质变化,各种物质变化与肝纤维化进展程度有一定相关性。PET作为能够提供组织功能与代谢等分子水平信息的影像学检查,有能力监测这些定量化信息。简单介绍了应用于早期肝纤维化诊断的PET特异性分子探针的原理,总结了目前PET特异性分子探针对早期肝纤维化诊断、分期的应用价值,以及寻找更多、更合适的PET特异性分子探针应用于早期肝纤维化。     

改良肛瘘造影技术的应用价值

目的:探讨改良肛瘘技术在临床中的应用价值。方法:将77例患者按照随机数字表法分为造影组35例和对照组42例。对照组采用传统中医银质探针探查、亚甲蓝染色等途径指导手术,造影组在对照组的基础上采用改良肛瘘技术进行治疗。比较两组的术中探查肛瘘时间、术中意外发现支瘘及脓腔数、创面愈合时间。结果:术中专门用于探查肛瘘走行的时间,造影组为(5.5±2.1)min,对照组为(10.5±3.5)min。造影组的手术探查时间明显短于对照组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。造影组术中未出现意外发现支瘘,未意外发现局部脓腔。对照组术中意外发现支瘘6例,意外发现局部脓腔3例,造影组的意外发生率低于对照组;两组创面愈合时间比较,显著有统计学意义(P<0.01)。结论:改良肛瘘造影技术可减少术中探查肛瘘时间;减少术中意外发现支瘘及脓腔数;减小患者损伤,提高创面愈合速度。     

ELISA检测中全自动加样引起拖带假阳性现象的分析

目的：探讨ELISA检测中全自动加样引起拖带假阳性现象的原因以及所要采取的对策。方法别使用试剂检测筛查血液标本，然后根据检测试剂说明书的要求，在全自动样本处理系统控制微机上编辑程序，程序包括初检和复检。使用一次性探针和永久性探针的污染情况对比，再使用2种标本进行3孔复检，在进行判断是否为强阳性所引起的拖带污染现象。结果整个检测过程中，以HIV检测为例所检测的7324份血液检测中出现拖带假阳性现象的为2例，而2013年1月-2014年5月间共检测血液标本66085份，没有出现拖带假阳性现象。结论一次性加样探针的使用能够很好的减少甚至杜绝拖带假阳性污染现象的发生，在检测过程中由于不同的厂家的试剂有所区别，在设计加样参数时应该遵循科学合理的原则，检测仪器要定期进行检验维修，校准，同时对于血液标本要严格质量控制，提高检测的准确性和安全性，使得全自动检测设备的优势充分。     

介绍一种改良的HPV原位杂交增强处理方法

在进行原位杂交前需要对组织进行增强处理,传统方法使用微波炉进行加热,其缺点是火力难以掌握,易掉片,染色不佳,易出现假阴性。本文采用电磁炉加热保温法,有效地克服了上述现象,现介绍如下。1材料与方法1.1材料拟行HPV原位杂交的标本,经4%甲醛固定,常     

Mitochondrial DNA haplogroup associated with sperm motility in the Han population

In this study, we aimed to determine whether the main mitochondrial DNA （mtDNA） haplogroups of the Han people have an impact on spermatozoa motility, We recruited 312 men who were consecutively admitted to two affiliated hospitals of College of Medicine, Zhejiang University from May 2011 to April 2012 as part of fertility investigations. Semen and whole blood samples were collected from the men. We determined the mtDNA haplogroups by analysing the sequences of mtDNA hypervariable segment I and testing diagnostic polymorphisms in the mtDNA coding region with DNA probes, No significant differences were found in the clinical characteristics of the mtDNA haplogroup R and non-R （P〉0.05）. Our results suggest that mtDNA haplogroup R is a strong independent predictor of sperm motility in the Han population, conferring a 2.97-fold （95% confidence interval： 1.74-4.48, P〈0.001） decreased chance of asthenozoospermia compared with those without haplogroup R.     

扎伊尔型、苏丹型埃博拉病毒TaqMan探针实时定量PCR核酸检测方法的建立

目的建立针对扎伊尔型(ZEBOV)及苏丹型埃博拉病毒(SEBOV)特异、灵敏和快速的Taq Man探针实时定量PCR核酸检测方法。方法选用世界卫生组织(WHO)参比实验室所使用的引物和探针序列,建立针对扎伊尔型及苏丹型埃博拉病毒的NP基因序列保守区的Taq Man探针实时定量PCR核酸检测方法,验证检测方法的灵敏性、特异性和稳定性,并与常规PCR检测方法进行比较。结果所建立的实时定量PCR方法可用于ZEBOV及SEBOV的特异性检测,较传统PCR方法反应快捷、灵敏,分别可达:ZEBOV 34拷贝/反应、SEBOV 24拷贝/反应;具有良好的特异性、稳定性和可重复性。结论建立了ZEBOV及SEBOV Taq Man探针实时定量PCR核酸检测方法,该方法可有望用于埃博拉病毒(EBOV)的实验室、临床及现场核酸检测。