多重连接探针扩增技术的原理及其在儿科学中的应用

多重连接探针扩增技术（mu ltip lex ligation-dependentprobe amp lification,MLPA）于2002年由Schouten等首先报道,是近几年发展起来的一种针对待检DNA序列进行定性和半定量分析的新技术。该技术高效、特异,在一次反应中可以检测45个核苷酸序列拷贝数的改变,目前已经应用于多个领域、多种疾病的研究。     

Rosai-Dorfman病的临床病理、免疫表型和病原学观察

目的观察Rosai—Doffman病的临床病理特征,探讨多种抗原标记的免疫表型及HHV8-DNA、HPV—DNA和EBER的表达及其与病因的关系,并比较国内外Rosm—Doffman病的发病特征。方法对16例Rosm-Doffman病进行临床病理回顾性研究;9例行免疫表型检测,包括CD163、CD68（PG—M1）、CD21、CD1a、CD20、CIMSRO、CD8、CIM、S100、M—CSF和HHV8;用原位杂交技术进行EBV—mRNA和HPV—DNA检测。结果（1）男女之比为4．33：1。只有淋巴结病变的占62．5％（10／16）,颈淋巴结多见,50％的病例有多部位淋巴结累及;结外病变占37．5％（6／16）。结外病变者的局部复发率较高。（2）淋巴结病变以明显扩张的淋巴窦内有不等量体积大、多角形、胞质内含有淋巴细胞和浆细胞的组织细胞为特征;结外病变均有不同程度纤维组织增生和以浆细胞为主的混合炎细胞浸润,胞质内含有淋巴细胞和浆细胞的大多角形组织细胞数量多寡不一,呈簇状或散在分布,且随病程进展,纤维组织的量渐多,特征性组织细胞数量渐少。（3）病变组织中大多角形组织细胞均表达S—100蛋白,以及CD68PG—M1、CD163和M—CSF,均不表达CD1a和CD21;组织细胞吞入的有T和B细胞,以T细胞为多,且CIM和CD8表型细胞均有。9例均为HHV8和EBEV阴性。（4）国内报道共62例,其中仅淋巴结病变34例,仅结外病变18例,淋巴结和结外同时存在病变10例。比较国内外文献,国外患者年龄较国内的年轻10岁以上,且女性比例较高。结论Rosai—Dofman病在国内较少。结外Rosai—Dorfman病的诊断有一定难度。HHV8-DNA、HPV—DNA和EBER的表达与病因关联不明确。国内外患者的发病年龄和性别构成不同。     

多重连接探针扩增技术的研究进展及其应用

多重连接探针扩增技术(multiplex ligation-dependentprobe amplification,MLPA)是一种高通量、针对待测核酸中靶序列进行定性和定量分析的新技术。该技术仅需20ng/μlDNA,即可通过简单的杂合、连接、PCR扩增及电泳步骤,在同一反应管中对四十多个不同的靶基因进行检测和定量分析。这一技术最先于2002年由荷兰的Schouten等[1]报道。如今短短几年中,该技术已被欧洲、亚洲等几十个实验室采用。迄今为止,已有150多篇不同领域采用该技术方法的报道在重要刊物上发表。     

荧光原位杂交技术检测急性淋巴细胞白血病异常染色体

目的　研究荧光原位杂交技术（ＦＩＳＨ） 在检测异常染色体中的应用价值及其意义。方法　用ＦＩＳＨ方法和染色体Ｇ分带技术对比观察急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ） 患者染色体的变化。结果　对３８ 例患者１７ ,１８ 和２１ 号染色体进行Ｇ分带技术检查,结果分别有１１,１３ 和１８ 例患者细胞染色体存在三倍体细胞。ＦＩＳＨ 检查结果,除上述病例发现三倍体细胞外,染色体Ｇ分带检查正常者中也有部分病例存在三倍体。结论　ＦＩＳＨ检测异常染色体,方法简便、灵敏、可靠,与常规细胞遗传学方法比较,ＦＩＳＨ 方法不需要培养细胞,对分裂期和分裂间期细胞均可进行基因定位检测,尤其在有核细胞少等不适于进行细胞遗传学分析的情况下,ＦＩＳＨ 方法仍可得到有意义的数据。     

Detection of the expression of heat shock protein 70 using quantum dots as fluorescence probe in human renal carcinoma

Objective： To detect the expression of heat shock protein 70 （HSP70） in human renal carcinoma tissues and cultured ACHN cells by using quantum dots-tagged fluorescence technology and its significance. Methods： Using the fluorescence property of quantum dots, indirect immunofluorescence method and immunocytochemical method were used to detect the expression of HSP70 tagged by quantum dots in renal carcinoma tissues and ACHN cells cultured in vitro. Results： Confocal fluorescence microscopy showed that HSP70 were significantly expressed in renal carcinoma tissues and ACHN cells cultured in vitro characterized by homogeneous distribution of intensive salmon pink fluorescence. Compared with FITC tagging, quantum dots tagged fluorescence had good specificity and signal to background. There was no notable quenching after excitation by quantum dots for 30 rain. Conclusion： Quantum dots can be used to label subcellular proteins and have obvious advantages compared with the traditional fluorescence methods. The quantum dots-tagged fluorescence could be applied as a new method for clinical labeling detection.     

导叶对轴流泵性能影响的试验

对设计模型轴流泵在无导叶和有导叶时的外特性进行测试,在导叶进出口位置开设测孔,并运用球形五孔探针对导叶进出口流场进行测量,得到绝对速度的周向、轴向及径向速度分量的分布曲线.测量结果表明:轴功率变化曲线在有导叶和无导叶时趋于一致,可忽略导叶对叶轮内流动的影响;在设计最优工况下,导叶出口绝对速度的圆周分量较小,导叶可回收的旋转动能约占叶轮出口总能量的15.7%;无导叶时泵的运行工况点向小流量工况偏移,在设计无导叶轴流泵时应在原有设计参数的基础上进行参数补偿.运用球形五孔探针测量三维流场中速度,具有适用性强、方法简单、测量精度较高的优点.试验结果揭示了导叶对轴流泵性能影响的规律,为进一步研究轴流泵内部流场提供了理论和实际应用参考.     

骨折并发感染患者肠道通透性研究

目的测定骨折并发感染患者肠道通透性的改变,探讨骨折并发感染患者肠粘膜屏障功能的改变。方法健康志愿者、骨折并发感染患者各15名,口服乳果糖、甘露醇液后采集6h尿样,尿样和乳果糖、甘露醇的标准样经肟化处理后通过气相色谱分析仪进行检测分析。结果甘露醇峰、乳果糖峰出峰时间稳定,峰面积随含量增加而增加,并且呈线性相关;骨折并发感染患者与健康志愿者尿样中的乳果糖含量和乳果糖/甘露醇存在显著差异(P<0.05),而甘露醇含量两组无显著差异(P>0.05)。结论骨折并发感染患者肠粘膜通透性增加,存在肠粘膜屏障功能损害。     

牙胚组织原位杂交方法学探讨

目的探讨牙胚组织原位杂交的最佳方法。方法用牙本质涎磷蛋白DSPP特异性寡核苷酸探针,检测不同时期牙胚DSPPmRNA的表达。结果各种牙胚的成牙本质细胞和前成釉细胞均检测到DSPPmRNA的表达,各阴性对照组均未检测到信号。结论所用的牙胚组织原位杂交方法敏感性高,特异性高。     

荧光原位杂交技术和流式细胞仪在菌斑中致龋性变形链球菌定量检测中的应用

目的:建立快速定量检测菌斑中主要致龋菌变形链球菌的方法,为龋齿活跃性评估提供参考数据。方法:收集无龋(caries free,CF)和高龋(caries susceptib le,CS)儿童牙菌斑各15例,将不同荧光素标记的寡核苷酸探针:细菌通用探针和变形链球菌特异性探针进行荧光原位杂交,结合流式细胞仪检测菌斑中变形链球菌所占的比例。结果:在无龋儿童菌斑中,变形链球菌在总菌中所占比例数是1.24%~3.4%(2.25±0.71),而在高龋儿童菌斑中比例为5.04%~9.7%(7.37±1.34),两组比较有着明显的统计学差异(P<0.01)。结论:流式细胞仪结合荧光原位杂交技术,可作为一种细菌定量检测方法应用于致龋性变形链球菌的定量分析中。     

IMMULITE全自动化学发光免疫分析仪探针携带污染率的探讨

IMMULITE全自动化学发光免疫分析仪使用过程中异常高值对正常值、临界值是否有影响.我们收集了2005年到2006年60例异常AFP高值(100～＞363ng/ml),正常对照组40例.