低氧在单侧输尿管梗阻大鼠模型肾间质纤维化中的作用初探

目的证实结扎致单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型梗阻侧肾脏是否存在低氧,不同时间点低氧的特点及低氧与肾间质纤维化的关系。方法选用180g左右的雄性SD大鼠,随机分为8组,即假手术组（Sham组）、单侧输尿管结扎术后12h、24h、48h、3d、5d、7d和10d组,每组4只。除Sham组外,均结扎左侧输尿管建立UUO模型。各组大鼠处死前1．5h腹腔麻醉后,经阴茎静脉注射低氧探针（Hypoxyprobe^TM-,ChemiconInternational,Inc．）60mg／kg,然后开腹取左肾。对各组肾脏Masson三色染色后,半定量分析肾小管间质纤维化程度;用RT-PCR、Westernblot及免疫组织化学方法检测其转化生长因子（TGF）-β1表达,用免疫组织化学方法观察其低氧程度及分布。结果与Sham组比较,大鼠血肌酐自术后3d组即有不同程度的显著升高（P〈0．01）,血尿素氮自UUO后7d组出现显著升高（P〈0．01）,尿蛋白及血压则无显著差别。Masson染色显示肾小管间质纤维化的程度逐渐加重,术后10d组纤维化程度约增加了10倍。自术后48h组TGF-β1mRNA和蛋白水平均出现进行性上升,主要集中在小管上皮细胞。术后12h组,肾脏低氧的范围和程度有明显加重,免疫组织化学半定量分析表明在术后3d组达到高峰,并持续存在至10d组,主要集中在各种小管细胞。大鼠术后7d内,各组肾脏皮质区低氧程度与间质纤维化程度（r：0．821,P〈0．05）、TGF-β1mRNA（r：0．824,P〈0．05）、TGF-β1蛋白表达量（r：0．834,P〈0．05）之间存在显著相关性。结论UUO大鼠模型术后10d内梗阻侧肾脏持续存在低氧,很可能通过调节TGF-β1等细胞因子参与了梗阻侧肾脏间质纤维化的过程。     

羟基喜树碱的代谢与CYP450的相关性研究

目的：研究羟基喜树碱（HCPT）在体外小鼠肝微粒体中对 CYP450活性的影响,为临床合理联合用药提供参考。方法：在小鼠体外肝微粒体中分别加入六种亚型酶的探针药物对乙酰氨基酚、非那西丁、双氯芬酸钠、睾酮、酒石酸美托洛尔、奥美拉唑和羟基喜树碱溶液,在优化的孵育体系下温孵。用 HPLC 法测定各空白对照组和羟基喜树碱溶液中各探针药物代谢产物的浓度并比较代谢率的差异,以评价羟基喜树碱对各亚型酶活性的影响。结果：在代谢反应过程中,在50~200μmol·L-1内,羟基喜树碱的浓度与孵育体系中 CYP3A4的特异性底物睾酮、CYP2E1的特异性底物对乙酰氨基酚的剩余药量呈正比例关系,且具显著性差异（P＜0.05）,与其他四种探针药物的剩余药量无明显的浓度依存关系（P＞0.05）。结论：HCPT 在肝微粒体的代谢反应过程中受代谢酶 CYP3A4和 CYP2E1的作用,竞争性地抑制了睾酮和对乙酰氨基酚在肝微粒体中的代谢。     

用分子探针杂交法观测多次献血对造血系统的影响

目的建立非同位素标记的探针杂交测定外周血白细胞端粒DNA长度的方法,借此探讨无偿献血对献血者造血系统的影响。方法酚/氯仿提取基因组DNA,限制性内切酶消化,琼脂糖凝胶电泳,非同位素标记的探针Southern印迹杂交,化学发光X线片曝光显示杂交谱带,积分光密度扫描计算TRF值。结果所测样本获得了较好的低背景杂交谱带,测得35～40岁无偿献血组TRF值平均为11.73kb,相应无献血史对照组平均为11.78kb。结论建立了非同位素标记的探针检测端粒DNA的方法,用上述方法初步显示了固定的长期无偿献血并未对献血者的造血系统产生负面影响。     

雷公藤活性成分对大鼠体内P450酶活性的影响

目的用Cocktail探针药物法,研究雷公藤片对大鼠肝CYP450的影响。方法分别以奥美拉唑和咪达唑仑作为CYP2C19和CYP3A4的探针药,将大鼠随机分为低剂量和高剂量两组,每日早晚灌胃雷公藤片,采用液质联用法测定连续使用雷公藤片前后大鼠血浆中相应的探针药物的浓度及其药代动力学参数。结果连续灌胃10 d后,与用药前比较,奥美拉唑、咪达唑仑的血药浓度及其药代动力学参数有明显改变;低剂量组和高剂量组中咪达唑仑的AUC明显增加,CL/F明显降低,T12增大,Vd/F和Tmax变化不明显,高剂量组中Cmax有所增大;低剂量组中奥美拉唑的T21和Vd/F有所增大,高剂量组中AUC增加(P<0.05)。结论连续灌胃雷公藤片10 d后,雷公藤片对大鼠体内CYP3A4酶具有抑制作用;对CYP2C19酶具有一定的抑制作用。     

不明原因智力障碍/脑发育迟缓患儿染色体亚端粒重组突变的检测

目的联合应用多重连接依赖的探针扩增法和荧光原位杂交法检测染色体亚端粒重组,进行不明原因智力障碍／脑发育迟缓（mental retardation／developmental delay,MR／DD）的病因学研究。方法人选病例必须满足：①中一重度MR／DD;②无明确围产期异常病史;③无明确生后中毒、缺氧、中枢神经系统感染及头颅外伤等病史;④常规核型分析显示正常;⑤头颅影像及尿有机酸、氨基酸分析未提示典型遗传代谢性疾病或神经变性病;⑥男性患儿FMR1基因检测未提示脆性X综合征。并至少符合以下条件之一：①MR家族史阳性;②反复流产或围产期死亡家族史阳性;③体格发育异常;④面部畸形;⑤非面部畸形或发育异常。联合应用多重连接依赖的探针扩增法过筛和荧光原位杂交技术验证对患儿及父母标本进行染色体亚端粒重组检测。结果人组39例中发现4例阳性病例,重组分别为：①新发der（2）t（2;4）（pter;pter）,文献未见报道;②新发8pter缺失,国外曾有报道,但临床表型不同;③新发15q11．2缺失,属中间重组,结合患儿临床表型,Angelman综合征可能性大;④新发11qter缺失,文献未见报道。结论首次报道2种新重组,其新发出现提示致病性可能性大;染色体亚端粒重组是遗传性MR／DD的重要病因,临床表型差异大,对原因不明的常规染色体检查无异常的MR／DD患者均应进行检测,联合应用多重连接依赖的探针扩增法和荧光原位杂交法是相对经济的确诊手段。     

猪尾巴探针及硬膜外导管在泪小管显微吻合术中的应用

外伤性泪小管断裂是常见的眼附属器疾病,如未及时修复处理,由于泪道损伤的未恢复、瘢痕阻塞导致长期泪溢,甚至颜面湿疹等,尤其对户外工作人员造成不便,严重者造成容颜的损伤,影响患者心理状态。我院自2000年5月至2005年12月对48例(48只眼)新鲜泪小管断裂的患者,在猪尾巴探针引导下用一次性直径1mm硬膜外麻醉导管作为泪小管支撑物,行一期泪小管吻合术,取得了良好的效果,报告如下。1资料与方法1·1临床资料48例泪小管断裂患者均为单眼受伤。左眼27例,右眼21例;男性37例,女性9例;年龄18～45岁。断端距泪小点最近3mm,最远8～9mm。损伤原因为锐器…     

FQ—PCR检测尖锐湿疣皮损中HPV—DNA

目的：了解尖锐湿疣（CA）组织中人乳头瘤病毒（HPV）感染的型别及其DNA含量。方法：采用HPV6／11和HPV16／18型荧光定量PCR诊断试剂盒,对临床表现典型的CA组织进行FQ－PCR检测。结果：HPV－DNA阳性检出率95．15％,其中HPV6／11型阳性检出率86．4％。HPV6／11含量在10^5～10^9opies,占92．13％。结论：CA主要为HPV6／11感染,皮损中HPV6／11DNA含量检测可以临床提供一定的参考。     

浅谈分子影像学

分子影像学是近年来兴起的涉及影像学与现代分子生物学,及其他学科的新的边缘学科.本文针对分子影像学所需的三种探针和成像方法进行了综述.     

表皮生长因子受体基因突变临床检测方法学比较及其影响因素分析

目的 比较临床常用的两种方法检测晚期非小细胞肺癌(NSCLC)表皮生长因子受体(EGFR)基因突变状态结果的差异,探讨福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)组织切片标本的不同保存方式对DNA数量、质量及对检测结果的影响.方法 收集中国医学科学院肿瘤医院2010年11月至2011年8月晚期NSCLC FFPE组织切片标本150份,分别采用楔形探针扩增阻滞突变系统(ScorpionsARMS)和直接测序法检测EGFR第18、19、20、21号外显子突变状态,分析两种方法检测EGFR基因突变结果的差异,对结果不一致病例收集临床治疗情况及生存数据并进行分析.对其中30份FFPE标本提取DNA并保存于-20℃3年,同样的30份FFPE标本按常规方法保存3年后再提取DNA,比较两种保存方式对DNA的数量、质量及对检测结果的影响.结果 Scorpions ARMS法检测EGFR基因突变的成功率(100％)高于直接测序法(87.3％),差异有统计学意义(x2=20.28,P＜0.05).两种方法检测EGFR基因突变的一致率为84.7％,一致性较好(Kappa=0.738,P＜0.001).分析结果不一致病例中5例接受靶向药物治疗后患者的生存情况,与ARMS检测结果一致性相对较好.新鲜FFPE标本提取并贮存于-20℃、3年的DNA与FFPE标本按常规方法保存3年后提取的DNA相比,后者质量相对较差,片段化程度更严重,但两种保存方法获取的DNA的EGFR基因突变检测结果均一致.结论 Scorpions ARMS与直接测序法联合检测结果更为全面、可靠.检测结果不确定的患者应以临床治疗及生存资料支持诊断.FFPE标本提取DNA后低温贮存,更有利于DNA完整性的保存.     

HMGB1基因SNP位点实时荧光PCR检测方法的建立

目的建立基于Taq Man探针实时荧光PCR技术的高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)检测方法。方法收集2014年4月在深圳口岸医院体检的健康人群样本20份,选择HMGB1基因上的2个SNP位点设计常规PCR和实时荧光PCR扩增引物和Taq Man探针,采用基因测序和实时荧光PCR方法对样本进行SNP分型。结果实时荧光PCR方法SNP分型结果显示,在20份样本中的HMGB1基因rs1412125位点检测到TT基因型11例,CC基因型1例,TC基因型8例;HMGB1基因rs3742305位点检测到GG基因型15例,GC基因型5例,未发现CC基因型。这一结果与基因测序方法结论完全一致。结论基于Taq Man探针技术的实时荧光PCR方法进行HMGB1基因SNP分型简单、快速、高效,可用于人群大规模样本的SNP筛查,具有广泛应用的价值。