膀胱灌注异烟肼注射液辅助治疗膀胱结核近期疗效观察

目的:观察膀胱灌注异烟肼注射液治疗膀胱结核的疗效。方法:对膀胱结核的患者采用全身抗结核药物治疗的同时,膀胱灌注异烟肼注射液,每日1次,共4周。与对照组对比观察患者膀胱刺激症状、尿常规及膀胱镜下病变的变化。结果:治疗组膀胱刺激症状、尿常规及膀胱镜下病变的好转比率均高于对照组,两组比较差异有统计学意义。结论:膀胱灌注异烟肼注射液是治疗膀胱结核的有效办法,值得临床推广应用。     

耐多药结核病快速诊断试剂盒检测耐药结核分枝杆菌的评价

目的 评价用耐多药结核病快速诊断(GenoType MTBDRplus)试剂盒检测耐利福平、异炳肼MTB的效果.方法 选取75株MTB临床分离株,采用耐多药结核病快速诊断试剂盒检测其中的耐药MTB,评价其敏感度和特异度及可重复性,并与常规的药物敏感性试验方法相比较.结果 耐多药结核病快速诊断试剂盒对上海地区的MTB临床分离株中耐利福平和耐异烟肼菌株的敏感度分别为98.0%和86.5%,对敏感菌株的特异度为100%.而在重复性试验中,耐多药结核病快速诊断试剂盒多次结果完全一致,重复性达到100%.结论 耐多药结核病快速诊断作为快速检测耐药MTB的试剂盒,对耐利福平和耐异烟肼菌株具有较高的敏感度和特异度,在上海地区有较好的应用前景.     

高剂量异烟肼、利福喷丁在健康汉族人群中的药代动力学及安全性研究

目的 评价高剂量异烟肼、利福喷丁在健康汉族人群中的药代动力学表现以及安全性,为实施结核病预防性治疗提供临床证据。方法 2019年10—12月上海市公共卫生临床中心招募36名健康受试者,按1:1随机区组分为国产制剂组(T组)18名和参比制剂组(R组)18名, T组单次口服国产异烟肼、利福喷丁各900mg,R组单次口服异烟肼、利福喷丁参比制剂各900mg,每组随机一半受试者空腹服药(T1组9名,R1组9名),另一半受试者餐后服药(T2组9名,R2组9名)。服药后在规定时间点采集静脉血并分离血浆,采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS)测定血浆中的药物及代谢物浓度,采用Phoenix WinNonlin 8.1软件计算药代动力学参数,并记录72h观察期内所有不良事件。结果 T1组和R1组比较,利福喷丁的峰浓度C_max分别为(21.2±7.3)μg/ml和(15.2±2.8)μg/ml(t=3.256,P=0.003),AUC_0~t分别为(624.3±327.4)μg·h/ml和(479.4±141.8)μg·h/ml(t=1.724,P=0.094);异烟肼的C_max分别为(29.9±4.5)μg/ml和(25.2±6.8)μg/ml(t=2.445,P=0.020);AUC_0~t分别为(80.7±21.4)μg·h/ml和(80.4±12.7)μg·h/ml(t=0.051,P=0.960)。T2组和R2组比较,利福喷丁的C_max分别为 (25.4±6.8)μg/ml和(26.5±5.2)μg/ml(t=-0.545,P=0.589),AUC_0~t分别为 (756.4±253.2)μg·h/ml和(779.7±175.5)μg·h/ml(t=-0.321, P=0.750);异烟肼的C_max分别为(11.5±1.6)μg/ml和(10.9±1.5)μg/ml(t=1.161, P=0.253),AUC_0~t分别为(54.2±9.3)μg·h/ml和(55.8±8.9)μg·h/ml(t=-0.527,P=0.602)。T1组与R1组利福喷丁的C_max、AUC_0~t几何均数比值的90%CI分别为102.7%~158.9%和87.4%~169.0%,异烟肼的C_max、AUC_0~t几何均数比值的90%CI分别为100.0%~147.8%和80.9%~120.4%;T2组与R2组利福喷丁的C_max、AUC_0~t几何均数比值的90%CI分别为78.3%~113.6%和74.3%~119.5%,异烟肼的C_max、AUC_0~t几何均数比值的90%CI分别为91.8%~120.8%和82.1%~114.6%。未见严重不良事件报告。结论 根据两组药代动力学指标的几何均数的90%CI,国产异烟肼、利福喷丁与参比制剂的药代动力学表现接近,但不完全等效,单次服药安全性良好。     

结核分枝杆菌对异烟肼和利福平的耐药水平与其耐药基因突变的相关性研究

目的 探讨Mtb耐药相关基因katG、inhA、oxyR-ahpC突变与对INH的耐药水平及rpoB突变与对RFP的耐药水平的关系。 方法 采用微孔板Alamar blue显色法分别检测59株耐INH的Mtb临床分离株对INH和30株耐RFP菌株对RFP的最低抑菌浓度（the minimum inhibitory concentration,MIC）,同时用直接测序法检测对INH耐药菌株katG、inhA、oxyR-ahpC和对RFP耐药菌株rpoB的突变情况。 结果 INH MIC为0.2500~1.0000 μg/ml（低水平耐药菌株）和 MIC≥2.0000 μg/ml（高水平耐药菌株）的INH耐药株,inhA启动子突变率前者高于后者［53.8% (7/13),4.3% (2/46)］,katG 315突变率前者低于后者［15.4% (2/13),76.1% (35/46)］,χ²值分别为15.57和13.48,P值均为0.000。RFP MIC为0.5000～16.0000 μg/ml和MIC≥32 0000 μg/ml的RFP耐药株,rpoB 531和526位总突变率前者低于后者［62.5% (5/8),95.5%(21/22)］,P_确切概率＝0.048。 结论 INH耐药菌株inhA启动子突变与INH低水平耐药有关,katG 315突变与INH高水平耐药有关;rpoB 531和526位突变与RFP高水平耐药有关。     

Analysis of drug-resistance to rifampin and isoniazid in 1307 patients with pulmonary tuberculosis in Kashi,Xinjiang

目的 分析新疆维吾尔自治区喀什地区结核病患者行利福平和异烟肼耐药性检测的结果。 方法 搜集2019年1月1日至6月30日喀什地区11个市(县)根据《WS 288—2017 肺结核诊断》确诊的1307例患者的痰培养标本及患者信息,利用结核分枝杆菌利福平耐药突变检测试剂盒和结核分枝杆菌异烟肼耐药突变检测试剂盒对利福平和异烟肼进行耐药性检测,对不同年龄组、不同性别、不同治疗史、不同地区患者对两种药品的耐药情况进行统计分析。计数资料组间比较采用χ²检验,以P<0.05为差异有统计学意义。 结果 在1307例患者中,利福平耐药198例,耐药率为15.15%;异烟肼耐药151例,耐药率为11.55%;耐多药63例,耐多药率为4.82%。男性与女性患者利福平耐药率[15.71%(110/700)和14.57%(88/604)]、异烟肼耐药率[10.71%(75/700)和12.42%(75/604)]和耐多药率[4.57%(32/700)和5.13%(31/604)]差异均无统计学意义(χ²=0.330,P=0.566;χ²=0.924,P=0.337;χ²=0.222,P=0.638)。初治和复治患者利福平耐药率[15.46%(160/1035)和16.32%(31/190)]、异烟肼耐药率[11.30%(117/1035)和14.74%(28/190)]和耐多药率[4.73%(49/1035)和6.32%(12/190)]差异均无统计学意义(χ²=0.090,P=0.765;χ²=1.812,P=0.178;χ²=0.849,P=0.357)。60~70岁年龄组耐多药率最高(6.12%,21/343);30~40岁年龄组对利福平和异烟肼耐药率均最高,分别为21.32%(29/136)和14.71%(20/136)。喀什地区11个市(县)中,喀什市耐多药率(10.59%,9/85)、利福平耐药率(25.88%,22/85)和异烟肼耐药率(28.24%,24/85)均为最高。 结论 喀什地区耐药结核病状况较为严重,应加强耐药性筛查力度,及时发现耐药结核病患者,并制订有效的化疗方案。     

利福平和异烟肼结核分枝杆菌药敏表型和基因型的关系

目的 对利福平（RFP）和异烟肼（INH）进行药敏检测,分析相应的结核分枝杆菌药敏表型与基因型的关系。 方法 对2009年至2012年深圳市第三人民医院结核病门诊和住院的137例结核病患者晨痰标本进行结核分枝杆菌培养,利用膜基因芯片法检测结核分枝杆菌耐药基因的突变情况（基因型检测）,同时以绝对浓度法进行异烟肼和利福平药敏试验（表型检测）,计算两种方法检测结果间的符合率,验证膜基因芯片方法的准确性,用Kappa检验分析两种方法的一致性。 结果137株结核分枝杆菌标本,表型检测利福平和异烟肼耐药率分别为27.01%（37/137）和22.63%（31/137）;基因型检测利福平和异烟肼耐药率分别为26.28%（36/137）和23.36%（32/137）;以绝对浓度法药敏结果为金标准,膜基因芯片检测利福平耐药的敏感度为83.78%(31/37),特异度为94.06%(95/101),符合率为91.97% (126/137),Kappa值为0.79,P<0.05;异烟肼耐药的敏感度为80.65%(25/31),特异度为94.29%（99/105）,符合率为90.51%(124/137),Kappa值为0.73,P<0.05;两种药物药敏结果总符合率为91.24%(250/274)。 结论 结核分枝杆菌耐药性基因型检测和表型检测结果高度一致,且基因型的检测方法能快速准确地检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性,有望在临床治疗中广泛应用。     

β-磷酸三钙/聚乳酸-聚羟基乙酸/异烟肼缓释材料制备与分析

目的 制备β-磷酸三钙/聚乳酸-聚羟基乙酸/异烟肼缓释材料,分析材料体内外性能。 方法 聚乳酸-聚羟基乙酸溶解于适量1,4-二氧六环中,将β-磷酸三钙、异烟肼二种粉末直接混入PLGA溶液中,超声混合均匀。将悬浊液置入模具中制成材料。扫描电镜观察材料结构,并进行药代动力学分析。取36只新西兰大白兔,通过数字表法随机分为3组,每组12只;制作股骨髁缺损模型,分别于骨缺损处植入β-磷酸三钙/聚乳酸-聚羟基乙酸材料（β-TCP/PLGA）（实验Ⅰ组）、β-磷酸三钙/聚乳酸-聚羟基乙酸/异烟肼（β-TCP/PLGA/INH）（实验Ⅱ组）缓释材料,并设置空白对照组（实验Ⅲ组,不植入任何材料）。术后4、8和12周观察材料修复骨缺损的情况,并采用影像学、组织学评分和骨长入率评价骨修复效果。 结果 β-TCP/PLGA/INH缓释材料在局部可持续释放异烟肼至12周。12周后,实验Ⅰ组与Ⅱ组骨缺损得到修复,实验Ⅲ组骨缺损未修复;实验Ⅰ组和实验Ⅱ组的骨长入率分别为83.0%±7.0%、84.0%±6.0%,而实验Ⅲ组为10.0%±1.1%,组织学评分分别为（7.3±0.6）分、（7.1±0.8）分、（2.0±0.4）分。组织学评分和骨长入率在实验Ⅰ与Ⅱ组间差异不具有统计学意义（组织学评分t值为0.400,P＞0.05;骨长入率：t=－0.217, P>0.05）;和空白对照组间差异具有统计学意义（组织学评分t值分别为14.700、11.404,P值均＜0.01;骨长入率：t值分别20.604和24.262, P值均＜0.01）。 结论 β-磷酸三钙/聚乳酸-聚羟基乙酸/异烟肼缓释材料可很好的修复兔骨缺损,材料降解速度与骨形成速度相匹配,并能在足够成长的时间范围内维持异烟肼的释放。     

定向诱变方法研究结核分支杆菌KatG基因突变与异烟肼耐药机制的关系

目的：探讨结核分支杆菌KatG基因的常见点突变是否会导致与产生异烟肼耐药性相关的过氧化氢酶活性降低。方法：用定向诱变方法产生耐异肼的结核分支杆菌中最常见的KatG基因315突变体,造成该位点从丝氨酸（AGC）到苏氨酸（ACC）的突变,随后构建含KatG基因S315T突变体的质粒,转化进入大肠菌并实现高表达,对表达的蛋白进行过氧化氢酶活性的测定。结果：通过定向诱变方法成功获得KatG基因S315T突变体,并通过pET24b质粒转入大肠杆菌,KatG基因S315T突变体蛋白在大肠杆菌中得到高表达,对DatG S315T表达产物的过氧化氢酶活性进行检测,发现比野生株KatG基因表达产物酶活性下降了50％左右。结论：KatG基因315位从丝氨酸（AGC）到苏氨酸（ACC）的突变造成过与异烟肼耐药产生直接相关的氧化氢酶活性的下降。     

抗结核药物体外药代动力学/药效学研究模型的建立及应用

目的 利用中空纤维系统建立体外药代动力学/药效学研究(pharmacokinetics/pharmacodynamics,PK/PD)的方法,并利用该方法获得异烟肼PK/PD参数及目标靶值,为后续新药的体外PK/PD研究提供方法学参考。方法 组装中空纤维系统,在中空纤维培养筒外腔接种处于对数生长期浓度为1×10 ⁶ 菌落形成单位(CFU)/ml的H37Rv菌株,共15ml。在系统中模拟人体25、50、150、300、1200mg/d给药剂量下的异烟肼浓度-时间分布,分别于给药后0.5、1、3.5、6.5、9.5、13、24、24.5、25、27.5、30.5、33.5、37、48h进行取样,利用高效液相色谱(high-performance liquid chromatographic,HPLC)测定异烟肼浓度。给药7d内每天对培养筒外腔菌液进行取样,监测系统中总菌量、异烟肼耐药等随时间变化的情况,并用PKSolver插件计算相关PK/PD参数。结果 结核分枝杆菌中空纤维感染模型中,异烟肼在给药第1天就表现出明显的早期杀菌活性,而杀菌作用停止的时间出现在给药3~5d。在给药7d后,50~1200mg/d剂量组结核分枝杆菌耐药菌群在所有菌群中占比≥39%。游离药物的血浆药物浓度-时间(0~24h)曲线下面积(AUC_0~24)与最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)的比值(AUC_0~24/MIC)是异烟肼对H37Rv的PK/PD参数中拟合效果最好的。给药前2d药物的最大效应(E_max)为3.02CFU/ml,当AUC_0~24/MIC=52.23时达到半最大效应浓度(EC₅₀)。结论 首次在国内建立的结核分枝杆菌中空纤维感染模型构建成功,AUC_0~24/MIC是异烟肼对H37Rv的目标PK/PD参数。     

载异烟肼、利福平纳米羟基磷灰石-硫酸钙-壳聚糖人工骨在兔脊柱结核模型中的释药研究

目的 :研究载异烟肼(isoniazid,INH)、利福平(rifampicin,RFP)纳米羟基磷灰石(nHA)-硫酸钙(CSH)-壳聚糖(CTS)人工骨在兔脊柱结核模型病灶中的释药特点。方法:用结核分枝杆菌H37Rv标准株,采用侧腹入路的手术方法建立兔脊柱结核模型27只,其中雌性15只,雄性12只,3个月龄,平均体重为2.50±0.25kg,每只模型兔均在行结核病灶清除术后置入载INH、RFP纳米羟基磷灰石-硫酸钙-壳聚糖人工骨,按照时相点分为24h、72h和1周、2周、4周、6周、8周、10周、12周共9组,每组3只。采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定各时相点动物模型病灶中椎体及椎旁肌肉中的INH及RFP的药物浓度,并研究其浓度与时间的关系。结果:人工骨中的INH在兔脊柱结核模型的病灶椎体中24h、72h和1周、2周、4周、6周、8周的药物浓度分别为75.66±1.95μg/g、48.46±2.34μg/g、30.69±2.74μg/g、20.34±1.63μg/g、9.36±1.17μg/g、5.19±1.40μg/g、2.73±1.19μg/g,在第10周以后未检测到药物浓度,INH在病灶椎旁肌肉中的各时相点浓度为39.51±2.25μg/g、23.65±1.55μg/g、16.39±2.10μg/g、10.38±1.44μg/g、3.66±0.79μg/g、1.89±0.73μg/g、0.26±0.10μg/g,在第10周以后未检测到药物浓度。对INH在同一时间的椎体和椎旁肌两种不同组织中的药物浓度进行两两比较,均有统计学意义(P0.05);RFP在动物模型的病灶椎体中24h、72h和1周、2周、4周、6周、8周、10周、12周的药物浓度分别为10.85±2.45μg/g、22.47±1.94μg/g、38.32±1.73μg/g、24.22±1.45μg/g、17.85±1.50μg/g、9.81±1.30μg/g、6.35±1.30μg/g、5.11±0.53μg/g、1.32±0.33μg/g,RFP在病灶椎旁肌肉中的药物浓度分别为5.39±1.50μg/g、20.66±1.29μg/g、48.72±2.24μg/g、32.27±1.63μg/g、15.58±1.88μg/g、8.69±0.79μg/g、3.43±0.39μg/g,在第10周后未检测到药物浓度。RFP在椎体和椎旁肌两个部位的药物浓度除72h、4周和6周外,其余时间点的差异均有统计学意义(P0.05)。结论:载INH、RFP纳米羟基磷灰石-硫酸钙-壳聚糖人工骨在兔脊柱结核模型病灶中可持续、长效的释放抗结核药物。