乙肝病毒X蛋白HLA-A0201限制性CTL表位的筛选与鉴定

目的:应用T2细胞结合实验以及亲和力稳定性实验鉴定由网络表位预测服务和通用原则预测得到的乙肝病毒X蛋白(HBx)来源的HLA-A0201限制性CTL表位.方法:选择中国人群最常见的B、C基因型中的adw、adr血清型的乙肝病毒X基因序列,通过网络在线表位筛选服务,分析得到共同并且得分较高的表位,并根据超基序、延展基序及量化基序方案等通用表位筛选原则进行进一步的筛选,得到4条较为理想的九肽(HBx1,HBx2,HBx3,HBx4)作为候选表位.随后借助于流式细胞技术,通过T2细胞实验分析各候选肽以及阳性、阴性、空白对照的荧光系数,从而对所筛选的表位进行体外鉴定.结果:获得的4个候选表位 (HBx1:VLCLRPVGA,HBx2:CLFKDWEEL,HBx3:VLHKRTLGL,HBx4:HLSLRGLPV) 中HBx2的亲和力较高,HBx2和HBx4的稳定性较好.结论:CLFKDWEEL是一种乙肝病毒X蛋白潜在的HLA-A0201限制性CTL表位,下一步可通过体内试验对其免疫原性作一步的验证.     

HBx,Snail基因在肝细胞癌中的表达意义

目的:检测HBx和Snail在肝细胞癌(HCC)中表达,分析与HCC侵袭转移特性的关系.方法:西南医院全军肝胆外科研究所2006-07/2007-03手术切除肝细胞癌肿瘤组织59例,提取RNA,逆转录为eDNA.实时定量PCR(RT-PCR)定量检测HBx和Snail mRNA水平.收集、量化研究病例的肝癌临床病理特征.利用Kendall's Tau-b相关性分析,研究HBx,Snail与临床病理特征的相关性.结果:肝癌组织Snail mRNA水平与pTNM分期、门静脉侵犯呈正相关(r=0.339,P=0.029;r=0.278,P=0.039);肝癌组织HBx mRNA水平与pTNM分期、门静脉侵犯、肿瘤单发/多发、AFP水平呈正相关(r=0.330,P=0.010;r=0.289,P=0.034;r=0.340,P=0.012;r=0.299,P=0.008);肝癌组织中Snail与HBxmRNA表达呈正相关(r=0.312,P=0.006).结论:HBx,Snail与HCC侵袭转移密切相关,二者之间亦存在相关性,HBx蛋白有可能通过激活Snail转录表达提高HCC侵袭转移能力.     

肝细胞肿瘤患者癌组织中HBx基因的检测

目的通过检测肝细胞肿瘤(HCC)患者癌组织中HBx基因探讨乙型肝炎病毒(HBV)在HCC中的重要性.方法根据HBx基因DNA序列设计引物,采用特异性聚合酶链式反应(PCR)对31例病理确诊并经手术切除后的HCC患者癌组织进行了检测,同时采用PCR方法检测了同一患者血清HBV DNA.结果 PCR显示31例HCC患者癌组织中HBx基因和血清中HBV DNA的阳性率分别为77.4%(24/31)和32.3%(10/31).结论 HBx基因片段广泛存在于HCC患者癌组织中并且在癌细胞中可能存在整合.     

乙型肝炎病毒HBx蛋白及其下游因子在肝癌细胞中的表达

乙型肝炎病毒HBx蛋白通过多条信号通路参与DNA修复和基因激活,并可调节细胞增殖、凋亡及诱导细胞迁移等,在HBV相关肝细胞癌(HCC)发生过程中发挥重要作用[1,2].核因子κ B(NF-κB)作为一个重要的转录因子,参与细胞调节的多个阶段和抗凋亡基因表达[3].我们回顾分析了HBx蛋白、NF-κB和凋亡增殖相关因子在HBV相关HCC中的作用.     

乙型肝炎病毒X蛋白在体外和体内对SMMC-7721细胞生长与分化的影响

近年来,HBV对肝癌细胞生物学行为的影响受到越来越多的关注.我们前期研究结果表明乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)可以诱导肝癌细胞株SMMC-7721发生上皮-间质样表型转化(EMT),并显著增强肝癌细胞侵袭转移潜能[1].     

乙型肝炎病毒X基因的原核表达及血清抗HBx抗体的检测

目的 应用表达蛋白检测乙型肝炎患者血清抗-HBx抗体水平并探讨其临床意义。方法 通过PCR扩增获得HBVX基因，与原核表达载体Pet32a＋连接构建PET32a-HBX原核表达载体，转化E．coli BL21表达获得重组融合蛋白。经切胶透析纯化后，应用重组蛋白HBx建立检测血清中抗-HBx抗体的间接ELISA方法，分别检测正常人组、急性肝炎组、慢性肝炎组、肝硬化组和肝细胞癌组患者血清中的抗-HBx抗体。结果 获得具有免疫原性的HBx融合蛋白；ELISA检测表明，慢性肝炎组、肝硬化组和肝细胞癌组的抗-HBx抗体的水平均高于急性肝炎组，差异具有显著性；在三组之问，慢性肝炎组高于肝硬化组和肝细胞癌组，差异具有显著性，肝硬化组和肝细胞癌组的抗-HBx抗体水平无显著性差异。结论 HBV患者血清中抗-HBX抗体是乙型肝炎病毒感染的一种特异性抗体，是HBV感染的血清学指标之一，可以反映乙型肝炎肝炎患者病情的变化。