重组HBsAg免疫逃逸突变体的表达及其抗原性分析

为了深入研究乙型肝炎病毒S基因变异所致的包膜抗原抗原性的改变，从含ＨＢＶＤＮＡ双拷贝的质粒载体ｐＥｃｏｂ６，获得一个８３７ｂｐ的ＨＢＶ－Ｓ基因片段，将其插入至载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＫＳ~＋的ＳｍａⅠ位点，通过体外寡核苷酸介导的人工定点突变分别获得第１４５位、１２６位和第１４５位＋１２６位氨基酸三种Ｓ基因变异型。然后将这些Ｓ基因变异片段克隆到真核表达载体ｐＭＥｐ４上，从而构建了含ＨＢＶ－Ｓ基因及其突变型的表达载体ＰＭＥｐ４ＨＢＶＳＭ。用其转染人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２，获得稳定分泌ＨＢｓＡｇ及其变异体的抗性细胞系。经体外初步研究表明，ＨＢｓＡｇ １４５位氨基酸变异体可影响ＨＢｓＡｇ的“ａ”抗原决定簇的结构。     

人抗—HBsFab段基因的序列分析及表达

对已建的噬菌体抗体库中分离的人抗－ＨＢｓ克隆进行了序列分析和表达研究，发现１９个克隆都具有相同的重链可变区基因，轻链可变区基因有４个相同，其余１５个未进行序列测定。ＤＮＡ序列分析表明ＶＨ、ＪＨ分属ＶＨＶＨⅢ和ＪＨ６，Ｄ段为二个Ｄ基因的融合，ＶＫ，ＪＫ属于ＶＫＩ和ＪＫ４。     

包裹天然骨架CpG ODN和HBsAg的非磷脂脂质体疫苗的免疫效果

非磷脂脂质体NovasomeR○(Np )是由Brij5 2、胆固醇和油酸组成 ,可作为同时传递佐剂和抗原的载体。我们将HBsAg与天然骨架CpGODN (phosphodiesterCpGODN ,pdCpGODN )包裹于Np后免疫BALB/c小鼠 ,检测其免疫效果。结果显示 ,包裹pdCpGODN和HBsAg的Np在小鼠中诱导了很高滴度的抗 HBs抗体产生并诱生了HBsAgS2 8 3 9特异性的CTL ,而铝佐剂组和仅包裹HBsAg的Np组诱生的抗体滴度较低 ,未检测到CTL活力。抗体亚类分析结果表明包裹pdCpGODN和HBsAg的Np诱生的免疫应答类型与pdCpGODN剂量有关 ,较低剂量 (2 4 μgpdCpGODN )诱生的为IgG2a为主的Th1型应答 ,而较高剂量(4 7μgpdCpGODN )诱生的是Th1/Th2混合型应答。铝佐剂和仅包裹HBsAg的Np组诱生的是以IgG1为主的Th2型应答。此外 ,包裹pdCpGODN和HBsAg的Np免疫小鼠脾淋巴细胞在体外HBsAg刺激培养后特异性增殖并分泌高水平的IFN γ。这些结果表明包裹pdCpGODN和HBsAg的Np能增强HBsAg的免疫原性 ,诱生体液 /细胞免疫均衡应答 ,有可能发展为慢性乙肝的治疗性疫苗     

JM-高效电话杀菌垫杀菌效果的实验观察

目的：以2%强化戊二醛为主要成分的微胶囊消毒液制成电话杀菌势运载其杀菌效果及稳定性进行了试验观察。方法 按卫生部1999版消毒剂微生物学实验室鉴定实验技术进行。结果 该液作用3-5min,可杀灭大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌99.99%以上;作用10min可灭活HBsAg,浸以2%强化戊二醛该液的消毒垫贴于电话话筒使用45d,仍有良好消毒作用。结论 JM-高效电话杀菌垫具有良好杀菌效果和稳定性。     

乙型肝炎病毒基因重组（CHO）疫苗阻断母婴传播的研究

目的：研究乙型肝炎病毒基因重组(CHO)疫茵对HBsAg和HBeAg双阳性母亲所生婴儿的阻断效果。方法：选70例生于母亲为HBsAg和HBsAg双阳性的婴儿,随机分为A组(31例)和B组(39例),A组为单纯疫苗组,注射3次疫苗(0、1、6月,10μg／次);B组为疫苗加乙肝免疫球蛋自(HBIG)组,注射3次疫苗(同A组),并于出生时注射半支(50IU)HBIG。全程2～6个月采血,用固相放射免疫(RIA)法检测抗-HBs、HBsAg和抗-HBc。结果：抗抗-HBs阳转率为83．87％,阻断率为83．87％,疫苗加半量乙肝免疫球蛋白(50IU)组分别为93．10％和93．59％。结论：乙肝基因重组(CHO)疫苗有良好的阻断乙肝母婴传播的效果,如果出生时加注半支HBIG效果更好。     

杂合启动子控制下乙肝病毒表面抗原SA—28融合基因在酵母中？…

在杂合启动子ＡＤＨ２－ＧＡＰＤＨ控制下于酿酒酵母中表达乙肝病毒表面抗原ＳＡ－２８融合基因的过程研究中,确定系统表达的有效阻遏条件为在１０．０ｇ／Ｌ的葡萄糖浓度下进行细胞的预培养,采用稀释操作和碳源饥饿培养等较彻底的支阻遏方式以克服葡萄糖酵解产物阻遏对表达的影响。实验还显示了溶解氧浓度对表达的影响和乙醇流加方式对表达期酵母生长与表达的调节作用。实验获得主培养４５ｈ后湿菌体浓度为１８６ｇ／Ｌ,细胞内ｐ     

人源多克隆抗血清识别的HBsAg模拟表位筛选

目的 获得与乙肝病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）人源抗血清特异结合的噬菌体呈现模拟多肽,加深对乙肝病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）Ｂ细胞表位的了解。方法 基于噬菌体小衣壳蛋白（ｇｐⅢ）构建１２氢基酸随机肽库,经混合多克隆人源ＨＢｓＡｇ阳性血清的三轮筛选,阳性噬菌体经ＥＬＩＳＡ和竞争实验证实,并测定其对应呈现多肽的插入序列,分析其氨基酸序列与ＨＢｓＡｇ的相似性,结果 两个噬菌体颗粒在ＥＬＩＳＡ实验中呈阳性,其中     

血吸虫病与原发性肝癌关系的队列研究

为探讨日本血吸虫病与原发性肝癌的关系, 对大丰市455 人进行了12年的前瞻性观察。血吸虫病组表抗携带率为14.21% , 比非血吸虫病组的9.56% 高; 肝癌20岁以上截缩标化人年死亡率, 血吸虫病组为283.82/10 万, 非血吸虫病组为38.66/10万, RRM H为5.72,SMR分别为3.76 和0.65,P< 0.01;前者组内男女肝癌死亡率比RRM H 为1.51, P> 0.05,后者组内RRM H 为3.98,P< 0.01。用叉生法分析血吸虫病和表抗携带两因素的作用,则肝癌20岁以上截缩标化人年死亡率,血吸虫病和表抗携带双阴者为21.16/10万, 血吸虫病单阳者为118.47/10 万,表抗携带单阳者为232.33/10 万,血吸虫病和表抗携带双阳者为1228.75/10 万; 后三者与前者相比, RRM H 分别为3.99, 8.47, 34.57, P均< 0.01; 血吸虫病和表抗携带对肝癌联合作用指数S为3.2,Poisson 回归乘法模型拟合良好。结果提示两者与肝癌分别有密切联系,且有明显的相乘作用     

稳定性二氧化氯消毒性能及毒性的试验研究

稳定性二氧化氯采用液体二元包装方式,贮存稳定。经活化后,二氧化氯浓度50mg／L的消毒液作用10min能完全杀灭细菌繁殖体,400mg／L作用5min能完全杀灭细菌芽胞．300mg／L作用5min能有效地破坏HBsAg抗原性。10％有机物对其杀菌作用无影响。该消毒液对人体无毒、无刺激性,但对金属有不同程度的腐蚀性。