阴沟肠杆菌随机扩增多态性DNA法基因分型

目的建立阴沟肠杆菌(ECL)随机扩增多态性DNA(RAPD)法基因分型图谱.方法以优化的随机引物和反应体系对临床分离的159株ECL进行RAPD法基因分型,并按DNA条带数及片段大小绘制指纹图谱.结果 159株临床分离ECL共得121种RAPD指纹图谱.结论 RAPD技术可将临床分离ECL分型121种.     

云南省褐家鼠与黄胸鼠中汉坦病毒的流行病学研究

目的 研究云南省褐家鼠、黄胸鼠中汉坦病毒的感染情况及其型别，以明确基因亚型及其地理分布，为该地区肾综合征出血热（HFRS）的预防控制提供科学依据。方法 捕捉鼠类取鼠肺，冷冻切片后以间接免疫荧光法检测鼠肺中汉坦病毒抗原，从阳性鼠肺标本中提取病毒RNA，利用RT—PCR扩增汉坦病毒S和M基因部分片段并测序分型，构建系统发生树进行系统发生分析。结果 共捕获褐家鼠和黄胸鼠307只，检测到阳性样品14份，阳性检出率为4．56％。分析部分S片段（600～999nt）与M片段G1区（140～640nt）、G2区（2003～2302nt）的核苷酸序列，及用部分S及G2核苷酸序列构建的系统发生树，将来自云南省8个地区的汉城病毒分为2个亚型：S1和S3亚型。结论 云南省主要为家鼠型HFRS疫区，汉城病毒有2个亚型，地理分布较广。     

Enterovirus-71 genotype C isolated in Peru between 2006 and 2009

Enterovirus-71 (EV71) was first isolated in California, United States in 1969, belongs to the genus Enterovirus, family Picornaviridae. Although infection normally causes mild, often undiagnosed illness, it can cause central nervous system infections that could turn fatal. Based on VP1 gene analysis, EV71 has been classified into six separate genotypes. Although the molecular epidemiology of EV71 has been well described via studies originating from Asia and Europe, it is mostly unknown in South America. From our study, four EV71 isolates from Peru were characterized using phylogenetic methods to determine their relationship with known reference strains. These four Peruvian EV71 isolates from between 2006 and 2009 were analyzed by RT-PCR using primers capable of amplifying the entire VP1 gene. Reference strains representing all six known genotypes were used to determine any recognizable phylogenetic relationships. In fact, all of our isolates clustered together within the genotype C1 lineage- separate from Asian, European, North American, and Australian strains. We present evidence that EV71 genotype C1 exists in Peru, and this is the first such report documenting EV71 genotype C1 circulating in South America. Gathering additional isolates will help elucidate a more complete global epidemiological picture of EV71 infections.     

HBV基因分型检测试剂性能评估研究要点

依据《体外诊断试剂注册管理办法》和乙型肝炎病毒核酸分型试剂自身特点,提出对HBV基因分型检测试剂性能研究的特殊要求.对该类试剂的参考品和质控品研制、阳性/阴性参考品符合率、最低检测限、分析特异性、精密度、基因混合型研究、携带污染率等方面进行了详细解析.阐述了乙型肝炎病毒基因分型类体外诊断试剂的性能研究要点.为从事该类产品注册申报前性能研究的行业人员提供参考.     

北京天坛医院5512例女性HPV感染基因型分析

目的 探讨北京地区女性生殖道人乳头瘤病毒(HPV)感染的基因型分布情况,为预防HPV感染和宫颈疾病防治提供理论依据.方法 使用核酸分子快速导流杂交基因芯片技术,对5512例女性宫颈脱落细胞进行HPV亚型检测.结果 892例患者感染HPV,总感染率为16.2％.居前5位的HPV基因亚型依次为HPV52、58、16、CP8304和HPV53.单一感染664例(24.1％),占所有感染的74.4％(664/892);双重亚型感染175例,占所有感染的19.6％ (175/892);多重亚型感染53例,占所有感染的5.94％(53/892).HPV感染以≤45岁的年轻女性为主(65.4％),≤25岁患者HPV感染率最高(23.2％).结论 HPV52、HPV58、HPV16、CP8304和HPV53感染在北京地区最为常见,总体符合亚洲人群分布规律,同时又具有独特的地域分布特点.     

中国家族性肾性糖尿SGLT2基因突变分析及表型和基因型相关性研究

Objective To describe and analyze the clinical characters of patients with FRG from 7 Chinese families. Then analyze and identify their mutations in SGLT2 gene, and explore the association of genotype and phenotype. Methods Quantitative test for 24-hour urine glucose and other laboratory tests were carried out among 7 probands (14 patients in all) and their family members from 7 pedigrees (totaling 23 subjects). All coding regions, including intron-exon boundaries, were analyzed using PCR followed by direct sequence analysis. Results Five novel mutations in SLC5A2 gene were identified in this investigation, including four missense mutations (A Serine to Glycine at position 335 (c.1003A＞G, p.S335G), a Glutamine to Arginine at position 448 (c.1343A＞G, p.Q448R),an alanine to proline at position 474 (p.A474P, c.1420G＞C) and a glycine to aspartic acid at position 580 (c.1739G＞A, p.G580D) and a deletion in intron 7 (c.886(-10_-31)del). By the minigene studies using the pSPL3 plasmids, we confirmed the deletion c.886(-10_-31)del as a splicing mutation. In this study, the mutation c.886(-10_-31)del accounted for about 43% of the total alleles (12/28). These patients with compound heterozygous or homozygous mutations manifested middle degree or severe glycosuria (Quantitative test for 24-hour urine glucose: 10.56-50.68 g/1.73 m2), however those with heterozygous variants presented with mild to moderate glycosuria (Quantitative test for 24-hour urine glucose ≤2.45 g/1.73 m2). This fits co-dominant inheritance pattern. Conclusions Five novel mutations which may be related to FRG are found in this study, and c.886(-10-31) del may be a high frequency mutation in Chinese patients.     

Polymerase Chain Reaction Analysis of the Clonality of Porphyromonas Gingivalis and Collagenase Gene

目的：本研究旨在分析牙龈卟啉菌基因型和其重要毒力因子胶原酶基因（collagenase gene,PrtC）的遗传异质性，了解细菌遗传变异与其对牙周致病性的相关性。方法：采用随机引物聚合酶链反应（AP－PCR）的方法，对从24例牙周炎患者口腔中分离的79株牙龈卟啉菌和参考菌株ATCC33277进行DNA指纹分析。并随机选择24株临床菌株，进一步检测是否存在特异性的胶原酶基因片段。对照菌株为伴放线放线标菌Y4和中间普氏菌ATCC25611，通过酶切鉴定和DNA序列分析，了解PrtC基因遗传多样性的变化。结果：80株牙龈卟啉菌共获得7种基因型（I－Ⅶ），以Ⅶ所占比例最高（25．8％）。24株临床菌株和ATCC33277中均扩增出特异性的胶原酶基因片段（548bp）。将4株细菌的序列分析结果与国外的报道相比较，发现一些基因序列存在差异，其中有6个核苷酸碱基缺失。结论：临床分离的牙龈卟啉菌中可检测到多种基因型，存在明显的个体差异，这些菌株具有合成胶原酶的能力，不同菌株胶原酶基因之间存在遗传异质性的变化。     

维吾尔族慢性牙周炎中牙龈卟啉单胞菌菌fimA毒力基因型的分布

目的：分析维吾尔族慢性牙周炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌菌毛fimA毒力基因型的分布情况。方法：收集52例维吾尔族慢性牙周炎患者的龈下菌斑，采用16SrRNA PCR法检测牙龈卟啉单胞菌，并根据菌毛fima毒力基因型的特异引物，用聚合酶链反应（PCR）检测Ⅱ型fimA和Ⅳ型fima菌株的分布。结果：16SrRNA PCR法检测牙龈卟啉单胞菌在龈下菌斑中阳性检出率是76．9％。牙周袋PPD〉6mm位点龈下菌斑标本的P．gingivalis检出率高于4〈PPD≤6mm采样的位点，2组差异有统计学意义（P〈0．05）。牙龈卟啉单胞菌菌毛．fimA毒力基因型在牙龈卟啉单胞菌感染者的检出率分别是：Ⅱ fimA型为37．5％，ⅣfimA型为22．5％。结论：维吾尔族慢性牙周炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌有较高的检出率。牙龈卟啉单胞菌存在fima毒力基因多态性。     

牙周基础治疗对口腔幽门螺杆菌的影响及其基因型关系的研究

目的 :明确牙周基础治疗与口腔幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori ,Hp)存在的关系。分析胃Hp与口腔Hp的基因型 ,以明确胃与口腔的Hp是否具有同源性。 方法 :选择 5 6例有慢性中度牙周炎且胃镜活检Hp感染阳性患者分为 2组。提取所有口腔样本中的DNA ,PCR扩增 ,比较药物治疗组与药物治疗加牙周基础治疗组治疗前后 2组口腔Hp检出率的差别。对比分析其中 5位患者和 1位家属胃和口腔PCR产物的序列。结果 :2组患者不同的治疗后口腔Hp检出率有显著性差别 ( 3 .0 %vs 2 6.1% ,P <0 .0 5 )。胃和口腔Hp的序列相比较 ,相同者 1例 ,可能相同者 1例 ,有 1～ 4个碱基不同者 2例。 1例患者及其家属口腔中均检出Hp ,两者的序列有 3个不同。 结论 :牙周基础治疗有助于口腔Hp的根除。口腔中有可能同时存在多个Hp菌株 ,口腔Hp与胃Hp感染的复发或再感染有关     

地中海贫血筛查指标的临床应用价值

目的探讨地中海贫血筛查指标的临床应用价值。方法采用红细胞脆性、平均红细胞体积(MCV)、血红蛋白电泳筛查地中海贫血可疑病例,并对可疑病例进行地中海贫血基因诊断和血清铁蛋白检查。结果①从3644例受检者中筛查出636例可疑地中海贫血患者,红细胞脆性、MCV、HbA2三者检出率分别为17.5%、17.1%、7.1%;可疑地中海贫血患者中,红细胞脆性<70%、MCV<80fL、HbA2≥3.5%的患者分别为100%、97.8%、40.4%。②可疑地中海贫血患者中,红细胞脆性<65%组与脆性为65%～70%组比较,地中海贫血基因诊断符合率差异有统计学意义(P<0.05),但后组基因诊断符合率仍然高达54.3%。③可疑地中海贫血患者中,MCV<80fL组与MCV≥80fL组比较,HbA2≥3.5%且MCV<80fL组与HbA2≥3.5%且MCV≥80fL组比较,地中海贫血基因诊断符合率差异无统计学意义(P>0.05)。④可疑地中海贫血患者中确诊缺铁性贫血、地中海贫血、地中海贫血合并缺铁性贫血比例分别为16.3%、67.0%、16.7%,地中海贫血筛查的特异性为83.7%。结论①红细胞脆性<70%是地中海贫血筛查最敏感简便的指标,宜作为产前检查地中海贫血筛查指标。②MCV<80fL是地中海贫血筛查的简便指标,但需要结合红细胞脆性、HbA2等红细胞参数提高检出率。③对筛查出的可疑地中海贫血患者必须同时进行地中海贫血基因检查和铁代谢检查。