乙肝病毒DNA阳性患儿家族成员的调查

本文对１４例ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性患儿的家庭成员２３人进行血清学检测，并收集２２例正常人血清为对照组。２３例家庭成员中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率为３４．８％（８／２３），明显高于对照组４．５％（１／２２），Ｐ＜０．０１。ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率在患儿的双亲为４０％（４／１０），而在其祖父母辈为３３．３３％（３／９），二者无显著差异（Ｐ＞０．０５）。提示乙肝病毒感染的家庭聚集性存在双亲或祖父母辈与患儿间的易感性相似。     

肝癌组织辅助性T细胞-2细胞因子强势分泌研究

目的　探讨人肝癌组织中辅助性T细胞亚群 (Th1/Th2 )细胞因子表达模式。方法　收集我科手术切除肝癌组织标本 15例 ,肝良性疾病或肝硬化门静脉高压手术患者肝组织标本 15例作为对照 ,β 肌动蛋白 (β actin)作为参照 ,采用半定量逆转录 聚合酶联反应 (RT PCR)方法检测人肝癌组织中γ 干扰素 (IFN γ)和白细胞介素 4(IL 4)mRNA的表达。结果　人肝癌组织中IFN γmRNA表达 (相对数 :1.18± 0 .3 1)比对照组肝组织中IFN γmRNA表达弱 (相对数 :1.86±0 .5 0 ) ,而IL 4mRNA表达 (相对数 :1.73± 0 .5 1)比对照组强 (相对数 :0 .94± 0 .41,P <0 .0 5 )。结论　人肝癌组织中Th1类细胞因子表达弱 ,Th2类细胞因子表达强 ,呈现Th2细胞因子表达模式 ,肝癌组织局部微环境处于免疫抑制状态 ,肿瘤细胞易发生免疫逃逸     

耐万古霉素肠球菌表型及基因型分析

目的：对耐万古霉素的肠球菌进行表型及基因型分析，了解临床耐万古霉素肠球菌(VRE)的流行状况。指导临床合理使用抗生素。方法：48株肠球菌，按常规方法进行鉴定，并采用琼脂筛选法对耐万古霉素肠球菌进一步筛选。将筛选出的3株耐万古霉素肠球菌，以多重PCR法进行基因分型。结果：共检出3株对万古霉素耐药肠球菌，其中1株为天然耐万古霉素株。基因型分析结果为1株VanA型，1株VanCl型，另1株基因型不明。结论：已发现3株VRE。临床应合理使用抗生素，以防止VRE的爆发流行。     

视蛋白基因启动子的克隆和鉴定

目的 克隆出视蛋白基因启动子。方法 以小鼠全基因组为模板，用PCR法克隆出目的大小的片断。然后连接到T-载体上作酶切鉴定，最后测序。结果 酶切结果与预期相符，测序结果与公布序列完全一致。结论 视蛋白基因启动子克隆成功。     

EphB4反义寡核苷酸对人脑胶质瘤细胞增殖、凋亡及迁移的作用

目的观察EphB4反义寡核苷酸(ASODN)对人脑胶质瘤细胞增殖、凋亡及迁移的影响,探讨EphB4的生物学功能。方法人工合成EphB4 ASODN,脂质体转染U87细胞。分别应用RT-PCR以及免疫组织化学染色方法检测EphB4 mRNA和蛋白质,评估阻抑效应;并应用MTT法和流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡;采用Boyden侵袭小室法检测细胞迁移和侵袭力。结果(1)由脂质体转染的EphB4 ASODN对U87细胞EphB4 mRNA和蛋白质表达具有不同程度的抑制作用,且呈现一定的时间-剂量依赖性,600nmol/LASODN作用于U87细胞72h,EphB4 mRNA相对表达量为0.30±0.05,EphB4蛋白表达水平亦明显减弱。(2)各实验组EphB4 ASODN对U87细胞增殖均具有抑制作用,呈明显时间-剂量依赖性;以600nmol/LASODN作用72h,U87细胞生长抑制率达到68.70%,而对照组则无明显抑制作用。(3)EphB4 ASODN诱导U87细胞凋亡呈剂量依赖性。(4)EphB4 ASODN组U87细胞的跨膜数为17.82±2.35,与空白对照组及NSODN组比较差异具有统计学意义(P<0.01)。结论EphB4在人脑胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭过程中发挥重要作用,可能成为脑胶质瘤基因治疗的一个新靶点。     

荧光定量PCR与ELISA法检测HBV-DNA结果分析

目的 :应用荧光定量PCR方法精确检测HBV -DNA的拷贝数 ,为临床判断病毒复制程度提供指标 ;对比分析荧光定量PCR方法和ELISA方法检测HBV -DNA的结果。方法 :用荧光定量PCR法检测 10 14例用ELISA法诊断为乙型肝炎病人的血清HBV -DNA拷贝数。结果 :10 14例病人中 ,病毒拷贝数≥ 1× 10 5的 4 99例 ,阳性率4 9.2 % ;HBeAg阳性患者的HBV -DNA拷贝数≥ 1× 10 5的阳性率显著高于HBeAg阴性患者。结论 :荧光定量PCR检测HBV病毒复制情况结果准确 ,对临床工作指导意义更大 ;HBeAg是一项重要指标。     

Toll样受体2胞外域及其氨基端和羧基端片段的克隆与序列分析

目的：为研究TLR2胞外域在肽聚糖诱导的信号转导中的功能，构建TLR2胞外域及其氨基端和羧基端片段真核表达载体。方法：提取HL－60细胞总RNA，以RT－PCR方法获取了TLR2胞外域cDNA片段，将其与pGEM-T Easy载体连接，转化E.coli JM109,建立了TLR2胞外域的cDNA克隆；籍此，又相继克隆了胞外域的氨基端和羧基端片段，然后将这三个片段克隆到真核表达载体pcDNA3中。结果：序列分析表明，与GenBank中的人TLR2全长cDNA序列比较，仅4个碱基不同，同源性为0．998。结论：成功获得了HL－60细胞TLR2胞外域及其氨基端和羧基端片段的克隆。     

直肠癌肠系膜静脉血CK20 mRNA的检测及其临床意义

目的　检测直肠癌肠系膜静脉血细胞角蛋白 2 0 (CK2 0 )mRNA ,并探讨其临床意义。方法　以RT -PCR方法检测 4 2例直肠癌术中肠系膜静脉血CK2 0mRNA。结果　 4 2例中 2 2例CK2 0mRNA阳性 ,阳性率 5 2 .4 %。随着病理分期的进展 ,肠系膜静脉血CK2 0mRNA阳性率升高 :DukesC +D期CK2 0mRNA阳性率高于DukesA +B期(P <0 .0 1)。随访发现 ,肠系膜静脉血阳性者远处转移率增高 (18.2 % )。结论　肠系膜静脉血CK2 0mRNA的检测可提高直肠癌临床分期的准确性 ;CK2 0mRNA阳性者 ,远处转移的可能性大。